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公开(公告)号：CN111676201A
公开(公告)日：2020-09-18
申请号：CN202010617928.X
申请日：2020-06-30
Applicant: 宁波酶赛生物工程有限公司
Abstract: 本发明公开了一种具有立体选择性的酮还原酶和使用这种酮还原酶的一种(S)-3-羟基丁酸乙酯的不对称合成方法，包括：作为反应底物乙酰乙酸乙酯在具有立体选择性的酮还原酶的催化下生成目标产物(S)-3-羟基丁酸乙酯。本发明巧妙利用具有立体选择性的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的酮还原酶，一步反应即成功合成了高浓度的(S)-3-羟基丁酸乙酯。并且该不对称合成方法的整体工艺简单，反应条件温和，绿色环保，容易实施，而且，该酮还原酶具有极高的手性选择性，能够以较高的转化率催化生成目标产物，且该目标产物的ee值足够高。总之，本发明所提供的(S)-3-羟基丁酸乙酯的不对称合成方法特别适合大规模工业化生产，因此具有广阔的应用前景。
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公开(公告)号：CN110914288A
公开(公告)日：2020-03-24
申请号：CN201880023540.8
申请日：2018-05-09
Applicant: 宁波酶赛生物工程有限公司
Abstract: 本发明提供了可用于在工业相关条件下不对称合成β‑羟基‑α‑氨基酸的工程化醛缩酶多肽。本公开内容还提供了编码工程化醛缩酶多肽的多核苷酸、能够表达工程化醛缩酶多肽的宿主细胞和使用工程化醛缩酶多肽产生β‑羟基‑α‑氨基酸的方法。与其他制备方法相比，使用本发明的工程化醛缩酶多肽用于β‑羟基‑α‑氨基酸的制备，所得产物中立体异构体纯度高，反应条件温和，具有很好的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN110777100A
公开(公告)日：2020-02-11
申请号：CN201911205619.5
申请日：2019-11-29
Applicant: 宁波酶赛生物工程有限公司
Abstract: 本发明适用于微生物技术领域，提供了一种大肠杆菌发酵方法，包括：将大肠杆菌接种到发酵底液后，加入发酵补料进行预补料，然后恒温培养发酵；当需要补料时，以递增的补料速度加入发酵补料；当发酵液OD600达到20~35时，停止补料，并添加诱导培养基诱导；继续加入发酵补料至诱导剂消耗完毕；提高加料速度并继续加入发酵补料。本发明实施例提供的大肠杆菌发酵方法，当检测到需要补料时，以递增的补料速度进行补料，能够控制大肠杆菌的生长密度以及残糖浓度，在该条件下添加诱导培养基诱导蛋白表达，配合两段恒速补料策略，显著提高了目标蛋白表达量，在产业化培养时，仍能保持较高的工艺稳定性。
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公开(公告)号：CN119570777A
公开(公告)日：2025-03-07
申请号：CN202311146836.8
申请日：2023-09-06
Applicant: 宁波酶赛生物工程有限公司
IPC: C12N11/087 , C12N9/86 , C12P13/02 , C12P41/00
Abstract: 本申请制备了一种固定化海因酶，其中所述的固定化海因酶包含固定化载体、交联剂以及与固定化载体通过交联剂以化学键连接的重组海因酶。并且，固定化后的海因酶通过双功能交联剂再交联，再交联的固定化酶能够以更高的稳定性将3‑异丁基戊二酰亚胺转化为(R)‑(‑)‑3‑(氨甲酰甲基)‑5‑甲基己酸。
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公开(公告)号：CN117425732A
公开(公告)日：2024-01-19
申请号：CN202280038016.4
申请日：2022-10-30
Applicant: 宁波酶赛生物工程有限公司
Abstract: 本公开内容提供了一种能够用于催化3‑异丁基戊二酰亚胺不对称水解生成(R)‑(‑)‑3‑(氨甲酰甲基)‑5‑甲基己酸的工程化多肽，该多肽立体选择性高、催化活性高、工艺稳定性及热稳定性好、且耐受高产物浓度，具有很好的工业应用价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112251478B
公开(公告)日：2022-08-30
申请号：CN202011159786.3
申请日：2020-10-26
Applicant: 宁波酶赛生物工程有限公司
Abstract: 本发明公开了一种S‑1‑BOC‑3羟基哌啶的酶催化制备方法，所述酶催化制备方法以1‑BOC‑3哌啶酮为底物，在辅酶、辅酶循环体系和酮还原酶存在条件下反应，得到含S‑1‑BOC‑3羟基哌啶的反应液；所述的酮还原酶编码基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示，所述酮还原酶的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示。与其他S‑1‑BOC‑3羟基哌啶的制备方法相比，本发明提供的酮还原酶催化合成S‑1‑BOC‑3羟基哌啶的路线简单，不仅避免了化学合成法的繁琐步骤，而且还解决了现有酶催化技术中辅酶用量大、单位酶活低、底物1‑BOC‑3哌啶酮耐受浓度低的问题。底物浓度可提高到400g/L，辅酶用量0.1g/L，反应24小时转化率高达99.9％，光学纯度e.e％为99.9％，降低了S‑1‑BOC‑3羟基哌啶的生产成本，经济环保，具有很好的工业应用前景。
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公开(公告)号：CN112695048A
公开(公告)日：2021-04-23
申请号：CN202110102561.2
申请日：2021-01-26
Applicant: 宁波酶赛生物工程有限公司
Abstract: 本发明适用于生物化学技术领域，提供了一种L‑赖氨酸脱羧酶与酶法合成1,5‑戊二胺的方法，该L‑赖氨酸脱羧酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；该酶法合成1,5‑戊二胺的方法包括以下步骤：将L‑赖氨酸盐酸盐与磷酸吡哆醛和L‑赖氨酸脱羧酶进行脱羧反应，得到所述1,5‑戊二胺。本发明所使用L‑赖氨酸脱羧酶能够适用于高浓度的L‑赖氨酸盐酸盐，具有高效的催化作用。并且，在所述酶法合成1,5‑戊二胺的方法中，湿菌体全细胞用量低，pH范围广，反应条件温和，反应中无需添加缓冲液，反应时无需使用盐酸进行中和，从而大大简化了采用化学工艺合成1,5‑戊二胺的繁琐步骤。
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公开(公告)号：CN110777100B
公开(公告)日：2022-08-26
申请号：CN201911205619.5
申请日：2019-11-29
Applicant: 宁波酶赛生物工程有限公司
Abstract: 本发明适用于微生物技术领域，提供了一种大肠杆菌发酵方法，包括：将大肠杆菌接种到发酵底液后，加入发酵补料进行预补料，然后恒温培养发酵；当需要补料时，以递增的补料速度加入发酵补料；当发酵液OD600达到20~35时，停止补料，并添加诱导培养基诱导；继续加入发酵补料至诱导剂消耗完毕；提高加料速度并继续加入发酵补料。本发明实施例提供的大肠杆菌发酵方法，当检测到需要补料时，以递增的补料速度进行补料，能够控制大肠杆菌的生长密度以及残糖浓度，在该条件下添加诱导培养基诱导蛋白表达，配合两段恒速补料策略，显著提高了目标蛋白表达量，在产业化培养时，仍能保持较高的工艺稳定性。
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公开(公告)号：CN114686465A
公开(公告)日：2022-07-01
申请号：CN202210308977.4
申请日：2022-03-28
Applicant: 宁波酶赛生物工程有限公司
Abstract: 本发明公开了一种水解酶，所述水解酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，同时提供了一种使用该水解酶合成(R)‑(‑)‑3‑(氨甲酰甲基)‑5‑甲基己酸的方法，以3‑异丁基戊二酰亚胺为底物，在水解酶的催化下合成产物(R)‑(‑)‑3‑(氨甲酰甲基)‑5‑甲基己酸。本发明提供的(R)‑(‑)‑3‑(氨甲酰甲基)‑5‑甲基己酸酶催化合成方法，整体工艺简单，反应条件温和，转化率高，具有极高的手性选择性，且绿色环保，适合大规模工业化生产，应用前景广阔。
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公开(公告)号：CN112251478A
公开(公告)日：2021-01-22
申请号：CN202011159786.3
申请日：2020-10-26
Applicant: 宁波酶赛生物工程有限公司
Abstract: 本发明公开了一种S‑1‑BOC‑3羟基哌啶的酶催化制备方法，所述酶催化制备方法以1‑BOC‑3哌啶酮为底物，在辅酶、辅酶循环体系和酮还原酶存在条件下反应，得到含S‑1‑BOC‑3羟基哌啶的反应液；所述的酮还原酶编码基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO:1所示，所述酮还原酶的氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示。与其他S‑1‑BOC‑3羟基哌啶的制备方法相比，本发明提供的酮还原酶催化合成S‑1‑BOC‑3羟基哌啶的路线简单，不仅避免了化学合成法的繁琐步骤，而且还解决了现有酶催化技术中辅酶用量大、单位酶活低、底物1‑BOC‑3哌啶酮耐受浓度低的问题。底物浓度可提高到400g/L，辅酶用量0.1g/L，反应24小时转化率高达99.9％，光学纯度e.e％为99.9％，降低了S‑1‑BOC‑3羟基哌啶的生产成本，经济环保，具有很好的工业应用前景。
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