一种胞内融合表达型前T载体及其制备与应用

    公开(公告)号:CN101381738B

    公开(公告)日:2012-02-01

    申请号:CN200710071213.3

    申请日:2007-09-06

    Abstract: 本发明提供了一种胞内融合表达型前T载体,由如下方法制备得到:(1)构建编码BspTI-GSGSG-HHHHHH-XcmI-Ampr-XcmI-HindIII的DNA1片段;(2)定点突变pET39质粒中LacI基因内部的三个XcmI位点,在编码氨基酸序列不变的情况下,改变DNA序列,使XcmI识别位点丧失,得到定点突变消除XcmI位点的pET39-1;(3)利用BspTI和HindIII将DNA1定向重组于pET39-2中;(4)去除pET39-2中DsbA信号肽基因,得到所述胞内融合表达型前T载体。本发明除了使用XcmI制备线形T载体外,不需要用其它限制性内切酶,可一步法构建融合表达基因工程菌,为大量制备活性肽工程菌库提供了可行的技术方法。

    一种前T载体及其制备与应用

    公开(公告)号:CN101333538B

    公开(公告)日:2010-12-08

    申请号:CN200710069815.5

    申请日:2007-06-29

    Abstract: 本发明提供了一种前T载体,由以下方法制备得到:(1)以含有氨苄青霉素除外的大肠杆菌敏感的抗生素的抗性基因的质粒为模板进行PCR扩增,在引物的5’末端引入XcmI酶切位点,扩增得到含有所述抗生素的抗性基因及其上下游表达调控序列、两端含有XcmI酶切位点的DNA片段;(2)用T4DNA连接酶将步骤(1)得到的DNA片段和pUCmT载体进行连接;(3)将步骤(2)所得连接产物转化大肠杆菌DH5α或JM109,筛选阳性克隆,即得所述前T载体。本发明的有益效果主要体现在:用本发明前T载体制备得到的载体可用于快速克隆PCR产物,筛选阳性克隆过程中不需要使用X-gal、阴性率低。

    一种胞内融合表达型前T载体及其制备与应用

    公开(公告)号:CN101381738A

    公开(公告)日:2009-03-11

    申请号:CN200710071213.3

    申请日:2007-09-06

    Abstract: 本发明提供了一种胞内融合表达型前T载体,由如下方法制备得到:(1)构建编码BspTI-GSGSG-HHHHHH-XcmI-Ampr-XcmI-HindIII的DNA1片段;(2)定点突变pET39质粒中LacI基因内部的三个XcmI位点,在编码氨基酸序列不变的情况下,改变DNA序列,使XcmI识别位点丧失,得到定点突变消除XcmI位点的pET39-1;(3)利用BspTI和HindIII将DNA1定向重组于pET39-2中;(4)去除pET39-2中DsbA信号肽基因,得到所述胞内融合表达型前T载体。本发明除了使用XcmI制备线形T载体外,不需要用其它限制性内切酶,可一步法构建融合表达基因工程菌,为大量制备活性肽工程菌库提供了可行的技术方法。

    含锌抗生素菌渣的处理方法

    公开(公告)号:CN1270799C

    公开(公告)日:2006-08-23

    申请号:CN200310108527.8

    申请日:2003-11-03

    CPC classification number: Y02P10/234

    Abstract: 本发明提供了一种含锌抗生素菌渣的处理方法,按如下步骤进行:(1)用水将菌渣稀释成混悬液,再用酸将混悬液的pH值调至酸性范围,使菌渣中的锌由氢氧化锌转变为易溶的离子形式;(2)将步骤(1)取得的酸性混悬液流经二价金属离子吸附柱,得脱锌抗生素菌渣;这种吸附柱的介质还可再生。含锌抗生素菌渣经过脱锌处理,可以被生物利用,不仅解决了废菌渣对环境的污染问题,还可以通过综合利用产生经济效益;使一种难以治理的环境污染物通过简单的工艺技术转变为绿色环保的对人们有用的菌渣。

    一种保健红曲糯米酒及其制备方法

    公开(公告)号:CN106754057B

    公开(公告)日:2021-04-09

    申请号:CN201611250475.1

    申请日:2016-12-30

    Abstract: 本发明提供了一种保健红曲糯米酒及其制备方法,所述保健红曲糯米酒由以下重量份的原料制成:糯米100‑120份、中药组合配料6‑12份、红曲20‑25份、聚赖氨酸0.05‑1份和水120‑150份,所述中药组合配料由以下重量份数原料组成:前处理的荷叶25‑30份、前处理的决明子30‑40份、前处理的橙皮15‑20份,前处理的山楂10‑30份。本发明提供的保健红曲糯米酒具有行气止痛、活血化疲、清热祛湿、降脂减肥、抑菌抗病毒及抗氧化等功效,通过加入聚赖氨酸,解决了传统糯米红曲酒中桔霉素含量高的问题。

    一种周质分泌融合表达型前T载体及其制备与应用

    公开(公告)号:CN101381739B

    公开(公告)日:2012-02-01

    申请号:CN200710071214.8

    申请日:2007-09-06

    Abstract: 本发明提供了一种周质分泌融合表达型前T载体,由如下方法制备得到:(1)构建编码BspTI-GSGSG-HHHHHH-XcmI-Ampr-XcmI-HindIII的DNA 1片段;(2)定点突变pET39质粒中LacI基因内部的三个XcmI位点,在编码氨基酸序列不变的情况下,改变DNA序列,使XcmI识别位点丧失,得到定点突变消除XcmI位点的pET39’;(3)利用BspTI和HindIII将DNA1定向重组于pET39’中,得到所述周质分泌融合表达型前T载体。本发明除了使用XcmI制备线形T载体外,不需要用其它限制性内切酶,一步法构建融合表达基因工程菌,为大量制备活性肽工程菌库提供了可行的技术方法。

    一种表达型前T载体及其制备与应用

    公开(公告)号:CN101333537B

    公开(公告)日:2011-02-02

    申请号:CN200710069814.0

    申请日:2007-06-29

    Abstract: 本发明提供了一种可用于快速克隆和表达目的基因PCR产物的一种表达型前T载体,及其制备与应用。本发明的有益效果主要体现在:一步法使目的基因克隆并得到表达,省略复杂的重组过程;在构建过程中无需对PCR产物进行纯化、酶切,前T载体用XcmI单酶切即可得到线性化的T载体,酶切效率高,无需使用其他限制性内切酶参与;目的基因无需使用价格昂贵的IPTG诱导,可以低成本地进行大规模工程菌发酵;可在目的基因得到表达后再进行测序鉴定,将表达结果符合期望的转化子送DNA测序公司测序可以提高测序成功率,节约经费。

    一种周质分泌融合表达型前T载体及其制备与应用

    公开(公告)号:CN101381739A

    公开(公告)日:2009-03-11

    申请号:CN200710071214.8

    申请日:2007-09-06

    Abstract: 本发明提供了一种周质分泌融合表达型前T载体,由如下方法制备得到:(1)构建编码BspTI-GSGSG-HHHHHH-XcmI-Ampr-XcmI-HindIII的DNA1片段;(2)定点突变pET39质粒中LacI基因内部的三个XcmI位点,在编码氨基酸序列不变的情况下,改变DNA序列,使XcmI识别位点丧失,得到定点突变消除XcmI位点的pET39’;(3)利用BspTI和HindIII将DNA1定向重组于pET39’中,得到所述周质分泌融合表达型前T载体。本发明除了使用XcmI制备线形T载体外,不需要用其它限制性内切酶,一步法构建融合表达基因工程菌,为大量制备活性肽工程菌库提供了可行的技术方法。

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