公开(公告)号：CN115710557A

公开(公告)日：2023-02-24

申请号：CN202210820746.1

申请日：2022-07-13

Applicant: 江南大学 ,  鄂尔多斯市中轩生化股份有限公司

Inventor： 刘龙 ,  孙正艳 ,  陈坚 ,  崔佳 ,  吕雪芹 ,  堵国成 ,  方杰 ,  李江华 ,  董金儒 ,  刘延峰 ,  孔晓

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/81 ,  C12N15/54 ,  C12N15/53 ,  C12N15/60 ,  C12P5/00 ,  C12R1/865

Abstract: 本发明公开了一种生产D‑柠檬烯的重组酵母菌株及其构建方法，本发明在前期构建的菌株MKL8的基础上继续优化前体乙酰辅酶A和NADPH辅因子水平，为胞内柠檬烯合成创造了较优条件，并增加胞内柠檬烯合酶拷贝数由2个至8个，摇瓶发酵实现产量由原来的657mg/L，提升至1248mg/L，比原产量提高1.90倍。再运用区室化工程将柠檬烯合成全途径酶定位至线粒体，实现重组酿酒酵母菌株柠檬烯在线粒体内的同步高效合成。综合运用细胞质与线粒体双重调控使柠檬烯的产量得到进一步的提升至1392mg/L，最终实现柠檬烯在酿酒酵母中的高效合成，重组酵母菌株相对于原菌株具有较好的生长速率，具有较大的应用推广价值。

公开(公告)号：CN114606146B

公开(公告)日：2023-03-17

申请号：CN202210243089.9

申请日：2022-03-11

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘龙 ,  陈坚 ,  吕雪芹 ,  堵国成 ,  李江华 ,  刘延峰 ,  孔晓

IPC: C12N1/19 ,  C12P5/00 ,  C12R1/865 ,  C12R1/84 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明属于代谢工程领域，具体涉及一种生产D‑柠檬烯的酿酒酵母及其应用。本发明以酿酒酵母为出发菌株，将自然界中不存在于同一生物体的柠檬烯合成酶基因有机整合到酿酒酵母中，优化外源基因的表达，过表达MVA途径基因关键基因、增加乙酰辅酶A和NADPH前体供应等方面，实现柠檬烯在酿酒酵母中的高效合成，最终得到的菌株相对于原菌株具有较好的生长速率。摇瓶发酵最终实现柠檬烯产量达657mg/L，比原产量提高2.021倍，实现柠檬烯在酿酒酵母中的高效合成，具有较大的应用推广价值。

公开(公告)号：CN114606146A

公开(公告)日：2022-06-10

申请号：CN202210243089.9

申请日：2022-03-11

Applicant: 江南大学

Inventor： 刘龙 ,  陈坚 ,  吕雪芹 ,  堵国成 ,  李江华 ,  刘延峰 ,  孔晓

IPC: C12N1/19 ,  C12P5/00 ,  C12R1/865 ,  C12R1/84 ,  C12R1/645

Abstract: 本发明属于代谢工程领域，具体涉及一种生产D‑柠檬烯的酿酒酵母及其应用。本发明以酿酒酵母为出发菌株，将自然界中不存在于同一生物体的柠檬烯合成酶基因有机整合到酿酒酵母中，优化外源基因的表达，过表达MVA途径基因关键基因、增加乙酰辅酶A和NADPH前体供应等方面，实现柠檬烯在酿酒酵母中的高效合成，最终得到的菌株相对于原菌株具有较好的生长速率。摇瓶发酵最终实现柠檬烯产量达657mg/L，比原产量提高2.021倍，实现柠檬烯在酿酒酵母中的高效合成，具有较大的应用推广价值。