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公开(公告)号：CN106591255B
公开(公告)日：2019-07-02
申请号：CN201710024278.6
申请日：2017-01-13
Applicant: 山东省医药生物技术研究中心
Abstract: 本发明公开了一种人骨肉瘤细胞系MG‑63在外源表达人碱性磷酸酶糖蛋白中的应用，以及rhALP的外源表达方法，包括如下步骤：(1)构建含有rhALP的重组质粒；(2)将重组质粒整合至人骨肉瘤MG‑63细胞内，获得能够表达rhALP的人骨肉瘤MG‑63细胞；(3)培养上述能够表达rhALP的人骨肉瘤MG‑63细胞，提取目的蛋白。本发明利用癌细胞MG‑63快速增殖及糖基化修饰系统的特性，通过基因工程技术利用人源癌细胞表达重组人碱性磷酸酶rhALP。本发明构建rhALP的重组表达载体，筛选能高效表达rhALP的MG‑63细胞；纯化并检测重组rhALP的糖基化状态及其生物学活性。重组rhALP的表达量和活性得到了极大的提高。
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公开(公告)号：CN107119017A
公开(公告)日：2017-09-01
申请号：CN201710377297.7
申请日：2017-05-25
Applicant: 山东省医药生物技术研究中心
Abstract: 本发明公开了一种骨肉瘤细胞的无血清培养基，由碳水化合物、氨基酸、核苷酸、维生素、无机盐、微量元素和添加物组成；所述添加物是由终浓度为10‑100mg/L透明质酸、1‑10mg/L吐温‑80、0.1‑10mg/L绿原酸和0.5mg/L酚红组成。本发明首次提供了一种适用于骨肉瘤细胞大规模悬浮培养的无血清培养基，本发明的无血清培养基能适用于骨肉瘤细胞高密度悬浮培养和表达重组蛋白，本发明的无血清培养基中化学成分明确，制备简单，能够重复性地人工配制并且质量稳定，同时生产成本较低，为利用骨肉瘤细胞表达重组蛋白的规模化生产提供一种成本低廉的培养方法。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106591255A
公开(公告)日：2017-04-26
申请号：CN201710024278.6
申请日：2017-01-13
Applicant: 山东省医药生物技术研究中心
CPC classification number: C12N9/16 , C12N15/85 , C12N2800/107 , C12Y301/03001
Abstract: 本发明公开了一种人骨肉瘤细胞系MG‑63在外源表达人碱性磷酸酶糖蛋白中的应用，以及rhALP的外源表达方法，包括如下步骤：(1)构建含有rhALP的重组质粒；(2)将重组质粒整合至人骨肉瘤MG‑63细胞内，获得能够表达rhALP的人骨肉瘤MG‑63细胞；(3)培养上述能够表达rhALP的人骨肉瘤MG‑63细胞，提取目的蛋白。本发明利用癌细胞MG‑63快速增殖及糖基化修饰系统的特性，通过基因工程技术利用人源癌细胞表达重组人碱性磷酸酶rhALP。本发明构建rhALP的重组表达载体，筛选能高效表达rhALP的MG‑63细胞；纯化并检测重组rhALP的糖基化状态及其生物学活性。重组rhALP的表达量和活性得到了极大的提高。
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公开(公告)号：CN108484749A
公开(公告)日：2018-09-04
申请号：CN201810259860.5
申请日：2018-03-27
Applicant: 山东省医药生物技术研究中心(山东省病毒研究所)
Abstract: 本发明提供一种重组可溶性人源骨靶向干扰素γ-1b及其制备方法。其氨基酸序列包括重组干扰素γ-1b或其活性片段和骨靶向分子；所述骨靶向分子为针对成骨样干细胞筛选出的多肽适配子。本发明将骨靶向分子与干扰素γ-1b相融合，利用骨靶向分子的骨靶向特性，使干扰素γ-1b在骨组织内富集，从而提高干扰素γ-1b治疗骨组织疾病的特异性，减少用药量，降低毒副作用。同时，采用定点突变技术原理，替换干扰素γ-1b氨基酸序列中位于关键位点的疏水性氨基酸，并进一步采用大肠杆菌偏爱密码子，通过诱导条件的优化，最终实现了干扰素的可溶性表达，大幅度提高了干扰素γ-1b的生物学活性，制备方法简单，具有良好的应用开发前景。
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公开(公告)号：CN108484749B
公开(公告)日：2020-10-02
申请号：CN201810259860.5
申请日：2018-03-27
Applicant: 山东省医药生物技术研究中心(山东省病毒研究所)
Abstract: 本发明提供一种重组可溶性人源骨靶向干扰素γ‑1b及其制备方法。其氨基酸序列包括重组干扰素γ‑1b或其活性片段和骨靶向分子；所述骨靶向分子为针对成骨样干细胞筛选出的多肽适配子。本发明将骨靶向分子与干扰素γ‑1b相融合，利用骨靶向分子的骨靶向特性，使干扰素γ‑1b在骨组织内富集，从而提高干扰素γ‑1b治疗骨组织疾病的特异性，减少用药量，降低毒副作用。同时，采用定点突变技术原理，替换干扰素γ‑1b氨基酸序列中位于关键位点的疏水性氨基酸，并进一步采用大肠杆菌偏爱密码子，通过诱导条件的优化，最终实现了干扰素的可溶性表达，大幅度提高了干扰素γ‑1b的生物学活性，制备方法简单，具有良好的应用开发前景。
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公开(公告)号：CN107119017B
公开(公告)日：2020-05-26
申请号：CN201710377297.7
申请日：2017-05-25
Applicant: 山东省医药生物技术研究中心
Abstract: 本发明公开了一种骨肉瘤细胞的无血清培养基，由碳水化合物、氨基酸、核苷酸、维生素、无机盐、微量元素和添加物组成；所述添加物是由终浓度为10‑100mg/L透明质酸、1‑10mg/L吐温‑80、0.1‑10mg/L绿原酸和0.5mg/L酚红组成。本发明首次提供了一种适用于骨肉瘤细胞大规模悬浮培养的无血清培养基，本发明的无血清培养基能适用于骨肉瘤细胞高密度悬浮培养和表达重组蛋白，本发明的无血清培养基中化学成分明确，制备简单，能够重复性地人工配制并且质量稳定，同时生产成本较低，为利用骨肉瘤细胞表达重组蛋白的规模化生产提供一种成本低廉的培养方法。
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公开(公告)号：CN101121944A
公开(公告)日：2008-02-13
申请号：CN200610070393.9
申请日：2006-11-30
Applicant: 山东省医药生物技术研究中心
IPC: C12Q1/25
Abstract: 本发明公开了一种类风湿性关节炎关节滑液标志物，由肽基精氨酸脱亚胺酶4(PADI4)组成。本发明还公开了所述类风湿性关节炎关节液标志物在制备检测类风湿性关节炎的临床诊断试剂中的应用。利用本发明提出的类风湿性关节炎特异性抗原性标志物PADI4蛋白制备的类风湿性关节炎的临床诊断试剂，可为医院风湿科提供方便、快捷、灵敏的检测手段，具有极大的实用价值和广阔的推广应用前景。
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