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公开(公告)号:CN118648702A
公开(公告)日:2024-09-17
申请号:CN202310223813.6
申请日:2023-03-09
Applicant: 武汉康复得生物科技股份有限公司
IPC: A23L33/17 , A23L33/175 , C12N15/75 , C12N1/21 , C07K14/00 , A61K38/16 , A61K31/513 , A61P3/00 , A61P3/04 , A61P39/06 , A61P35/00 , A61P39/02 , C12R1/10
Abstract: 本发明公开了一种无或低甲硫氨酸的含量的蛋白质及其应用。通过食用所述蛋白质及其组合物可有效控制甲硫氨酸摄取,降低体内甲硫氨酸水平,同时补充其他必须氨基酸以及营养元素。所述蛋白质及其组合物可用于减轻体重、延长寿命、抑制肿瘤生长、缓解和治疗高甲硫氨酸血症等方面,以及任何用于降低甲硫氨酸摄取与消耗的产品应用领域。
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公开(公告)号:CN109846909B
公开(公告)日:2022-03-22
申请号:CN201910095135.3
申请日:2019-01-31
Applicant: 武汉康复得生物科技股份有限公司
Abstract: 本发明是关于一种可在肠道中催化尿酸降解的组合物,所述组合物含有蛹虫草菌粉或干酶粉,所述蛹虫草菌粉或干酶粉包含可催化尿酸降解的尿酸氧化酶。本发明还提供了上述本发明关于一种可在肠道中催化尿酸降解的组合物的制备方法和应用。本发明的组合物可通过催化尿酸降解为尿囊素,降低肠道中的尿酸含量,增加血液中尿酸向肠道中分泌排泄的比例,从而降低血液中的尿酸浓度,预防和治疗高尿酸血症及痛风疾病;同时也降低了尿液中尿酸的排泄量,降低尿酸结石的发病率。
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公开(公告)号:CN105505975B
公开(公告)日:2018-11-09
申请号:CN201610002428.9
申请日:2016-01-06
Applicant: 武汉康复得生物科技股份有限公司
IPC: C12N15/75
Abstract: 本发明公开了芽胞杆菌基因无痕敲除/入质粒、方法和试剂盒,该芽胞杆菌基因无痕敲除/入质粒的基因组中含有:仅一种正筛选标记的抗性基因;能在大肠杆菌中复制的复制子;能在芽胞杆菌中复制的温敏型复制子;至少一个I‑Scel酶切位点;仅一种显色蛋白基因;其中,抗性基因和显色蛋白基因前的启动子均为芽胞杆菌中的组成型启动子。本发明还提供一种用于提高上述质粒敲除或敲入效率的辅助质粒,其基因组中含有的抗性基因和显色蛋白基因不同于上述敲除/入质粒。采用上述两种质粒,可以连续或迭代修饰芽胞杆菌基因组中一个或多个目的DNA序列,应用于芽胞杆菌的遗传改造、代谢过程研究、功能基因组研究和工业化应用研究等多种领域。
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公开(公告)号:CN108359661A
公开(公告)日:2018-08-03
申请号:CN201810031137.1
申请日:2018-01-12
Applicant: 武汉康复得生物科技股份有限公司
Abstract: 本发明提供了一种用酵母表达系统生产重组草酸脱羧酶的方法及应用。通过将真核微生物来源的草酸脱羧酶基因导入到酵母表达系统的宿主细胞中,构建能够高效分泌表达重组草酸脱羧酶的系列工程菌株,将重组菌株发酵培养,不同的重组菌分泌表达的草酸脱羧酶活力可达到5750-9000IU/L。本发明的生产重组草酸脱羧酶的方法实现了草酸脱羧酶在酵母宿主细胞中高效重组分泌表达,重组草酸脱羧酶具有与天然宿主细胞制备的草酸脱羧酶相似的酶学性质。同时,本发明的重组草酸脱羧酶具有糖基化修饰,pH耐受范围宽,在胃肠环境中稳定性强,半衰期长;分泌表达的蛋白可溶,生产和纯化工艺简单,无内毒素污染,可广泛应用于生物医药、特殊医学配方食品和功能性食品加工等领域。
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公开(公告)号:CN106191092A
公开(公告)日:2016-12-07
申请号:CN201610567805.3
申请日:2016-07-19
Applicant: 武汉康复得生物科技股份有限公司
IPC: C12N15/75
CPC classification number: C12N15/75 , C12N2800/101
Abstract: 本发明公开了一种芽胞杆菌多基因叠加敲除方法,是将芽胞杆菌多个待敲除基因的上下游同源臂基因片段插入到温敏型质粒中,转化芽孢杆菌,通过高温培养迫使芽胞杆菌中的敲除质粒与其基因组DNA发生同源单交换,高温传代培养筛选双交换的菌株。提取多个基因单交换成功菌株的基因组DNA,限制性内切酶消化后,回收DNA片段,转化单基因成功实现无痕敲除的菌株,进行双交换筛选,叠加敲除成功的菌株作为下一轮叠加敲除的宿主菌,依次叠加最终实现芽胞杆菌多基因的敲除。用温敏型质粒实现芽胞杆菌基因的无痕敲除,以单交换的宿主基因组DNA转化芽胞杆菌不仅能提高转化效率,还能有效避免宿主菌中已敲除基因的回复,显著提高多基因叠加敲除效率。
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公开(公告)号:CN105505975A
公开(公告)日:2016-04-20
申请号:CN201610002428.9
申请日:2016-01-06
Applicant: 武汉康复得生物科技股份有限公司
IPC: C12N15/75
CPC classification number: C12N15/75 , C12N2800/101 , C12N2820/10 , C12N2820/55
Abstract: 本发明公开了芽胞杆菌基因无痕敲除/入质粒、方法和试剂盒,该芽胞杆菌基因无痕敲除/入质粒的基因组中含有:仅一种正筛选标记的抗性基因;能在大肠杆菌中复制的复制子;能在芽胞杆菌中复制的温敏型复制子;至少一个I-Scel酶切位点;仅一种显色蛋白基因;其中,抗性基因和显色蛋白基因前的启动子均为芽胞杆菌中的组成型启动子。本发明还提供一种用于提高上述质粒敲除或敲入效率的辅助质粒,其基因组中含有的抗性基因和显色蛋白基因不同于上述敲除/入质粒。采用上述两种质粒,可以连续或迭代修饰芽胞杆菌基因组中一个或多个目的DNA序列,应用于芽胞杆菌的遗传改造、代谢过程研究、功能基因组研究和工业化应用研究等多种领域。
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公开(公告)号:CN108977455B
公开(公告)日:2021-07-20
申请号:CN201810865726.X
申请日:2018-08-01
Applicant: 武汉康复得生物科技股份有限公司
Abstract: 本发明公开了用于生产草酸脱羧酶的重组质粒、大肠杆菌表达系统及方法和应用。所述用于生产草酸脱羧酶的重组质粒,包含:草酸脱羧酶基因、分子伴侣基因和调控胞内锰离子浓度的基因。本发明将所述重组质粒导入大肠杆菌表达菌株和MntP基因缺失的大肠杆菌中,均得到可溶表达且有活性的草酸脱羧酶。并对重组菌株的培养温度和诱导温度进行了优化,发现培养温度为37℃,诱导温度为25℃时,草酸脱羧酶的表达量较高。通过有机溶剂沉淀和硫酸铵沉淀两步简单纯化,草酸脱羧酶比活力能达到45.6U/mg,纯度超过95%。本发明技术方案具有生产和纯化工艺简单,草酸脱羧酶的表达量和比活力高,易于工业放大,成本低,有利于草酸脱羧酶的工业化生产和应用。
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公开(公告)号:CN108998462B
公开(公告)日:2021-06-18
申请号:CN201810863252.5
申请日:2018-08-01
Applicant: 武汉康复得生物科技股份有限公司
Abstract: 本发明公开了含锰离子重组蛋白的大肠杆菌表达系统及其应用方法。所述大肠杆菌表达系统中的重组表达质粒为以下几种情形之一或其组合:(1)至少包含大肠杆菌分子伴侣基因和含锰离子的酶蛋白基因;(2)包含大肠杆菌分子伴侣基因、含锰离子的酶蛋白基因,以及过表达或抑制锰离子通道相关蛋白基因;(3)包含大肠杆菌分子伴侣基因、含锰离子的酶蛋白基因,以及影响胞内的锰离子浓度相关蛋白基因。通过所述大肠杆菌表达系统的构建及优化,可实现含锰离子酶蛋白的高效可溶且有活性的表达,相比传统方法效率高、纯化工艺简单、成本低,有利于含锰离子酶的工业化生产和应用。
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公开(公告)号:CN106085934B
公开(公告)日:2019-10-29
申请号:CN201610410811.8
申请日:2016-06-12
Applicant: 武汉康复得生物科技股份有限公司
Abstract: 本发明公开了一种食品级纳豆激酶表达菌,该重组菌是经过改造使得基因组中含有至少一个拷贝纳豆激酶基因的地衣芽胞杆菌。优选地,该表达菌基因组中负调控因子基因hrcA失活。本发明的生产菌株符合食品级表达系统的要求,纳豆激酶基因多个拷贝无痕整合到地衣芽胞杆菌基因组中表达,表达量比现有技术显著提高显著,通过失活负调控基因hrcA,酶活力和表达量进一步提高,酶活力达到1350FU/mL,蛋白含量达1.45g/L。本发明中重组菌制备的纳豆激酶,纯度较高,可以加工成保健品或作为疗脑梗塞药物的有效成分。
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公开(公告)号:CN109022471A
公开(公告)日:2018-12-18
申请号:CN201810864547.4
申请日:2018-08-01
Applicant: 武汉康复得生物科技股份有限公司
IPC: C12N15/70 , C12N9/02 , C12Q1/26 , A61K38/44 , A61P19/06 , A61P13/12 , A61P13/04 , C02F3/34 , A23L29/00 , C02F101/34 , C02F103/28
CPC classification number: C12N15/70 , A23L29/06 , A61K38/44 , A61P13/04 , A61P13/12 , A61P19/06 , C02F3/342 , C02F2101/34 , C02F2103/28 , C12N9/0008 , C12Q1/26 , C12Y102/03004 , G01N2333/90203
Abstract: 本发明公开了生产草酸氧化酶的大肠杆菌表达系统、草酸氧化酶的生产方法及其应用。所述大肠杆菌表达系统中的重组表达质粒包含:草酸氧化酶基因、分子伴侣基因和促进锰离子泵入大肠杆菌细胞相关蛋白的基因。本发明通过对不同的锰离子相关蛋白的基因及其拷贝数,控制分子伴侣表达的启动子种类,以及草酸氧化酶的生产过程所用的培养基种类进行筛选和测试,获得草酸氧化酶的优化表达组合,使得草酸氧化酶在大肠杆菌中的表达活力超过80U/mL。细胞破碎液上清初步纯化的草酸氧化酶的比活力大于20U/mg,单体分子量大小在25kDa左右。本发明技术方案具有生产和纯化工艺简单,表达量和比活力高,易于工业放大,成本低,有利于这类酶的工业化生产和应用等优势。
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