用于检测奶粉中7种致病菌的7重巢式qPCR引物、试剂盒及检测方法

    公开(公告)号:CN108866217A

    公开(公告)日:2018-11-23

    申请号:CN201810804054.1

    申请日:2018-07-20

    Applicant: 暨南大学

    Inventor: 吴希阳 杨卓

    Abstract: 本发明公开了一种用于检测奶粉中7种致病菌的7重巢式qPCR引物、试剂盒及检测方法。本发明用生物信息学的方法,根据7种致病菌的保守性基因设计特异性检测外引物,确保引物的特异性,同时进行第一轮7重PCR以提高检测通量,能同时检测7种致病菌;然后根据外引物产物的序列设计内引物,进一步加强方法特异性,同时将第一轮7重PCR产物稀释100倍作为模板,降低了引物二聚体等非特异性引物对第二轮的影响,进而使用荧光定量PCR进行最终检测,以提高检测灵敏度。本发明的引物特异性好、灵敏度高、检测时间短,且本发明检测方法灵敏、准确、简便和快速,对进出口相关货物及产品检验检疫也具有指导意义。

    检测食品中副溶血弧菌的RPA特异性引物及试剂盒与应用

    公开(公告)号:CN106967816A

    公开(公告)日:2017-07-21

    申请号:CN201710277777.6

    申请日:2017-04-25

    Applicant: 暨南大学

    Abstract: 本发明公开一种检测食品中副溶血弧菌的RPA特异性引物及试剂盒与应用,属于生物技术领域。该RPA特异性引物的序列如SEQ ID No:1和SEQ ID No:2所示,扩增内标的序列如SEQ ID No:8所示。本发明用时短:PCR反应通常耗时2~3个小时,RPA技术仅需要20min即可完成扩增。常温下即可扩增:只需要37℃下恒温反应即可,不需要特殊的热循环设备。结果易于判断,不像LAMP产物的弥散带,RPA仅需1对引物即可完成扩增,扩增产物根据引物设计位点具有特定大小的条带。含扩增内标,能指示RPA反应的假阴性。

    转基因大豆GTS40-3-2及内外源基因的多重巢式荧光定量PCR检测引物组和方法

    公开(公告)号:CN104450946B

    公开(公告)日:2016-05-25

    申请号:CN201410843991.X

    申请日:2014-12-30

    Applicant: 暨南大学

    Abstract: 本发明公开一种转基因大豆GTS40-3-2及内外源基因的多重巢式荧光定量PCR检测引物组和方法。本发明将多重PCR、巢式PCR、荧光定量PCR结合起来,对引物的设计进行了严格的控制,并对检测流程进行了改进,建立了一套多重巢式荧光定量PCR检测体系,该体系能够定量检测转基因大豆GTS40-3-2品系,以及常见外源基因NOS终止子、CP4-EPSPS、CaMV35S启动子和大豆内源基因Lectin,该方法灵敏度相比普通荧光定量PCR提高了1个数量级。本发明的方法具有模板需要量少,灵敏度高,通量高,特异性强等优点;能应用于转基因的快速定量检测,为快速、准确、高通量、定量检测转基因提供新方法。

    GeXP多重PCR技术检测植物中转基因成分的方法与应用

    公开(公告)号:CN102154454A

    公开(公告)日:2011-08-17

    申请号:CN201010615564.8

    申请日:2010-12-30

    Applicant: 暨南大学

    Abstract: 本发明公开了一种GeXP多重PCR技术检测植物中转基因成分的方法与应用。本发明通过设计常用的外源基因的引物,包括5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因,草丁膦乙酰转移酶基因,草丁膦乙酰转移酶基因,玄参花叶病毒35S启动子,花椰菜花叶病毒35S启动子,胭脂碱合成酶基因终止子,进行PCR和毛细管电泳,根据毛细管电泳的结果进行分析;其中PCR为通过采用通用引物引发靶基因扩增。这种PCR能有效解决多重PCR过程中的扩增偏爱性,提高检测灵敏度;毛细管电泳能提高分辨率;根据扩增产物片段长度判断结果,有助于提高检测特异性。本发明为转基因植物的检测提供了较为可靠和简便的检测方法,所建立的体系可重复性高,经多次试验稳定性好。

    一种快速鉴定棉花中转基因成分的检测方法及其应用

    公开(公告)号:CN101956011A

    公开(公告)日:2011-01-26

    申请号:CN201010290041.0

    申请日:2010-09-20

    Applicant: 暨南大学

    Abstract: 本发明公开了一种快速鉴定棉花中转基因成分的检测方法及其应用。本发明提供了sad1基因、GUS基因、Cry1Ab/Ac基因、NPTII基因、NOS基因和CaMV35S基因的引物,总共6对,将其应用于同一个PCR反应体系中,能从棉花籽中一次测出6种基因,步骤少,效率高,结果准确可靠。本发明为转基因棉花的检测提供了较为可靠和简便的检测方法,所建立的体系可重复性高,经多次试验稳定性好。其检测结果与其他检测技术相比,具有更大的可靠性和适应性,简化了检测步骤,提高了检测效率,从而为转基因棉花的检测提供更有为效的检测手段。

    检测食品中副溶血弧菌的RPA特异性引物及试剂盒与应用

    公开(公告)号:CN106967816B

    公开(公告)日:2020-01-17

    申请号:CN201710277777.6

    申请日:2017-04-25

    Applicant: 暨南大学

    Abstract: 本发明公开一种检测食品中副溶血弧菌的RPA特异性引物及试剂盒与应用,属于生物技术领域。该RPA特异性引物的序列如SEQ ID No:1和SEQ ID No:2所示,扩增内标的序列如SEQ ID No:8所示。本发明用时短:PCR反应通常耗时2~3个小时,RPA技术仅需要20min即可完成扩增。常温下即可扩增:只需要37℃下恒温反应即可,不需要特殊的热循环设备。结果易于判断,不像LAMP产物的弥散带,RPA仅需1对引物即可完成扩增,扩增产物根据引物设计位点具有特定大小的条带。含扩增内标,能指示RPA反应的假阴性。

    一种快速鉴定棉花中转基因成分的检测方法及其应用

    公开(公告)号:CN101956011B

    公开(公告)日:2012-09-05

    申请号:CN201010290041.0

    申请日:2010-09-20

    Applicant: 暨南大学

    Abstract: 本发明公开了一种快速鉴定棉花中转基因成分的检测方法及其应用。本发明提供了sad1基因、GUS基因、Cry1Ab/Ac基因、NPTII基因、NOS基因和CaMV35S基因的引物,总共6对,将其应用于同一个PCR反应体系中,能从棉花籽中一次测出6种基因,步骤少,效率高,结果准确可靠。本发明为转基因棉花的检测提供了较为可靠和简便的检测方法,所建立的体系可重复性高,经多次试验稳定性好。其检测结果与其他检测技术相比,具有更大的可靠性和适应性,简化了检测步骤,提高了检测效率,从而为转基因棉花的检测提供更有为效的检测手段。

    一步法微滴数字PCR定量检测果蔬中GII型诺如病毒的方法

    公开(公告)号:CN107338328A

    公开(公告)日:2017-11-10

    申请号:CN201710630764.2

    申请日:2017-07-28

    Applicant: 暨南大学

    Abstract: 本发明公开一种一步法微滴数字PCR定量检测果蔬中GII型诺如病毒的方法。该方法利用RT-ddPCR,结合用于RT-qPCR检测GII型诺如病毒的引物和探针,进行反应,实现GII型诺如病毒的高灵敏快速检测。本方法灵敏度高,可达约2copies/μL,而常规的RT-qPCR的灵敏度通常为10copies/μL左右;扩增效率高,扩增效率为95.4%,R2=0.9973。在低拷贝数下比RT-qPCR更能有效规避果蔬中抑制物的影响,减少了假阴性的产生。因此,本发明检测方法灵敏、准确、直观,对农业部、检验检疫局等政府部门以及相关检测机构和企业提供了新的检测方法并具有指导意义。

    GeXP多重PCR技术检测植物中转基因成分的方法与应用

    公开(公告)号:CN102154454B

    公开(公告)日:2013-07-10

    申请号:CN201010615564.8

    申请日:2010-12-30

    Applicant: 暨南大学

    Abstract: 本发明公开了一种GeXP多重PCR技术检测植物中转基因成分的方法与应用。本发明通过设计常用的外源基因的引物,包括5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因,草丁膦乙酰转移酶基因,草丁膦乙酰转移酶基因,玄参花叶病毒35S启动子,花椰菜花叶病毒35S启动子,胭脂碱合成酶基因终止子,进行PCR和毛细管电泳,根据毛细管电泳的结果进行分析;其中PCR为通过采用通用引物引发靶基因扩增。这种PCR能有效解决多重PCR过程中的扩增偏爱性,提高检测灵敏度;毛细管电泳能提高分辨率;根据扩增产物片段长度判断结果,有助于提高检测特异性。本发明为转基因植物的检测提供了较为可靠和简便的检测方法,所建立的体系可重复性高,经多次试验稳定性好。

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