公开(公告)号：CN104480133A

公开(公告)日：2015-04-01

申请号：CN201510003021.3

申请日：2015-01-06

Applicant: 厦门大学

Inventor： 章军 ,  徐虹 ,  丁旭东 ,  杜正伟 ,  郑天凌

IPC: C12N15/74 ,  C12R1/01

Abstract: 利用转座子介导外源基因导入螺旋藻的方法，涉及一种基因工程。以NCBI上已知的蓝藻的序列设计多组引物IS1～IS4，从蓝藻上克隆转座子元件即插入序列；供体质粒pEGFP-IS-IS-Km的超声转化和筛选：用EcoR Ⅰ酶切pEGFP-IS-IS-Km，获得线状质粒，两端各有一个IS序列，转化螺旋藻869s，以GFP和G418(nptII)筛选出插入突变的螺旋藻株。构建了包含gfp基因、nptII标记基因及转座子序列的螺旋藻整合筛选系统，以利用转座子随机插入突变来影响螺旋藻基因结构进而改变螺旋藻品质。可应用于螺旋藻突变文库的构建，还可进行外源基因的导入和表达，以及螺旋藻内源基因的反义抑制调控。

公开(公告)号：CN104450766A

公开(公告)日：2015-03-25

申请号：CN201510003572.X

申请日：2015-01-06

Applicant: 厦门大学

Inventor： 章军 ,  徐虹 ,  丁旭东 ,  杜正伟 ,  郑天凌

IPC: C12N15/74 ,  C12R1/01

Abstract: 一种螺旋藻基因转化筛选的方法，涉及一种基因工程。1)构建获得包含有两个插入序列、gfp基因、nptII标记基因和Ap标记基因的螺旋藻整合筛选质粒pEGFP-IS-IS-Km；2)供体质粒pEGFP-IS-IS-Km的超声转化和筛选：用EcoRⅠ酶切pEGFP-IS-IS-Km，获得线状质粒，两端各有一个IS序列，与转座子特征结构类似，用实验室超声转化法转化螺旋藻869s，以苄青霉素和G418(nptII)筛选出插入突变的螺旋藻株，两步筛选法筛选突变株，抗性平板初筛，梯度稀释后利用荧光显微镜挑出单根绿色荧光藻，然后超声波复筛，进行扩大培养，筛选出优良性状藻株。