公开(公告)号：CN111690676B

公开(公告)日：2022-12-30

申请号：CN202010597814.3

申请日：2020-06-28

Applicant: 江南大学

Inventor： 石贵阳 ,  李由然 ,  肖丰旭 ,  张梁 ,  丁重阳 ,  徐沙 ,  顾正华 ,  张玉鹏 ,  王瀚容

IPC: C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12R1/10

Abstract: 本发明公开了一种调控目的基因表达和CCA效应的元件，属于生物工程技术领域。所述元件包括载体、启动子和靶基因结合序列，所述靶基因结合序列为AGCTTT‑Y‑AAAGCT或AAAGCT‑Y‑AGCTTT(Y代表长度为0‑14bp的核苷酸序列)。含有AGCTTT‑Y‑AAAGCT的元件，响应葡萄糖存在时的CCA效应，甘油存在时的CCR效应；含AAAGCT‑Y‑AGCTTT的元件，响应葡萄糖存在时的CCR效应，甘油存在时的CCA效应。本发明为后续地衣芽孢杆菌表达原件的开发提供了高效的、靶向的分子手段。

公开(公告)号：CN112062821B

公开(公告)日：2022-02-01

申请号：CN202011015122.X

申请日：2020-09-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 石贵阳 ,  李由然 ,  张玉鹏 ,  肖丰旭 ,  王瀚容 ,  张梁 ,  丁重阳 ,  徐沙 ,  顾正华

IPC: C07K14/32 ,  C12N15/31 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12R1/10

Abstract: 本发明公开了一种碳分解代谢调控蛋白CcpA突变体K31A，属于蛋白质工程技术领域。本发明对从地衣芽孢杆菌基因组中克隆的CcpA基因进行突变，得到一种碳分解代谢调控蛋白CcpA突变体K31A，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码其的基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明构建了包含编码上述CcpA突变体K31A基因的重组表达载体，并将构建的表达载体转化到地衣芽孢杆菌CcpA基因缺陷株中获得重组地衣芽孢杆菌。所获得的重组地衣芽孢杆菌能够明显改变由于葡萄糖存在而产生的碳分解代谢阻遏现象，能够降低地衣芽孢杆菌对木糖的偏好性。

公开(公告)号：CN112062822A

公开(公告)日：2020-12-11

申请号：CN202011017359.1

申请日：2020-09-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 石贵阳 ,  李由然 ,  张玉鹏 ,  肖丰旭 ,  王瀚容 ,  张梁 ,  丁重阳 ,  徐沙 ,  顾正华

IPC: C07K14/32 ,  C12N15/31 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12R1/10

Abstract: 本发明公开了一种碳分解代谢调控蛋白CcpA突变体I42A，属于蛋白质工程技术领域。本发明对从地衣芽孢杆菌基因组中克隆的CcpA基因进行突变，得到的一种碳分解代谢调控蛋白CcpA突变体I42A，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码其的基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明构建了包含编码上述CcpA突变体I42A基因的重组表达载体，并将构建的表达载体转化到地衣芽孢杆菌CcpA基因缺陷株中获得重组地衣芽孢杆菌；所获得的重组地衣芽孢杆菌能够明显改变由于葡萄糖存在而产生的碳分解代谢阻遏现象，能够降低地衣芽孢杆菌对木糖的偏好性。

公开(公告)号：CN112062821A

公开(公告)日：2020-12-11

申请号：CN202011015122.X

申请日：2020-09-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 石贵阳 ,  李由然 ,  张玉鹏 ,  肖丰旭 ,  王瀚容 ,  张梁 ,  丁重阳 ,  徐沙 ,  顾正华

IPC: C07K14/32 ,  C12N15/31 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12R1/10

Abstract: 本发明公开了一种碳分解代谢调控蛋白CcpA突变体K31A，属于蛋白质工程技术领域。本发明对从地衣芽孢杆菌基因组中克隆的CcpA基因进行突变，得到一种碳分解代谢调控蛋白CcpA突变体K31A，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码其的基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明构建了包含编码上述CcpA突变体K31A基因的重组表达载体，并将构建的表达载体转化到地衣芽孢杆菌CcpA基因缺陷株中获得重组地衣芽孢杆菌。所获得的重组地衣芽孢杆菌能够明显改变由于葡萄糖存在而产生的碳分解代谢阻遏现象，能够降低地衣芽孢杆菌对木糖的偏好性。

公开(公告)号：CN118109492A

公开(公告)日：2024-05-31

申请号：CN202410206644.X

申请日：2024-02-26

Applicant: 江南大学

Inventor： 肖丰旭 ,  李由然 ,  石贵阳 ,  刘苏鑫 ,  李晨星 ,  张玉鹏 ,  丁重阳 ,  张梁

IPC: C12N15/55 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12R1/10

Abstract: 本发明属于基因技术领域，公开了一种地衣芽胞杆菌基因组编辑载体，包括PN2启动子介导的crRNA表达盒，以及Pmal启动子介导的Cas12a(Cpf1)表达盒，同源修复序列均位于同一载体质粒中。重组的载体质粒进入地衣芽孢杆菌细胞后，Cas12a(Cpf1)在麦芽糖诱导下表达，并在crRNA引导下识别并剪切PAM(5’‑TTTV)序列，只有发生同源修复的转化子才得以存活下来，从而完成了目的基因敲除或插入。本发明所构建的CRISPR‑Cas12a(Cpf1)系统针对同一位点的敲除效率均为100％，与现有地衣芽孢杆菌基因组编辑系统相比，更加高效，更加便捷。

公开(公告)号：CN112062822B

公开(公告)日：2022-02-01

申请号：CN202011017359.1

申请日：2020-09-24

Applicant: 江南大学

Inventor： 石贵阳 ,  李由然 ,  张玉鹏 ,  肖丰旭 ,  王瀚容 ,  张梁 ,  丁重阳 ,  徐沙 ,  顾正华

IPC: C07K14/32 ,  C12N15/31 ,  C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12R1/10

Abstract: 本发明公开了一种碳分解代谢调控蛋白CcpA突变体I42A，属于蛋白质工程技术领域。本发明对从地衣芽孢杆菌基因组中克隆的CcpA基因进行突变，得到的一种碳分解代谢调控蛋白CcpA突变体I42A，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，编码其的基因核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明构建了包含编码上述CcpA突变体I42A基因的重组表达载体，并将构建的表达载体转化到地衣芽孢杆菌CcpA基因缺陷株中获得重组地衣芽孢杆菌；所获得的重组地衣芽孢杆菌能够明显改变由于葡萄糖存在而产生的碳分解代谢阻遏现象，能够降低地衣芽孢杆菌对木糖的偏好性。

公开(公告)号：CN118006529A

公开(公告)日：2024-05-10

申请号：CN202410161168.4

申请日：2024-02-05

Applicant: 江南大学

Inventor： 肖丰旭 ,  李由然 ,  石贵阳 ,  张玉鹏 ,  张丽欢 ,  张梁 ,  丁重阳 ,  徐沙 ,  顾正华

IPC: C12N1/21 ,  C12N15/75 ,  C07K14/32 ,  C12N9/04 ,  C12N15/31 ,  C12N15/53 ,  C12P13/04 ,  C12R1/10

Abstract: 本发明公开了一种同时利用葡萄糖与甘露醇的地衣芽孢杆菌重组菌株，属于合成生物学与代谢工程技术领域。本发明通过在ccpA缺失菌株中过表达mtlA、mtlF和mtlD，使甘露醇代谢途径不再受到葡萄糖的分解代谢抑制，使得地衣芽孢杆菌在面对葡萄糖与甘露醇时可以共利用。本发明的技术方案可以明显改变地衣芽孢杆菌的碳源偏好性，可以实现葡萄糖与甘露醇的共同利用。

公开(公告)号：CN111690676A

公开(公告)日：2020-09-22

申请号：CN202010597814.3

申请日：2020-06-28

Applicant: 江南大学

Inventor： 石贵阳 ,  李由然 ,  肖丰旭 ,  张梁 ,  丁重阳 ,  徐沙 ,  顾正华 ,  张玉鹏 ,  王瀚容

IPC: C12N15/75 ,  C12N1/21 ,  C12R1/10

Abstract: 本发明公开了一种调控目的基因表达和CCA效应的元件，属于生物工程技术领域。所述元件包括载体、启动子和靶基因结合序列，所述靶基因结合序列为AGCTTT-Y-AAAGCT或AAAGCT-Y-AGCTTT(Y代表长度为0-14bp的核苷酸序列)。含有AGCTTT-Y-AAAGCT的元件，响应葡萄糖存在时的CCA效应，甘油存在时的CCR效应；含AAAGCT-Y-AGCTTT的元件，响应葡萄糖存在时的CCR效应，甘油存在时的CCA效应。本发明为后续地衣芽孢杆菌表达原件的开发提供了高效的、靶向的分子手段。