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公开(公告)号：CN104531745B
公开(公告)日：2018-05-04
申请号：CN201410746849.3
申请日：2014-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 我们首次将抗性基因sat整合到质粒pMA5上构建出新的具有NTC抗性质粒pMA5‑sat。另外，实验室前期筛选获得一株核黄素生产菌Bacillus subtilis RF1，该菌株对多种常规抗生素都有一定的抗性，所以对于该菌株运用质粒表达外源基因的抗性筛选造成了困难。为了验证所构建新型质粒的实用性，首次将来自Bacillus subtilis RF1自身的葡萄糖‑6‑磷酸脱氢酶基因zwf连接抗性质粒pMA5‑sat上，得到表达载体pMA5‑sat‑zwf,将表达载体转化到核黄素生产菌Bacillus subtilis RF1中得到重组菌Bacillus subtilis RF1/pMA5‑sat‑zwf。多次发酵罐结果表明重组菌发酵60h核黄素产量达到12.01g/L，比原始菌的9.22g/L提高了30.3％。说明新构建的重组质粒pMA5‑sat能够用于枯草芽孢杆菌的代谢改造。
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公开(公告)号：CN106190942A
公开(公告)日：2016-12-07
申请号：CN201610592588.3
申请日：2016-07-26
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明公开了一种通过敲除黄素还原酶提高L-精氨酸产量的方法，属于微生物发酵生产氨基酸技术领域。本发明通过将钝齿棒杆菌SDNN403中编码假定NADPH-依赖型FMN还原酶基因frd1和frd2在E.coli BL21中过表达并纯化出目标蛋白Frd181和Frd188，对其功能进行鉴定，结果表明Frd181和Frd188蛋白均为产H2O2NAD(P)H-依赖型黄素还原酶。以钝齿棒杆菌SDNN403基因组为模板，通过重叠延伸PCR获取frd1和frd2基因缺失片段，并连接pK18mobsacB，得到敲除质粒pK18mobsacB-Δfrd1和pK18mobsacB-Δfrd2，通过电击转化钝齿棒杆菌SDNN403，二次筛选得到重组菌株403Δfrd1和403Δfrd2。摇瓶发酵发现，通过敲除frd1和frd2基因，L-精氨酸产量明显提高。
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公开(公告)号：CN103114083A
公开(公告)日：2013-05-22
申请号：CN201210210409.7
申请日：2012-06-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 一种温度两阶段控制策略发酵生产β-甘露聚糖酶的方法，属于环境因素分阶段控制策略在发酵过程优化中的应用技术领域。本发明采用重组枯草芽孢杆菌BPM1003为出发菌株，菌体生长阶段，控制温度为37℃，发酵培养16h菌体生长基本达到稳定期，将发酵温度降到25℃，发酵至40h结束。采用此策略进行发酵，最终实现了提高β-甘露聚糖酶产量的目的。本发明的优点在于工艺简便易行，能有效地提高β-甘露聚糖酶的产量。同时对其它酶的发酵生产具有一定的指导意义。
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公开(公告)号：CN106191152B
公开(公告)日：2019-04-16
申请号：CN201610574794.1
申请日：2016-07-20
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明通过增强氨同化作用促进钝齿棒杆菌L‑精氨酸合成。主要是将氨同化途径关键酶钝齿棒杆菌来源谷氨酰胺合酶编码基因glnA和谷氨酸脱氢酶编码基因gdh，以及大肠杆菌来源的天冬氨酸酶编码基因aspA在钝齿棒杆菌SDNN403中过量共表达，可以有效提高钝齿棒杆菌SDNN403L‑精氨酸产量。
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公开(公告)号：CN104894078A
公开(公告)日：2015-09-09
申请号：CN201510252442.X
申请日：2015-05-18
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12N9/0059 , C12Y110/03001
Abstract: 本发明涉及通过基因工程改造获得的链霉菌酪氨酸酶。本发明所述的一种定点突变改造的基因工程酪氨酸酶，其特征在于所述定点突变的基因工程链霉菌酪氨酸酶氨基酸序列相对于天然的链霉菌酪氨酸酶氨基酸序列的第7位谷氨酰胺突变为赖氨酸，第234位甘氨酸突变为脯氨酸。本发明所述的基因工程链霉菌酪氨酸酶最适温度相对于天然的链霉菌酪氨酸酶提高了10℃，在60℃下的半衰期提高了3倍，为其高效合成黑色素奠定了基础。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN104403975A
公开(公告)日：2015-03-11
申请号：CN201410749202.6
申请日：2014-12-09
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明成功筛选到一株以酪氨酸为底物，生产黑色素的菌株，通过16S rRNA鉴定，发现该菌株与Streptomyces kathirae相似度最高，故将其命名为Streptomyces kathirae SC-1，与国内外已报道产黑色素链霉菌16Sr RNA进行对比，发现其最高相似度仅为95.37％，说明Streptomyces kathirae SC-1是一株新型产黑色素链霉菌，该菌株已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC M 2012432。对该菌株所产黑色素进行了光谱学鉴定，证明所产黑色物质为黑色素，发现该黑色素可以螯合Cu2+、Al3+、Fe3+，并且对Al3+的螯合作用尤其显著。因此，S.kathirae SC-1为一种新型产黑色素菌株。在种子培养基中活化后，接种于最优培养基中，28℃，200rpm的摇床上发酵5d，该菌株的黑色素产量可达到13.7g/L，达到领先水平。
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公开(公告)号：CN102816823B
公开(公告)日：2014-10-22
申请号：CN201210210399.7
申请日：2012-09-18
Applicant: 江南大学
Abstract: 利用多阶段转速调控策略提高Bacillus subtilis发酵生产核黄素产量的方法，属于溶氧控制技术在发酵过程优化应用方面的技术领域。在发酵0-26h搅拌转速控制在600rpm，26-31h搅拌转速控制在700rpm，31-35h搅拌转速控制在800rpm，36-48h搅拌转速控制在900rpm，用此多阶段搅拌转速控制工艺，核黄素产量得到显著提高。本发明的优点在于工艺简单易行、高效，有着重要的工业应用价值，对其它溶氧要求很高的发酵生产过程具有一定的指导和启迪意义。
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公开(公告)号：CN103602624A
公开(公告)日：2014-02-26
申请号：CN201310342415.2
申请日：2013-08-08
Applicant: 江南大学
Abstract: 本发明从B.amyloliqefaciens B10-127中克隆出参与2,3-丁二醇合成途径中辅酶循环再生的关键酶基因3-磷酸甘油醛脱氢酶(gapdh)和3-羟基-2-丁酮还原酶(acr)，并将该基因与穿梭表达质粒pMA5-HpaII连接，成功构建了携带基因gapdh和acr基因的穿梭表达质粒pMA5-HpaII-acr-HapII-gapdh，并转入解淀粉芽孢杆菌B10-127中，获得加强gapdh和acr基因表达的解淀粉芽孢杆菌pMA5-HpaII-acr-HapII-gapdh／B.amyloliquefaciens。原始菌株相比，重组菌2,3-丁二醇产量提高了14.7％，副产物如3-羟基-2-丁酮、乳酸和丁二酸的积累分别降低65.6％、43.8％和42.4％，且发酵周期有所缩短。通过补料流加发酵，2,3-丁二醇产量达到121.3g／L。
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公开(公告)号：CN106191152A
公开(公告)日：2016-12-07
申请号：CN201610574794.1
申请日：2016-07-20
Applicant: 江南大学
CPC classification number: C12P13/10 , C12N9/0016 , C12N9/88 , C12N9/93 , C12N15/77 , C12N2800/101 , C12Y104/01002 , C12Y104/01003 , C12Y104/01004 , C12Y403/01001 , C12Y603/01002
Abstract: 本发明通过增强氨同化作用促进钝齿棒杆菌L-精氨酸合成。主要是将氨同化途径关键酶钝齿棒杆菌来源谷氨酰胺合酶编码基因glnA和谷氨酸脱氢酶编码基因gdh，以及大肠杆菌来源的天冬氨酸酶编码基因aspA在钝齿棒杆菌SDNN403中过量共表达，可以有效提高钝齿棒杆菌SDNN403L-精氨酸产量。
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公开(公告)号：CN103981231B
公开(公告)日：2016-08-24
申请号：CN201410249335.7
申请日：2014-06-05
Applicant: 江南大学
Abstract: 本实验室前期对钝齿棒杆菌发酵生产L?精氨酸的诱变育种以及菌株代谢工程改造进行了系统的研究，相关成果已授权国家发明专利4项。基于前期研究，本发明提供了一种高产L?精氨酸钝齿棒杆菌分批发酵优化工艺，是在之前利用钝齿棒杆菌发酵生产L?精氨酸的工艺基础上进行了改进，主要通过种子培养以及发酵工艺改进来提高L?精氨酸产量。该工艺种子培养过程中，种子生长迅速且最终菌浓较高。该工艺发酵过程中发酵培养基成分简单，无需添加维生素、氨基酸等微量元素，工艺控制简单，菌株发酵性能稳定，L?精氨酸产量达到56.3g/L，为国内目前最高产量之一；糖酸转化率达到32％，为国内目前最高水平。
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