一种同步检测花毛茛中五种重要病毒病原的方法

    公开(公告)号:CN112029907B

    公开(公告)日:2023-04-11

    申请号:CN202010918969.2

    申请日:2020-09-04

    Abstract: 本发明公开了一种同步检测花毛茛中五种重要病毒病原的方法,所述的五种重要病毒病原为花毛茛轻花叶病毒、花毛茛隐症病毒、花毛茛白斑驳病毒、花毛茛花叶病毒和花毛茛叶片皱缩病毒。本发明应用通过提取植物总RNA或病毒RNA、随机引物合成不同种类病毒cDNA第一链、5种病毒特异引物多重复合PCR检测,省略了单一病毒引物逆转录合成cDNA第一链和病毒核苷酸序列测定与分析等步骤,利用多重PCR的快速和灵敏性获得目的片段,为大量、快速、准确、灵敏检测各类花毛茛病毒病样品建立了一种科学的方法。

    一种马铃薯病毒的快速灵敏检测方法

    公开(公告)号:CN103757138B

    公开(公告)日:2015-02-25

    申请号:CN201410034605.2

    申请日:2014-01-25

    Inventor: 丁铭 卢训 张仲凯

    Abstract: 本发明公开了一种云南马铃薯主栽品种丽薯6号、云薯401、宣薯2号病株中马铃薯Y病毒、马铃薯X病毒、马铃薯A病毒和马铃薯卷叶病毒4种病毒的检测方法。本发明通过对云南马铃薯主栽品种丽薯6号、云薯401、宣薯2号病株中马铃薯Y病毒、马铃薯X病毒、马铃薯A病毒和马铃薯卷叶病毒4种特异性混合抗体诱捕病样中病毒,不必提取样品总RNA进行随机引物逆转录和特异性病毒引物复合PCR反应。本方法将快速、特异的免疫沉淀与灵敏的复合RT-PCR结合,同时设置健康马铃薯随机引物cDNA产物和相应病毒PCR特异片段阳性质粒作为阴、阳性对照,从而快速、准确、灵敏的应用于检测田间马铃薯植株样品、抗病毒材料及田间环境疑似侵染源等方面。

    一种定量检测植物病毒的荧光免疫斑点法

    公开(公告)号:CN103760346A

    公开(公告)日:2014-04-30

    申请号:CN201410034665.4

    申请日:2014-01-25

    Inventor: 丁铭 卢训 张仲凯

    CPC classification number: G01N33/56983 G01N33/582

    Abstract: 本发明公开了一种定量检测植物病毒的荧光免疫斑点法,是将待测样品研磨,制备检测样品上样液,配制阳性、阴性及空白对照上样液,测出阳性对照上样液的病毒粒体平均数d。将2.0~2.5μl检测样品上样液、阳性、阴性及空白对照上样液分别点在硝酸纤维素膜上,将膜干燥后封闭0.8~1.2h,依次加入稀释后的一抗、二抗,分别反应0.8~1.2h,每次反应后洗膜3~4次,每次5~6min。将膜稍干燥后置于荧光分光光度计中检测荧光强度m,按照下述公式计算检测样品上样液中待检测病毒的粒体平均数d。阳性对照上样液m值:阳性对照上样液d值=检测样品上样液m值:检测样品上样液d值。所述方法能够实现植物病毒的灵敏准确、快捷高效的定量分析,推广应用价值较高。

    一种马铃薯病毒的快速灵敏检测方法

    公开(公告)号:CN103757138A

    公开(公告)日:2014-04-30

    申请号:CN201410034605.2

    申请日:2014-01-25

    Inventor: 丁铭 卢训 张仲凯

    CPC classification number: C12Q1/70 C12Q1/6804 C12Q2531/113 C12Q2545/101

    Abstract: 本发明公开了一种云南马铃薯主栽品种丽薯6号、云薯401、宣薯2号病株中马铃薯Y病毒、马铃薯X病毒、马铃薯A病毒和马铃薯卷叶病毒4种病毒的检测方法。本发明通过对云南马铃薯主栽品种丽薯6号、云薯401、宣薯2号病株中马铃薯Y病毒、马铃薯X病毒、马铃薯A病毒和马铃薯卷叶病毒4种特异性混合抗体诱捕病样中病毒,不必提取样品总RNA进行随机引物逆转录和特异性病毒引物复合PCR反应。本方法将快速、特异的免疫沉淀与灵敏的复合RT-PCR结合,同时设置健康马铃薯随机引物cDNA产物和相应病毒PCR特异片段阳性质粒作为阴、阳性对照,从而快速、准确、灵敏的应用于检测田间马铃薯植株样品、抗病毒材料及田间环境疑似侵染源等方面。

    一种快速检测蓟马体内番茄斑萎病毒的方法

    公开(公告)号:CN104198713B

    公开(公告)日:2016-02-10

    申请号:CN201410450554.1

    申请日:2014-09-05

    Abstract: 本发明公开了一种快速检测蓟马体内番茄斑萎病毒的方法,将待测的1头或几头蓟马放置到画好分隔的硝酸纤维素膜上,加2μl样品处理缓冲液,用移液枪头将蓟马磨碎于缓冲液中,依次处理不同虫体样品,同样吸取2μl阳性和阴性对照液点在硝酸纤维素膜上;待膜干燥后,用PBST缓冲液配制的5%脱脂奶粉封闭1h,再加入封闭液稀释的一抗培育1h,之后洗膜3次;加入封闭液稀释的二抗培育1h,再洗膜3次;加入显色液显色15min,弃去显色液加入蒸馏水终止显色反应,即可进行结果分析。本发明操作方便、快速、测定结果有良好的稳定性、重现性和准确性,能满足蓟马体内番茄斑萎病毒的检测需要,为尽量避免番茄斑萎病毒的危害奠定了基础。

    基于无菌带孔隔层的低污染、快速更换植物组培培养基的方法

    公开(公告)号:CN118402470A

    公开(公告)日:2024-07-30

    申请号:CN202410657963.2

    申请日:2024-05-24

    Inventor: 陈越 李婷婷 丁铭

    Abstract: 本发明属于植物组织培养技术领域,具体涉及基于无菌带孔隔层的低污染、快速更换植物组培培养基的方法。本发明提供了基于无菌带孔隔层的低污染、快速更换植物组培培养基的方法,包括以下步骤:将无菌带孔隔层置于培养基中;利用所得培养基对植物进行培养得到组培材料;勾起培养基中的无菌带孔隔层得到包含组培材料的无菌带孔隔层;将包含组培材料的无菌带孔隔层平铺至新培养基;或将组培材料从无菌带孔隔层上取下,转接至包含无菌带孔隔层的新培养基。本发明的方法可实现将组培材料快速更换至新培养基,减少微小材料的损失,避免原培养基附着,并缩短更换时间,极大地降低了污染风险。

Patent Agency Ranking