公开(公告)号：CN114891742A

公开(公告)日：2022-08-12

申请号：CN202210716228.5

申请日：2022-06-23

Applicant: 杭州中赢生物医疗科技有限公司

Inventor： 俞英豪 ,  王冶陶 ,  彭昉 ,  蔡燕萍

IPC: C12N5/0783

Abstract: 本发明公开了一种强杀伤性NK细胞培养基。本发明公开了一种强杀伤性NK细胞的体外扩增方法，将PBMC细胞进行磁珠分选得到NK细胞；将NK细胞悬于上述强杀伤性NK细胞培养基中，然后转移至细胞培养瓶中；继续向细胞培养瓶中加入自体血浆及5‑15μg/mL抗Her‑2单克隆抗体、900‑1100U/mL重组人IL‑2、25‑35ng/mLIGF‑1等，然后将细胞培养瓶置于培养箱中培养；每隔3天补加上述强杀伤性NK细胞培养基、900‑1100U/mL重组人IL‑2、25‑35ng/mL重组人IL‑15、5‑15ng/mL重组人IL‑21，继续培养；培养14天后，从培养袋中取出细胞，获得强杀伤性NK细胞。

公开(公告)号：CN114874984B

公开(公告)日：2024-05-03

申请号：CN202210681141.9

申请日：2022-06-16

Applicant: 杭州中赢生物医疗科技有限公司

Inventor： 俞英豪 ,  彭昉 ,  王冶陶 ,  洪茜茜 ,  叶志春 ,  蔡燕萍 ,  王朝芳

IPC: C12N5/0783

Abstract: 本发明公开了一种采用植物提取物体外诱导扩增NK细胞的方法，向Cellgro基础培养基中加入OK‑432、IL‑2、IL‑15、IL‑21和复合中药提取物得到诱导培养基；向Cellgro基础培养基中加入rhGM‑CSF、rhIL‑4、复合中药提取物得到增殖培养基；无菌采集外周血，向外周血中加入DPBS进行稀释，然后向其中加入Ficoll分离液，离心，洗涤得到外周血单个核细胞；将所得外周血单个核细胞稀释，然后加入诱导培养基中重悬，加入anti‑CD137，培养2‑3h；然后加入增殖培养基培养至第4天，补加IL‑2、IL‑15和IL‑21；培养到第7天，扩瓶培养；培养至第14天获得扩增的NK细胞。

公开(公告)号：CN114196628B

公开(公告)日：2024-03-19

申请号：CN202111572220.8

申请日：2021-12-21

Applicant: 杭州中赢生物医疗科技有限公司

Inventor： 俞英豪 ,  彭昉 ,  王冶陶 ,  蔡燕萍

IPC: C12N5/0783

Abstract: 本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及一种NK细胞的培养基及培养方法。采用本发明提供的培养基培养PBMC，获得的NK细胞(CD3‑CD56+)平均纯度达到80％以上，平均扩增倍数达4076倍(按照起始培养NK细胞占比PBMC7.5％计)，细胞杀伤活性(效靶比为20:1)5小时杀伤80％以上。

公开(公告)号：CN114891742B

公开(公告)日：2024-06-04

申请号：CN202210716228.5

申请日：2022-06-23

Applicant: 杭州中赢生物医疗科技有限公司

Inventor： 俞英豪 ,  王冶陶 ,  彭昉 ,  蔡燕萍

IPC: C12N5/0783

Abstract: 本发明公开了一种强杀伤性NK细胞培养基。本发明公开了一种强杀伤性NK细胞的体外扩增方法，将PBMC细胞进行磁珠分选得到NK细胞；将NK细胞悬于上述强杀伤性NK细胞培养基中，然后转移至细胞培养瓶中；继续向细胞培养瓶中加入自体血浆及5‑15μg/mL抗Her‑2单克隆抗体、900‑1100U/mL重组人IL‑2、25‑35ng/mLIGF‑1等，然后将细胞培养瓶置于培养箱中培养；每隔3天补加上述强杀伤性NK细胞培养基、900‑1100U/mL重组人IL‑2、25‑35ng/mL重组人IL‑15、5‑15ng/mL重组人IL‑21，继续培养；培养14天后，从培养袋中取出细胞，获得强杀伤性NK细胞。

公开(公告)号：CN114196628A

公开(公告)日：2022-03-18

申请号：CN202111572220.8

申请日：2021-12-21

Applicant: 杭州中赢生物医疗科技有限公司

Inventor： 俞英豪 ,  彭昉 ,  王冶陶 ,  蔡燕萍

IPC: C12N5/0783

Abstract: 本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及一种NK细胞的培养基及培养方法。采用本发明提供的培养基培养PBMC，获得的NK细胞(CD3‑CD56+)平均纯度达到80％以上，平均扩增倍数达4076倍(按照起始培养NK细胞占比PBMC7.5％计)，细胞杀伤活性(效靶比为20:1)5小时杀伤80％以上。

公开(公告)号：CN112501104A

公开(公告)日：2021-03-16

申请号：CN202011538952.0

申请日：2020-12-23

Applicant: 杭州中赢生物医疗科技有限公司

Inventor： 俞英豪 ,  王冶陶 ,  彭昉 ,  蔡燕萍

IPC: C12N1/21 ,  C12N5/0783 ,  C12R1/225 ,  C12R1/01 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及基因工程细菌及其在淋巴细胞扩增中的应用。本发明利用异体原核生物作为滋养层细胞，通过基因工程手段获表达CD137L、IL21和CD4中至少一种蛋白的基因工程细菌，将该基因工程细菌表达用于扩增淋巴细胞，具有扩增效率高、安全性好的优点，且成本更低。实现结果表明，利用本发明基因工程细菌扩增纯化的NK细胞或未经纯化的淋巴细胞，NK细胞14天分别增长25892.99倍、30150.22倍。其中，对未经纯化的淋巴细胞进行培养，获得NK细胞的纯度达98.5％，显著优于传统因子培养以及现有滋养细胞技术的培养效果。

公开(公告)号：CN112501104B

公开(公告)日：2022-09-09

申请号：CN202011538952.0

申请日：2020-12-23

Applicant: 杭州中赢生物医疗科技有限公司

Inventor： 俞英豪 ,  王冶陶 ,  彭昉 ,  蔡燕萍

IPC: C12N1/21 ,  C12N5/0783 ,  C12R1/225 ,  C12R1/01 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及基因工程细菌及其在淋巴细胞扩增中的应用。本发明利用异体原核生物作为滋养层细胞，通过基因工程手段获表达CD137L、IL21和CD4中至少一种蛋白的基因工程细菌，将该基因工程细菌表达用于扩增淋巴细胞，具有扩增效率高、安全性好的优点，且成本更低。实现结果表明，利用本发明基因工程细菌扩增纯化的NK细胞或未经纯化的淋巴细胞，NK细胞14天分别增长25892.99倍、30150.22倍。其中，对未经纯化的淋巴细胞进行培养，获得NK细胞的纯度达98.5％，显著优于传统因子培养以及现有滋养细胞技术的培养效果。

公开(公告)号：CN114874984A

公开(公告)日：2022-08-09

申请号：CN202210681141.9

申请日：2022-06-16

Applicant: 杭州中赢生物医疗科技有限公司

Inventor： 俞英豪 ,  彭昉 ,  王冶陶 ,  洪茜茜 ,  叶志春 ,  蔡燕萍 ,  王朝芳

IPC: C12N5/0783

Abstract: 本发明公开了一种采用植物提取物体外诱导扩增NK细胞的方法，向Cellgro基础培养基中加入OK‑432、IL‑2、IL‑15、IL‑21和复合中药提取物得到诱导培养基；向Cellgro基础培养基中加入rhGM‑CSF、rhIL‑4、复合中药提取物得到增殖培养基；无菌采集外周血，向外周血中加入DPBS进行稀释，然后向其中加入Ficoll分离液，离心，洗涤得到外周血单个核细胞；将所得外周血单个核细胞稀释，然后加入诱导培养基中重悬，加入anti‑CD137，培养2‑3h；然后加入增殖培养基培养至第4天，补加IL‑2、IL‑15和IL‑21；培养到第7天，扩瓶培养；培养至第14天获得扩增的NK细胞。