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公开(公告)号：CN113325175A
公开(公告)日：2021-08-31
申请号：CN202110613582.0
申请日：2021-06-02
Applicant: 贵州大学
IPC: G01N33/569 , C07K16/10
Abstract: 本发明公开了一种检测禽白血病群特异性抗原的双抗夹心间接ELISA方法，包括：1）用禽白血病病毒RSA株p27基因序列设计一对引物以扩增p27基因，构建重组表达载体经诱导表达获得重组表达蛋白上清表达，上清表达经过纯化后作为免疫原，制备兔源、鼠源多克隆抗体；2）对包被兔源多克隆抗体的酶标板进行洗涤，37℃封闭1h，洗板；3）加入待检血清进行孵育，洗板；4）加入鼠源多克隆抗体进行孵育，洗板；5）加入酶标二抗进行孵育，洗板；6）加入TMB显色液显色，最后加入显色终止液，终止反应；7）利用酶标仪测定步骤4）酶标板孔中液体OD450nm值，根据临界值判定阴阳性。本发明具有制备周期短，成本低，特异性及重复性好，敏感性高，可靠性好等优点。
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公开(公告)号：CN116970740A
公开(公告)日：2023-10-31
申请号：CN202310840712.3
申请日：2023-07-10
Applicant: 贵州大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明属于生物病原体检测技术领域，具体涉及一种MDV TaqMan荧光定量PCR检测方法及组合物。该组合物组合物含有用于检测马立克病病毒的引物和探针，具体包括，核苷酸序列依次如SEQ ID NO：1‑3所示的上游引物、下游引物和探针。该检测方法为：提取待测样本的DNA，以所述DNA为模板，采用序列如SEQ ID NO：1‑3所示的引物和探针进行PCR扩增，根据测得的Ct值对待测样本进行定性和/或定量检测。本发明基于MDV序列保守区设计特异性引物，在通过构建标准品质粒，绘制标准曲线，建立操作简易、敏感性高、重复性好、特异性强的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法，可以实现MDV的有效检测。
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公开(公告)号：CN116804234A
公开(公告)日：2023-09-26
申请号：CN202310840548.6
申请日：2023-07-10
Applicant: 贵州大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种检测MDV、ALV和REV的组合物、检测方法与应用。本发明分别设计了用于检测MDV、ALV和REV的引物和探针，并提供了一种同时检测MDV、ALV和REV的方法。该方法为：提取疑似感染免疫抑制病病原的家禽的样本DNA/cDNA，并以DNA/cDNA为模板，利用设计的引物和探针对DNA模板进行PCR扩增；根据扩增结果判断待测样本是否感染MDV、ALV和/或REV。本发明建立的三重TaqMan实时荧光定量PCR检测方法灵敏度高、重复性好、特异性强，可用于临床上MDV、REV、ALV的感染检测，对家禽免疫抑制病病原共感疾病的预防和控制具有重要意义。
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公开(公告)号：CN116334316A
公开(公告)日：2023-06-27
申请号：CN202310511276.5
申请日：2023-05-08
Applicant: 贵州大学
IPC: C12Q1/70 , C12Q1/6851 , C12N15/11 , C12R1/93
Abstract: 本发明属于生物病原体检测技术领域，具体涉及一种MDV TaqMan荧光定量PCR检测方法及组合物。该组合物组合物含有用于检测马立克病病毒的引物和探针，具体包括，核苷酸序列依次如SEQ ID NO：1‑3所示的上游引物、下游引物和探针。该检测方法为：提取待测样本的DNA，以所述DNA为模板，采用序列如SEQ ID NO：1‑3所示的引物和探针进行PCR扩增，根据测得的Ct值对待测样本进行定性和/或定量检测。本发明基于MDV序列保守区设计特异性引物，在通过构建标准品质粒，绘制标准曲线，建立操作简易、敏感性高、重复性好、特异性强的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法，可以实现MDV的有效检测。
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