公开(公告)号：CN102575293A

公开(公告)日：2012-07-11

申请号：CN201080042740.1

申请日：2010-07-23

Applicant: 哈罗基因公司

Inventor： 奥洛夫·艾瑞克森 ,  马格纳斯·伊萨克森 ,  亨瑞克·约翰森 ,  阿勒弗·兰德恩

IPC: C12Q1/68

CPC classification number: C12Q1/6855

Abstract: 本发明提供了用于检测或富集核酸样品中存在的靶标脱氧核糖核酸(DNA)的方法，所述方法包括：(a)使核酸样品片段化，产生包括靶标片段在内的核酸片段，所述靶标片段含有所述靶标DNA；(b)使得包括所述靶标片段在内的所述片段至少部分被单链化，其中单链化的部分包括末端部分，并且其中所述单链化部分的长度足以允许所述靶标片段单链化部分的至少一部分与步骤(c)的探针杂交；(c)将步骤(b)的至少部分单链化的片段与单个靶标特异性核酸探针的寡核苷酸A和B接触，其中(i)寡核苷酸A是下述单链寡核苷酸，所述单链寡核苷酸在一端包含含有与所述靶标片段的所述单链化部分的至少一部分在序列上互补的至少10个核苷酸的第一靶标特异性部分，并且在另一端包含含有与探针的寡核苷酸B的至少一部分(包括一端)互补的核苷酸序列的第二非靶标特异性部分，和(ii)寡核苷酸B是下述单链寡核苷酸，所述单链寡核苷酸可含有或带有用于检测和/或富集所述靶标片段的至少一种元件，并且其至少一部分(包括一端)与寡核苷酸A的第二非靶标特异性部分在序列上互补，使得所述靶标片段通过与寡核苷酸A的第一靶标特异性部分杂交而变得与所述探针退火，导致每个靶标片段仅发生一次靶标特异性探针结合事件；(d)将所述探针的寡核苷酸B与所述靶标片段的单链化部分中与所述探针寡核苷酸A杂交的部分连接，生产探针-靶标片段杂交体；和(e)检测或富集所述探针-靶标片段杂交体。本发明还提供了在本发明方法中使用的试剂盒。

公开(公告)号：CN102639718A

公开(公告)日：2012-08-15

申请号：CN201080055136.2

申请日：2010-12-03

Applicant: 哈罗基因公司

Inventor： 奥洛夫·艾瑞克森 ,  马格纳斯·伊萨克森 ,  亨瑞克·约翰森 ,  弗雷德里克·罗斯 ,  西蒙·弗雷德里克松 ,  马兹·尼尔森

IPC: C12Q1/68

CPC classification number: C12Q1/6837 ,  C12Q2565/519 ,  C12Q2531/125 ,  C12Q2563/131 ,  C12Q2525/161 ,  C12Q2521/501

Abstract: 本发明提供了用于扩增核酸样品中的至少一种靶核酸的方法，其包括：(a)使核酸样品片段化，以产生至少一种的靶片段，靶片段包含靶核酸并包含两个探针互补部分，其中两个探针互补部分的至少一个位于靶片段的末端；(b)使片段化的核酸样品与至少一种探针接触，探针提供有固定化部件并任选地通过部件的方式固定在固相上，探针包含与靶片段的探针互补部分在序列上互补的两个靶片段互补部分，其中探针的部分可以是相邻的，或可被居间非靶片段互补部分分开；(c)使片段化的核酸样品成为单链的，其中该步骤在步骤(b)之前或与步骤(b)同时或在步骤(b)之后发生；(d)允许靶片段的探针互补部分与探针的靶片段互补部分杂交；(e)如果在步骤(b)中提供的探针未被固定化，通过固定部件的方式使探针-靶片段杂交体在固相上固定；(f)将未固定的核酸片段与固相分开；(g)使固相与连接酶连接以直接或间接连接靶片段的5’和3’端，由此环化靶片段，其中如果靶片段的探针互补部分之一没有位于靶片段的末端，通过瓣状内切核酸酶或外切核酸酶的作用形成除了探针互补部分所位于的末端之外的另一可连接末端；和(h)扩增所述环化的靶片段。还提供了在本发明的方法中使用的试剂盒。