一种嵌合的肿瘤特异性基因表达调控盒及其应用

    公开(公告)号:CN102051358A

    公开(公告)日:2011-05-11

    申请号:CN200910198575.8

    申请日:2009-11-10

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属于生物医药技术领域,具体提供一种嵌合的肿瘤特异性基因表达调控盒。它包含肿瘤特异性基因启动子、肿瘤特异性翻译调控元件5’端非翻译区、多克隆位点、基因表达增强子和多聚腺苷酸信号区;肿瘤特异性基因启动子、肿瘤特异性翻译调控元件5’端非翻译区、基因表达增强子和多聚腺苷酸信号区依次连接,多克隆位点位于肿瘤特异性翻译调控元件5’端非翻译区和多聚腺苷酸信号区之间,与基因表达增强子相互独立。本发明通过有效调控肿瘤治疗基因的表达使之局限于肿瘤细胞内,显著提高了治疗基因表达的特异性,进而有效提高肿瘤基因治疗的安全性,降低其对正常组织和细胞的损害。

    一种pCMV-RBE-TK1-N2-EF1α-hFIXml质粒及其构建方法和应用

    公开(公告)号:CN103409464B

    公开(公告)日:2018-08-24

    申请号:CN201310338102.X

    申请日:2013-08-06

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属生物技术领域,具体为一种质粒pCMV‑RBE‑TK1‑N2‑EF1α‑hFIXml及其构建方法和应用。该质粒含CMV启动子‑RBE元件‑TK1基因的筛选标记的人凝血因子IX表达框架。该质粒和rep表达质粒共转染哺乳动物细胞可用于构建定点整合于AAVS1位点表达人类凝血因子IX的稳定细胞。使用该表达质粒制备稳定表达人类凝血因子IX的稳定细胞一方面正负双重筛选可以防止细胞随机突变导致的非整合细胞耐药对转基因细胞群纯净度的影响,提高表达效率;另一方面可以有效预防插入突变导致的基因突变和癌蛋白表达风险。通过常规分子生物学方法取代人类凝血因子IX表达框架可以构建表达其它基因的具有定点整合以及正负筛选的质粒。

    一种嵌合的肿瘤特异性基因表达调控盒及其应用

    公开(公告)号:CN102051358B

    公开(公告)日:2012-08-22

    申请号:CN200910198575.8

    申请日:2009-11-10

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属于生物医药技术领域,具体提供一种嵌合的肿瘤特异性基因表达调控盒。它包含肿瘤特异性基因启动子、肿瘤特异性翻译调控元件5’端非翻译区、多克隆位点、基因表达增强子和多聚腺苷酸信号区;肿瘤特异性基因启动子、肿瘤特异性翻译调控元件5’端非翻译区、基因表达增强子和多聚腺苷酸信号区依次连接,多克隆位点位于肿瘤特异性翻译调控元件5’端非翻译区和多聚腺苷酸信号区之间,与基因表达增强子相互独立。本发明通过有效调控肿瘤治疗基因的表达使之局限于肿瘤细胞内,显著提高了治疗基因表达的特异性,进而有效提高肿瘤基因治疗的安全性,降低其对正常组织和细胞的损害。

    用于检测整合酶ΦC31功能的真核细胞系统及其制备方法

    公开(公告)号:CN1827781A

    公开(公告)日:2006-09-06

    申请号:CN200510112200.7

    申请日:2005-12-29

    Applicant: 复旦大学

    Abstract: 本发明属生物技术和基因治疗技术领域,具体涉及一种用于检测整合酶ΦC31功能的真核细胞系统及其制备方法。该检测系统由重组报告PB[EGFP]转染人胚胎肾细胞系293后用G418筛选,挑选出单克隆细胞而获得,其中,PB[EGFP]是利用pEGFP-N2载体,在增强型烟草花叶病毒启动子(CMVIE)之后,顺序插入特异序列attP和attB,然后在其间加上一段牛生长因子的多聚腺苷酸而构成。该细胞系统可以评估出转染、转导、转化等多种途径表达的ΦC31整合酶,及其突变体等的活性和功能。该检测系统操作简便,准确性高,重复性好,是整合酶ΦC31在哺乳动物细胞中应用的重要定量评估系统。

    一种新布尼亚病毒NP蛋白的编码序列及其应用

    公开(公告)号:CN102703474A

    公开(公告)日:2012-10-03

    申请号:CN201210170810.2

    申请日:2012-05-29

    Applicant: 复旦大学

    Inventor: 陈金中 沈琦

    Abstract: 本发明属于生物制品技术领域,具体涉及一种全合成经密码子优化的新布尼亚病毒NP蛋白编码序列及其应用。新布尼亚病毒NP蛋白编码序列如SEQIDNo.1所示。将编码序列SEQIDNo.1克隆到pQE30表达质粒,使用EColi.M15表达重组蛋白,以Hitrap纯化重组新布尼亚病毒NP蛋白。本发明的优点在于通过对NP蛋白编码按EColi.密码子偏好重新设计,人工合成,提高了EColi.表达新布尼亚病毒NP蛋白的效率,降低了制备重组新布尼亚病毒NP蛋白的成本,提高了产品的纯度。

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