芽胞杆菌基因无痕敲除/入质粒、方法和试剂盒

    公开(公告)号:CN105505975B

    公开(公告)日:2018-11-09

    申请号:CN201610002428.9

    申请日:2016-01-06

    Abstract: 本发明公开了芽胞杆菌基因无痕敲除/入质粒、方法和试剂盒,该芽胞杆菌基因无痕敲除/入质粒的基因组中含有:仅一种正筛选标记的抗性基因;能在大肠杆菌中复制的复制子;能在芽胞杆菌中复制的温敏型复制子;至少一个I‑Scel酶切位点;仅一种显色蛋白基因;其中,抗性基因和显色蛋白基因前的启动子均为芽胞杆菌中的组成型启动子。本发明还提供一种用于提高上述质粒敲除或敲入效率的辅助质粒,其基因组中含有的抗性基因和显色蛋白基因不同于上述敲除/入质粒。采用上述两种质粒,可以连续或迭代修饰芽胞杆菌基因组中一个或多个目的DNA序列,应用于芽胞杆菌的遗传改造、代谢过程研究、功能基因组研究和工业化应用研究等多种领域。

    一种用酵母表达系统生产重组草酸脱羧酶的方法及应用

    公开(公告)号:CN108359661A

    公开(公告)日:2018-08-03

    申请号:CN201810031137.1

    申请日:2018-01-12

    Abstract: 本发明提供了一种用酵母表达系统生产重组草酸脱羧酶的方法及应用。通过将真核微生物来源的草酸脱羧酶基因导入到酵母表达系统的宿主细胞中,构建能够高效分泌表达重组草酸脱羧酶的系列工程菌株,将重组菌株发酵培养,不同的重组菌分泌表达的草酸脱羧酶活力可达到5750-9000IU/L。本发明的生产重组草酸脱羧酶的方法实现了草酸脱羧酶在酵母宿主细胞中高效重组分泌表达,重组草酸脱羧酶具有与天然宿主细胞制备的草酸脱羧酶相似的酶学性质。同时,本发明的重组草酸脱羧酶具有糖基化修饰,pH耐受范围宽,在胃肠环境中稳定性强,半衰期长;分泌表达的蛋白可溶,生产和纯化工艺简单,无内毒素污染,可广泛应用于生物医药、特殊医学配方食品和功能性食品加工等领域。

    一种芽胞杆菌多基因叠加敲除方法

    公开(公告)号:CN106191092A

    公开(公告)日:2016-12-07

    申请号:CN201610567805.3

    申请日:2016-07-19

    CPC classification number: C12N15/75 C12N2800/101

    Abstract: 本发明公开了一种芽胞杆菌多基因叠加敲除方法,是将芽胞杆菌多个待敲除基因的上下游同源臂基因片段插入到温敏型质粒中,转化芽孢杆菌,通过高温培养迫使芽胞杆菌中的敲除质粒与其基因组DNA发生同源单交换,高温传代培养筛选双交换的菌株。提取多个基因单交换成功菌株的基因组DNA,限制性内切酶消化后,回收DNA片段,转化单基因成功实现无痕敲除的菌株,进行双交换筛选,叠加敲除成功的菌株作为下一轮叠加敲除的宿主菌,依次叠加最终实现芽胞杆菌多基因的敲除。用温敏型质粒实现芽胞杆菌基因的无痕敲除,以单交换的宿主基因组DNA转化芽胞杆菌不仅能提高转化效率,还能有效避免宿主菌中已敲除基因的回复,显著提高多基因叠加敲除效率。

    芽胞杆菌基因无痕敲除/入质粒、方法和试剂盒

    公开(公告)号:CN105505975A

    公开(公告)日:2016-04-20

    申请号:CN201610002428.9

    申请日:2016-01-06

    CPC classification number: C12N15/75 C12N2800/101 C12N2820/10 C12N2820/55

    Abstract: 本发明公开了芽胞杆菌基因无痕敲除/入质粒、方法和试剂盒,该芽胞杆菌基因无痕敲除/入质粒的基因组中含有:仅一种正筛选标记的抗性基因;能在大肠杆菌中复制的复制子;能在芽胞杆菌中复制的温敏型复制子;至少一个I-Scel酶切位点;仅一种显色蛋白基因;其中,抗性基因和显色蛋白基因前的启动子均为芽胞杆菌中的组成型启动子。本发明还提供一种用于提高上述质粒敲除或敲入效率的辅助质粒,其基因组中含有的抗性基因和显色蛋白基因不同于上述敲除/入质粒。采用上述两种质粒,可以连续或迭代修饰芽胞杆菌基因组中一个或多个目的DNA序列,应用于芽胞杆菌的遗传改造、代谢过程研究、功能基因组研究和工业化应用研究等多种领域。

    含锰离子重组蛋白的大肠杆菌表达系统及其应用方法

    公开(公告)号:CN108998462B

    公开(公告)日:2021-06-18

    申请号:CN201810863252.5

    申请日:2018-08-01

    Abstract: 本发明公开了含锰离子重组蛋白的大肠杆菌表达系统及其应用方法。所述大肠杆菌表达系统中的重组表达质粒为以下几种情形之一或其组合:(1)至少包含大肠杆菌分子伴侣基因和含锰离子的酶蛋白基因;(2)包含大肠杆菌分子伴侣基因、含锰离子的酶蛋白基因,以及过表达或抑制锰离子通道相关蛋白基因;(3)包含大肠杆菌分子伴侣基因、含锰离子的酶蛋白基因,以及影响胞内的锰离子浓度相关蛋白基因。通过所述大肠杆菌表达系统的构建及优化,可实现含锰离子酶蛋白的高效可溶且有活性的表达,相比传统方法效率高、纯化工艺简单、成本低,有利于含锰离子酶的工业化生产和应用。

    食品级纳豆激酶表达菌
    9.
    发明授权

    公开(公告)号:CN106085934B

    公开(公告)日:2019-10-29

    申请号:CN201610410811.8

    申请日:2016-06-12

    Abstract: 本发明公开了一种食品级纳豆激酶表达菌,该重组菌是经过改造使得基因组中含有至少一个拷贝纳豆激酶基因的地衣芽胞杆菌。优选地,该表达菌基因组中负调控因子基因hrcA失活。本发明的生产菌株符合食品级表达系统的要求,纳豆激酶基因多个拷贝无痕整合到地衣芽胞杆菌基因组中表达,表达量比现有技术显著提高显著,通过失活负调控基因hrcA,酶活力和表达量进一步提高,酶活力达到1350FU/mL,蛋白含量达1.45g/L。本发明中重组菌制备的纳豆激酶,纯度较高,可以加工成保健品或作为疗脑梗塞药物的有效成分。

Patent Agency Ranking