公开(公告)号：CN118957026A

公开(公告)日：2024-11-15

申请号：CN202411166817.6

申请日：2024-08-23

Applicant: 浙江省淡水水产研究所

Inventor： 沈亚芳 ,  郝贵杰 ,  杨庆满 ,  汪江琦 ,  吴琦芳 ,  徐铃威 ,  周冬仁 ,  崔雁娜 ,  张海琪 ,  郑阿钦

IPC: C12Q1/682 ,  G01N21/64

Abstract: 本发明公开了一种基于DNase I‑CRISPR的恩诺沙星快速检测方法。本方法为：将恩诺沙星单克隆抗体修饰的磁珠、牛血清白蛋白‑恩诺沙星复合物和DNase I修饰的金纳米颗粒与样品溶液混合反应，磁分离洗涤后，重悬于DEPC水中；随后加入DNase I反应缓冲液和单链DNA，单链DNA能被DNase I水解和激活CRISPR/Cas12a的切割活性，反应后取清液，加入Cas12a蛋白、NEBuffer r2.1、crRNA、RNA酶抑制剂和荧光探针，反应后测量荧光值，将荧光值代入标准曲线中，得到恩诺沙星浓度。本发明检测方法灵敏度高，具备可视化定性/半定量检测恩诺沙星的能力和良好的发展前景。

公开(公告)号：CN119044477A

公开(公告)日：2024-11-29

申请号：CN202411166825.0

申请日：2024-08-23

Applicant: 浙江省淡水水产研究所

Inventor： 沈亚芳 ,  汪江琦 ,  郝贵杰 ,  周冬仁 ,  徐铃威 ,  杨庆满 ,  张海琪 ,  郑阿钦 ,  崔雁娜

IPC: G01N33/543 ,  G01N33/577

Abstract: 本发明公开了一种基于磁珠磁分离‑信号输出双重功能的恩诺沙星可视化快速检测方法。本发明方法具体为：1)在粒径为100～1000nm的羧基化磁珠表面修饰恩诺沙星单克隆抗体，封闭后得到免疫磁珠分散液；2)将恩诺沙星‑牛血清白蛋白复合物与粒径为10～50nm的羧基化磁珠偶联，封闭后得到标记磁珠分散液；3)将免疫磁珠分散液与样品溶液混合，反应后得到混合分散液；4)将标记磁珠分散液与混合分散液混合，反应后经磁分离取清液，并检测清液在405nm下的吸光度；5)将吸光度代入标准曲线，得到恩诺沙星浓度。本发明方法简单、快速、灵敏度高，而且具备可视化定性/半定量的能力，可现场快速检测恩诺沙星。