公开(公告)号：CN104726495A

公开(公告)日：2015-06-24

申请号：CN201510131862.2

申请日：2015-03-25

Applicant: 西北农林科技大学 ,  杨凌科元克隆股份有限公司

Inventor： 张涌 ,  靳亚平 ,  崔趁趁 ,  刘军 ,  葛恒涛 ,  宋玉洁

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/55 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  C12N15/873

Abstract: 本发明公开了一种基于TALEN介导的基因打靶敲除山羊BLG的载体及重组细胞。本发明根据山羊β-乳球蛋白基因，设计并构建了针对其第一外显子的TALEN真核表达载体以及含有较短同源臂的BLG基因敲除载体，与以TALEN表达载体为模板体外转录的mRNAs共同转染山羊胎儿成纤维细胞，经药物筛选及鉴定后得到β-乳球蛋白基因敲除细胞。本发明利用TALEN技术大大提高了基因打靶效率，同时较短同源臂的利用可以更方便高效的进行中靶细胞的筛选，mRNAs的利用则避免了TALEN表达载体在基因组中的随机整合。

公开(公告)号：CN104726495B

公开(公告)日：2018-06-19

申请号：CN201510131862.2

申请日：2015-03-25

Applicant: 西北农林科技大学 ,  杨凌科元克隆股份有限公司

Inventor： 张涌 ,  靳亚平 ,  崔趁趁 ,  刘军 ,  葛恒涛 ,  宋玉洁

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/55 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  C12N15/873

Abstract: 本发明公开了一种基于TALEN介导的基因打靶敲除山羊BLG的载体及重组细胞。本发明根据山羊β‑乳球蛋白基因，设计并构建了针对其第一外显子的TALEN真核表达载体以及含有较短同源臂的BLG基因敲除载体，与以TALEN表达载体为模板体外转录的mRNAs共同转染山羊胎儿成纤维细胞，经药物筛选及鉴定后得到β‑乳球蛋白基因敲除细胞。本发明利用TALEN技术大大提高了基因打靶效率，同时较短同源臂的利用可以更方便高效的进行中靶细胞的筛选，mRNAs的利用则避免了TALEN表达载体在基因组中的随机整合。