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公开(公告)号：CN118652354B
公开(公告)日：2025-04-04
申请号：CN202410964977.9
申请日：2024-07-18
Applicant: 扬州大学
IPC: C07K19/00 , C12N9/02 , C12N15/85 , C12N15/62 , G01N33/569 , G01N33/58 , G01N33/535 , G01N33/533 , G01N33/543
Abstract: 本发明公开了一种猪盖他病毒的融合抗原、试剂盒及其制备方法和应用，所述盖他病毒的融合抗原，主要采用将高斯萤光素酶基因与密码子优化的GETV E2抗原基因进行重组获得表达载体，随后，将含有GLuc‑E2的表达载体转染到哺乳动物细胞系中，GLuc‑E2蛋白会以分泌形式表达于细胞上清中。无需进行蛋白纯化步骤，直接收取细胞上清即可用于疾病的检测。本发明特异性强，与非洲猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒、猪伪狂犬病毒、猪日本脑炎病毒不发生交叉反应。
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公开(公告)号：CN115073613B
公开(公告)日：2025-02-11
申请号：CN202210747717.7
申请日：2022-06-28
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一种融合蛋白GLuc‑p30及其制备方法和应用，以非洲猪瘟的p30蛋白为诊断抗原，建立了一种基于荧光素酶免疫沉淀系统的非洲猪瘟抗体检测方法，该方法通过DNA转染真核细胞制备荧光素酶与p30的融合抗原，将该抗原分泌到细胞外，融合抗原与血清样本中的非洲猪瘟抗体结合后，被金黄色葡萄球菌A蛋白偶联的磁珠捕获，经荧光素酶试验检测与磁珠特异性结合的融合抗原；本发明使用的真核细胞表达的病毒抗原含有磷酸化等翻译后修饰，与感染情况下表达的病毒蛋白更相近，且无需纯化，简化了抗原的准备过程；与现有的间接ELISA相比，本发明的检测方法具有更好的检测的灵敏性和特异性；本发明检测方法具有简单、敏感、特异、价廉等优点，可以满足大规模检测的要求。
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公开(公告)号：CN114395579B
公开(公告)日：2024-04-19
申请号：CN202111276598.3
申请日：2021-10-29
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种基因I型与基因III型日本脑炎病毒感染性克隆及其构建方法与应用，属于分子生物学技术领域。本发明通过设计四对保守引物，分四段一次扩增出涵盖基因I型与基因III型JEV基因组全长的片段，基于DNA片段末端的同源性，利用酵母菌中的转化偶联重组技术，将分段的病毒基因组片段与线性化载体进行同源重组，一次性分别构建出携带基因I型与基因III型JEV基因组全长的重组质粒。重组质粒线性化处理后，利用T7启动子经体外转录出病毒RNA，RNA转染BHK‑21细胞后即可获得感染性克隆病毒。本发明可在酵母菌中稳定传代10代以上，不存在基因组本身序列的突变、缺失或外源序列的插入。
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公开(公告)号：CN115786280A
公开(公告)日：2023-03-14
申请号：CN202210997589.1
申请日：2022-08-19
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一株稳定表达红色荧光蛋白mCherry的重组GI型日本脑炎病毒及其构建方法与应用。具体地，本发明利用重组克隆技术，将一段C38‑mCherry‑T2A基因序列SEQ ID NO.1插入到GI型日本脑炎病毒基因组的5′UTR与C基因之间，构建获得含有T7启动子的重组病毒感染性克隆。利用体外转录技术获得重组病毒的基因组RNA全长，并转染至BHK‑21细胞中，当细胞出现典型的病变时，收取细胞上清即可获得表达mCherry蛋白的重组病毒。该重组病毒能够稳定高效地表达mCherry蛋白，插入的mCherry基因在病毒连续传代过程中具有遗传稳定性，且不影响病毒蛋白的翻译、加工以及病毒的复制能力。本发明所述的稳定表达红色荧光蛋白mCherry的重组GI型日本脑炎病毒在抗病毒药物筛选方面具有广泛的应用价值。
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公开(公告)号：CN115725622A
公开(公告)日：2023-03-03
申请号：CN202211147357.3
申请日：2022-09-19
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一株表达ASFV P30蛋白的重组GI型日本脑炎病毒及其构建方法与应用，利用同源重组技术将ASFV P30蛋白基因克隆入上游设置T7启动子的GI型日本脑炎病毒基因组中的5′UTR与C基因之间；P30蛋白基因的上游携带有日本脑炎病毒C基因的前102个碱基序列，保证了重组病毒的稳定；P30蛋白基因的下游含有T2A序列，保证了ASFV P30蛋白能够被正确的剪切。获得重组病毒的基因组全长cDNA后，利用T7启动子进行体外转录，获得病毒RNA并转染BHK‑21细胞，待细胞出现典型的细胞病变时，收集细胞上清即可获得表达ASFV P30蛋白的重组GI型日本脑炎病毒。该重组病毒具有遗传稳定型，能够稳定、高效的表达ASFV P30蛋白。本发明可快速获得含有ASFV和GI型JEV免疫原的重组病毒，为开发多效价疫苗奠定基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN114395579A
公开(公告)日：2022-04-26
申请号：CN202111276598.3
申请日：2021-10-29
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种基因I型与基因III型日本脑炎病毒感染性克隆及其构建方法与应用，属于分子生物学技术领域。本发明通过设计四对保守引物，分四段一次扩增出涵盖基因I型与基因III型JEV基因组全长的片段，基于DNA片段末端的同源性，利用酵母菌中的转化偶联重组技术，将分段的病毒基因组片段与线性化载体进行同源重组，一次性分别构建出携带基因I型与基因III型JEV基因组全长的重组质粒。重组质粒线性化处理后，利用T7启动子经体外转录出病毒RNA，RNA转染BHK‑21细胞后即可获得感染性克隆病毒。本发明可在酵母菌中稳定传代10代以上，不存在基因组本身序列的突变、缺失或外源序列的插入。
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公开(公告)号：CN114395583B
公开(公告)日：2024-03-29
申请号：CN202111284075.3
申请日：2021-11-01
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明公开了一种表达分泌型荧光素酶的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的构建方法及其应用，属于生物技术领域。本发明通过两次体外同源重组试验，高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒的病毒RNA反转录产物的基因片段插入pACYC177载体中，得到高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒感染性cDNA克隆，并且病毒基因组上游和下游分别添加了CMV早期启动子和丁型肝炎病毒的核酶序列。本发明构建方法效率高，得到的感染性cDNA克隆拯救的病毒感染后分泌gaussia luciferase到细胞外，便于对病毒滴度的检测，且保持遗传稳定。
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公开(公告)号：CN117230149A
公开(公告)日：2023-12-15
申请号：CN202310867764.X
申请日：2023-07-16
Applicant: 扬州大学
IPC: C12Q1/14 , C12Q1/04 , C12N1/20 , C12N15/75 , C12N1/21 , C12N15/57 , C12N9/54 , C12R1/44 , C12R1/225 , C12R1/07 , C12R1/125
Abstract: 本发明涉及一种高产蛋白酶菌株的筛选及基因改造的方法及其应用，首先分别培养腐生葡萄球菌、发酵乳杆菌L6、解淀粉芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、高产蛋白酶菌株。培养后分别用牙签挑取单个菌落，接种于蛋白酶筛选培养基上，培养结束后测定菌落直径（C）和水解圈直径（H），通过计算H/C值表达菌株的蛋白水解能力，筛选出高产蛋白酶菌株。将菌体培养至对数期，保存样品后对其进行高通量测序，将所得16S rRNA基因序列在GenBank中进行比对，使用MEGA5.2软件构建系统发育树。确定高产蛋白酶菌株与阿氏芽孢杆菌属于同一分支，结合个体、菌落形态、分子生物学实验，鉴定为阿氏芽孢杆菌，菌株保藏于中国典型培养物保藏，中心保藏号：CCTCCM20231231。本发明对于改善农业固体废弃物资源化利用具有重要意义。
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公开(公告)号：CN115709098A
公开(公告)日：2023-02-24
申请号：CN202211513369.3
申请日：2022-11-30
Applicant: 扬州大学
IPC: B01J31/02 , B01J27/051 , B01J37/10 , B01J37/34 , B01J37/20 , C02F1/30 , C02F101/30
Abstract: 本发明涉及一种四氧化三铁‑二硫化钼‑十二烷基硫酸钠纳米复合物的合成方法及其应用，其制备方法包括以下步骤：称取六水合三氯化铁、乙酸钠、聚乙二醇，量取乙二醇溶液，搅拌均匀；然后转移至高压反应釜中反应；分离产物，洗涤、烘干，得到四氧化三铁纳米材料；四氧化三铁、硫代乙酰胺、钼酸钠二水克溶于纯水中并搅拌均匀；混合溶液转移至高压反应釜中反应；（分离产物，洗涤、烘干，得到四氧化三铁‑二硫化钼纳米复合物，然后将四氧化三铁‑二硫化钼纳米复合物与十二烷基硫酸钠以同质量比例混合在纯水中，超声；分离产物，洗涤、烘干，得到纳米复合物。通过本发明，提供的复合纳米材料，具有较高的可见光下催化降解抗生素的效率。
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公开(公告)号：CN115725622B
公开(公告)日：2025-01-21
申请号：CN202211147357.3
申请日：2022-09-19
Applicant: 扬州大学
Abstract: 本发明涉及一株表达ASFV P30蛋白的重组GI型日本脑炎病毒及其构建方法与应用，利用同源重组技术将ASFV P30蛋白基因克隆入上游设置T7启动子的GI型日本脑炎病毒基因组中的5′UTR与C基因之间；P30蛋白基因的上游携带有日本脑炎病毒C基因的前102个碱基序列，保证了重组病毒的稳定；P30蛋白基因的下游含有T2A序列，保证了ASFV P30蛋白能够被正确的剪切。获得重组病毒的基因组全长cDNA后，利用T7启动子进行体外转录，获得病毒RNA并转染BHK‑21细胞，待细胞出现典型的细胞病变时，收集细胞上清即可获得表达ASFV P30蛋白的重组GI型日本脑炎病毒。该重组病毒具有遗传稳定型，能够稳定、高效的表达ASFV P30蛋白。本发明可快速获得含有ASFV和GI型JEV免疫原的重组病毒，为开发多效价疫苗奠定基础。
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