公开(公告)号：CN104726495A

公开(公告)日：2015-06-24

申请号：CN201510131862.2

申请日：2015-03-25

Applicant: 西北农林科技大学 ,  杨凌科元克隆股份有限公司

Inventor： 张涌 ,  靳亚平 ,  崔趁趁 ,  刘军 ,  葛恒涛 ,  宋玉洁

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/55 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  C12N15/873

Abstract: 本发明公开了一种基于TALEN介导的基因打靶敲除山羊BLG的载体及重组细胞。本发明根据山羊β-乳球蛋白基因，设计并构建了针对其第一外显子的TALEN真核表达载体以及含有较短同源臂的BLG基因敲除载体，与以TALEN表达载体为模板体外转录的mRNAs共同转染山羊胎儿成纤维细胞，经药物筛选及鉴定后得到β-乳球蛋白基因敲除细胞。本发明利用TALEN技术大大提高了基因打靶效率，同时较短同源臂的利用可以更方便高效的进行中靶细胞的筛选，mRNAs的利用则避免了TALEN表达载体在基因组中的随机整合。

公开(公告)号：CN104726495B

公开(公告)日：2018-06-19

申请号：CN201510131862.2

申请日：2015-03-25

Applicant: 西北农林科技大学 ,  杨凌科元克隆股份有限公司

Inventor： 张涌 ,  靳亚平 ,  崔趁趁 ,  刘军 ,  葛恒涛 ,  宋玉洁

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/55 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10 ,  C12N15/873

Abstract: 本发明公开了一种基于TALEN介导的基因打靶敲除山羊BLG的载体及重组细胞。本发明根据山羊β‑乳球蛋白基因，设计并构建了针对其第一外显子的TALEN真核表达载体以及含有较短同源臂的BLG基因敲除载体，与以TALEN表达载体为模板体外转录的mRNAs共同转染山羊胎儿成纤维细胞，经药物筛选及鉴定后得到β‑乳球蛋白基因敲除细胞。本发明利用TALEN技术大大提高了基因打靶效率，同时较短同源臂的利用可以更方便高效的进行中靶细胞的筛选，mRNAs的利用则避免了TALEN表达载体在基因组中的随机整合。

公开(公告)号：CN108611371A

公开(公告)日：2018-10-02

申请号：CN201810457000.2

申请日：2018-05-14

Applicant: 西北农林科技大学

Inventor： 张涌 ,  刘军 ,  葛恒涛 ,  苏建民 ,  王勇胜 ,  权富生

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/90 ,  C12N15/873 ,  C12N15/62 ,  A01K67/027 ,  C07K19/00 ,  A61K39/12 ,  A61P31/14

CPC classification number: C12N15/85 ,  A01K67/0278 ,  A01K2217/072 ,  A01K2227/102 ,  A01K2267/01 ,  A61K39/12 ,  A61K2039/552 ,  A61P31/14 ,  C07K14/005 ,  C07K2319/00 ,  C07K2319/21 ,  C12N9/22 ,  C12N15/62 ,  C12N15/65 ,  C12N15/873 ,  C12N15/907 ,  C12N2770/10022 ,  C12N2770/10034 ,  C12N2800/107 ,  C12N2800/30 ,  C12N2830/50

Abstract: 本发明公开了乳汁中表达GP5-M融合蛋白的羊乳腺生物反应器的制备方法，制备GP5-M融合表达的基因打靶载体，敲入奶山羊β-乳球蛋白第一外显子上，筛选中靶细胞，利用体细胞核移植技术制备转基因奶山羊，通过乳腺生物反应器生产含有GP5-M融合蛋白的乳汁，从乳汁中分离纯化GP5-M融合蛋白，添加佐剂制备基因工程亚单位疫苗，达到防控PRRS的目的。