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公开(公告)号：CN117660514A
公开(公告)日：2024-03-08
申请号：CN202311662930.9
申请日：2023-11-30
Applicant: 安徽大学
Abstract: 本发明公开了一种枯草芽孢杆菌自诱导高效蛋白表达系统的构建及应用，属于基因工程以及微生物工程技术领域。本发明的枯草芽孢杆菌重组菌以费氏弧菌的LuxI/R系统为自诱导体系，以pBH‑amyZ1为载体骨架，以枯草芽孢杆菌WB600为表达宿主。通过对自诱导体系中诱导模块PluxI启动子的‑10区和‑35区进行改造，获得的重组菌经摇瓶发酵后胞外AmyZ1活性是对照的1.83倍，达到213.67U/mL。最后，以蔗糖酶InvDz13和果聚糖酶39为报告蛋白时，获得的重组菌发酵后的胞外InvDz13和39活性分别是原始对照菌的2和1.6倍，证明了本发明中所构建的枯草芽孢杆菌自诱导高效蛋白表达系统具有普适性。
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公开(公告)号：CN119552836A
公开(公告)日：2025-03-04
申请号：CN202411662540.6
申请日：2024-11-20
Applicant: 安徽大学
Abstract: 本发明公开了一种灰盖鬼伞菌来源的漆酶及其重组表达菌株和高效表达方法，属于微生物学和生物工程技术领域。本发明以黑曲霉MA70.15为实验菌株，采用随机整合策略，使得pC3‑PcitA‑SPGlaA‑lcc9‑TtrpC‑pyrG表达载体以连续九个拷贝的形式整合在了宿主菌柠檬酸合酶的启动子上游区域。本发明为了探究发酵培养基中微粒及渗透调节剂对重组黑曲霉发酵产漆酶的影响，添加了不同种类及浓度的微粒和渗透调节剂，使得重组菌AnRcgL1的摇瓶发酵漆酶酶活达到1566.7 U/L，1 L发酵罐发酵酶活达到1961 U/L，成功实现了漆酶Lcc9在黑曲霉中的重组高效表达。
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公开(公告)号：CN116814594A
公开(公告)日：2023-09-29
申请号：CN202310729760.5
申请日：2023-06-16
Applicant: 安徽大学
Abstract: 本发明公开了一种灰盖鬼伞来源的蛋白酶基因的重组表达及其重组酶降解大豆渣的应用，属于分子生物学和基因工程领域。本发明实现了灰盖鬼伞来源的蛋白酶基因mpr的同源重组表达。获得的灰盖鬼伞重组菌株经摇瓶发酵后的胞外蛋白酶酶活可达41000U/L左右。纯化后的蛋白酶的比酶活为204.38U/mg。酶学性质分析结果表明，该蛋白酶的最适温度为50℃，且在30‑50℃范围内保持1h后该蛋白酶能保持70％以上的酶活；该蛋白酶的最适pH为8.0，在pH范围6.5‑9.0时，该蛋白酶的酶活效率能保持在70％以上，同时，该蛋白酶可有效将大豆渣蛋白水解成小分子肽。
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公开(公告)号：CN116286575B
公开(公告)日：2023-10-27
申请号：CN202310120217.5
申请日：2023-02-03
Applicant: 安徽大学绿色产业创新研究院
Abstract: 本发明公开了一种利用枯草芽孢杆菌高效表达生淀粉α‑淀粉酶的方法，属于基因工程和生物工程领域。本发明的枯草芽孢杆菌重组菌以pBHVY为载体骨架，以来源于Pontibacillussp.ZY的生淀粉α‑淀粉酶基因为目的基因，以枯草芽孢杆菌WB600为表达宿主，改造了启动子，筛选了信号肽，优化了RBS序列，并对获得的重组菌进行了3‑L罐发酵补料工艺优化。利用本发明枯草芽孢杆菌重组菌可高效表达生淀粉α‑淀粉酶，以其为生产菌株，摇瓶发酵48h，发酵上清液中生淀粉α‑淀粉酶的酶活为4824.2U/mL，经3‑L罐发酵培养后胞外生淀粉α‑淀粉酶的酶活可高达49082U/mL，是目前文献报道的最高水平。
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公开(公告)号：CN117660281A
公开(公告)日：2024-03-08
申请号：CN202311648356.1
申请日：2023-11-29
Applicant: 安徽大学
Abstract: 本发明公开了一种利用枯草芽孢杆菌高效表达蔗糖酶的方法，属于基因工程和生物工程领域。本发明的枯草芽孢杆菌重组菌以pBHSS4为载体骨架，以来源于解单端孢菌素微杆菌的蔗糖酶基因为目的基因，以枯草芽孢杆菌WB600为表达宿主，成功实现了InvDz13蔗糖酶的表达，并通过筛选得到最佳信号肽SPYomL、共表达伴侣蛋白复合物GrpE‑DnaK‑DnaJ以及共表达分泌途径元件SppA，进一步提高了蔗糖酶的表达水平。利用本发明枯草芽孢杆菌重组菌可高效表达蔗糖酶，以其为生产菌株，摇瓶发酵上清中蔗糖酶的酶活最高达到61.14U/mL，加快了蔗糖酶InvDz13工业化生产及应用的进程。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN117568368A
公开(公告)日：2024-02-20
申请号：CN202311551771.5
申请日：2023-11-21
Applicant: 安徽大学
Abstract: 本发明公开了一种通过沉默灰盖鬼伞胞外蛋白酶高效表达漆酶Lcc5的方法，属于分子生物学和生物工程领域。本发明通过基因干扰技术，实现在丝状真菌灰盖鬼伞中干扰胞外金属蛋白酶的表达，继而提高灰盖鬼伞对漆酶Lcc5的表达。获得的金属蛋白酶干扰菌株经过摇瓶培养以及1‑L发酵罐培养过后，漆酶的表达提高70％左右。灰盖鬼伞金属蛋白酶经过干扰过后，该菌株的生物量发生明显的降低。同时，灰盖鬼伞胞外金属蛋白酶被干扰后，降低菌株生长以及孢子数量，但是，对于灰盖鬼伞表达漆酶的能力却得到提高，为丝状真菌灰盖鬼伞表达系统的发展提供了新的研究思路。
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公开(公告)号：CN117187084A
公开(公告)日：2023-12-08
申请号：CN202310868057.2
申请日：2023-07-14
Applicant: 安徽大学
Abstract: 本发明公开了一种黑曲霉重组表达担子真菌漆酶的方法，属于微生物学和生物工程技术领域。本发明以黑曲霉MA70.15为实验菌株，系统探索了原生质体制备中的酶解液组成、菌丝培养方式、酶解时间、酶解温度和菌株培养时间对原生质体制备的影响，获得了一种高效制备黑曲霉原生质体的方法，使原生质体的数目提升了约5倍，数目达到2.2×106个/mL。在上述基础上，利用聚乙二醇介导法将质粒转入到黑曲霉原生质体中，转化子数目提升约4倍，实现了黑曲霉原生质体的高效遗传转化。通过启动子优化，实现了灰盖鬼伞漆酶Lcc9的有效表达，酶活约150U/L。本发明将进一步促进黑曲霉表达系统的发展。
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公开(公告)号：CN117660417A
公开(公告)日：2024-03-08
申请号：CN202311550168.5
申请日：2023-11-20
Applicant: 安徽大学
Abstract: 本发明公开了一种在枯草芽孢杆菌中胞外表达β‑葡萄糖苷酶的方法，属于微生物学和生物工程技术领域。本发明实现了海洋微生物宏基因组来源的β‑葡萄糖苷酶在枯草芽孢杆菌中胞外分泌表达，并证明了其在枯草芽孢杆菌中是以非经典分泌途径进行胞外表达。然后，通过对β‑葡萄糖苷酶自身氨基酸序列中影响其分泌效率的关键疏水区域I266‑Q269进行改造，获得的突变体提高了β‑葡萄糖苷酶在枯草芽孢杆菌中的胞外表达水平，最终胞外β‑葡萄糖苷酶活性为1.42U/mL，是对照菌株的1.97倍。本发明将加深研究人员对枯草芽孢杆菌非经典分泌途径的理解，促进利用枯草芽孢杆菌非经典分泌途径高效表达目的蛋白。
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公开(公告)号：CN117660377A
公开(公告)日：2024-03-08
申请号：CN202311483988.7
申请日：2023-11-07
Applicant: 安徽大学
Abstract: 本发明涉及一种在灰盖鬼伞中高效同源重组表达担子菌漆酶的方法，属于基因工程及发酵工程领域。本发明以来源于灰盖鬼伞FA2222的漆酶酶基因lcc5为目的基因、以灰盖鬼伞FA2222为表达宿主构建了同源重组表达漆酶的灰盖鬼伞重组菌Cclcc5‑13。在此基础上，利用RNA干扰技术对灰盖鬼伞FA2222基因组中的关键几丁质酶基因ChiE2进行沉默表达，获得灰盖鬼伞重组菌Cclcc5‑antiChiE2‑5。经3‑L罐发酵后发现，其胞外漆酶活性及漆酶生产效率分别为38.2U/mL和0.35U/mL·h，分别是对照菌的1.5和1.8倍，实现了漆酶在灰盖鬼伞中的高效同源重组表达。
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公开(公告)号：CN116286575A
公开(公告)日：2023-06-23
申请号：CN202310120217.5
申请日：2023-02-03
Applicant: 安徽大学绿色产业创新研究院
Abstract: 本发明公开了一种利用枯草芽孢杆菌高效表达生淀粉α‑淀粉酶的方法，属于基因工程和生物工程领域。本发明的枯草芽孢杆菌重组菌以pBHVY为载体骨架，以来源于Pontibacillussp.ZY的生淀粉α‑淀粉酶基因为目的基因，以枯草芽孢杆菌WB600为表达宿主，改造了启动子，筛选了信号肽，优化了RBS序列，并对获得的重组菌进行了3‑L罐发酵补料工艺优化。利用本发明枯草芽孢杆菌重组菌可高效表达生淀粉α‑淀粉酶，以其为生产菌株，摇瓶发酵48h，发酵上清液中生淀粉α‑淀粉酶的酶活为4824.2U/mL，经3‑L罐发酵培养后胞外生淀粉α‑淀粉酶的酶活可高达49082U/mL，是目前文献报道的最高水平。
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