公开(公告)号：CN108918874A

公开(公告)日：2018-11-30

申请号：CN201810481695.8

申请日：2018-05-18

Applicant: 无锡市第二人民医院

Inventor： 蔺玉昌 ,  苗增利 ,  徐幸 ,  秦琪珑

IPC: G01N33/574 ,  G01N21/64

CPC classification number: G01N33/57484 ,  G01N21/6428

Abstract: 本发明公开了MiR-210在胶质瘤中相关靶点预测的实验方法，其特征为，括如下步骤：1)选取U251及U87-MG胶质瘤细胞系，应用加入10％胎牛血清和1％青霉素或者链霉素的D-MEM高糖培养基进行培养，分别分成正常组和低氧组，正常组置于5％CO2、37℃进行正常培养，低氧组置于2％O2、5％CO2、93％N2、37℃进行培养；选取手术切除的胶质母细胞瘤标本，以正常组织为对照，标本储存在-80℃冰箱；2)利用Tumor Suppressor蛋白芯片技术筛选出胶质母细胞瘤中表达降低的蛋白，以正常脑组织为对照；同时应用细胞系中低氧组细胞进行蛋白芯片实验，以正常组为对照，根据DAVID数据库，利用细胞系蛋白芯片的结果选出和胶质瘤缺氧相关的蛋白，然后把筛选结果和胶质母细胞瘤标本中的结果进行对比，选出表达趋势一致的目标靶点蛋白。

公开(公告)号：CN108642179A

公开(公告)日：2018-10-12

申请号：CN201810481754.1

申请日：2018-05-18

Applicant: 无锡市第二人民医院

Inventor： 蔺玉昌 ,  苗增利 ,  徐幸 ,  秦琪珑

IPC: C12Q1/6886 ,  C12Q1/02 ,  G01N33/574 ,  G01N33/68

CPC classification number: C12Q1/6886 ,  C12Q2600/158 ,  C12Q2600/178 ,  G01N33/5029 ,  G01N33/5044 ,  G01N33/57407 ,  G01N33/68

Abstract: 本发明公开了MiR-210在胶质瘤中相关靶点验证的实验方法，其特征为，括如下步骤：利用胶质瘤细胞系，分别构建miR-210过表达细胞组、miR-210低表达细胞组及空质粒细胞组，通过real-time qPCR，western blotting实验检测miR-210对下游基因的影响程度，检测靶点蛋白和其基因的表达水平。并通过MTT、侵袭、迁移等试验明确miR-210的相关生物学作用。并且通过报告基因明确靶点是否正确。