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公开(公告)号:CN115873990A
公开(公告)日:2023-03-31
申请号:CN202211354813.1
申请日:2022-11-01
Applicant: 贵州省烟草公司黔西南州公司 , 贵州省烟草科学研究院 , 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
Abstract: 本发明公开了一种检测烟草病毒的引物组、试剂盒及方法。所述引物组由引物对A、引物对B、引物对C、引物对D四对中的一对或多对组成;所述引物组A由序列表的序列1至序列2所示的单链DNA分子组成的引物对;所述引物组B由序列表的序列3至4所示的单链DNA分子组成的引物对;所述引物组C由序列表的序列5至6所示的单链DNA分子组成的引物对;所述引物组D由序列表的序列7至8所示的单链DNA分子组成的引物对;本发明省略了单一病毒引物逆转录合成cDNA第一链和病毒核苷酸序列测定与分析等步骤,利用多重PCR的快速和灵敏性获得目的片段,为大量、快速、准确、灵敏检测烟草等植株样品建立了一种科学的方法。
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公开(公告)号:CN112029907B
公开(公告)日:2023-04-11
申请号:CN202010918969.2
申请日:2020-09-04
Applicant: 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
Abstract: 本发明公开了一种同步检测花毛茛中五种重要病毒病原的方法,所述的五种重要病毒病原为花毛茛轻花叶病毒、花毛茛隐症病毒、花毛茛白斑驳病毒、花毛茛花叶病毒和花毛茛叶片皱缩病毒。本发明应用通过提取植物总RNA或病毒RNA、随机引物合成不同种类病毒cDNA第一链、5种病毒特异引物多重复合PCR检测,省略了单一病毒引物逆转录合成cDNA第一链和病毒核苷酸序列测定与分析等步骤,利用多重PCR的快速和灵敏性获得目的片段,为大量、快速、准确、灵敏检测各类花毛茛病毒病样品建立了一种科学的方法。
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公开(公告)号:CN109929810A
公开(公告)日:2019-06-25
申请号:CN201910116016.1
申请日:2019-02-15
Applicant: 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
Abstract: 本发明公开了一种马铃薯品种会-2中马铃薯卷叶病毒毒株及其构建方法与应用。所述的马铃薯品种会-2中马铃薯卷叶病毒毒株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏日:2018年11月26日,保藏编号:CGMCC No.16892。马铃薯品种会-2中马铃薯卷叶病毒(Potato virus A,PVA)毒株建立包括样品采集;病原鉴定;会-2品种中单一马铃薯卷叶病毒组培苗建立以及应用。所述的样品采集包括病害调查、样品采集、保存;包括通过带毒薯块幼芽在培养基中诱导为组培苗、在一定温度条件下保存该带有PRLV会-2品种组培苗;应用为所述的马铃薯品种会-2中马铃薯卷叶病毒毒株在检测中的应用。
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公开(公告)号:CN109929809A
公开(公告)日:2019-06-25
申请号:CN201910116012.3
申请日:2019-02-15
Applicant: 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
Abstract: 本发明公开了一种马铃薯品种丽薯6号中马铃薯S病毒毒株及其构建方法与应用。所述的马铃薯品种丽薯6号中马铃薯S病毒毒株保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏日:2018年11月26日,保藏编号:CGMCC No.16893。马铃薯品种丽薯6号中马铃薯S病毒(Potato virus S,PVS)毒株建立包括样品采集;病原鉴定;丽薯6号品种中单一马铃薯卷叶病毒组培苗建立以及应用。所述的样品采集包括病害调查、样品采集、保存;包括通过带毒薯块幼芽在培养基中诱导为组培苗、在一定温度条件下保存该带有PVS丽薯6号品种组培苗;应用为所述的马铃薯品种丽薯6号中马铃薯S病毒毒株在检测中的应用。
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公开(公告)号:CN103757138B
公开(公告)日:2015-02-25
申请号:CN201410034605.2
申请日:2014-01-25
Applicant: 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
Abstract: 本发明公开了一种云南马铃薯主栽品种丽薯6号、云薯401、宣薯2号病株中马铃薯Y病毒、马铃薯X病毒、马铃薯A病毒和马铃薯卷叶病毒4种病毒的检测方法。本发明通过对云南马铃薯主栽品种丽薯6号、云薯401、宣薯2号病株中马铃薯Y病毒、马铃薯X病毒、马铃薯A病毒和马铃薯卷叶病毒4种特异性混合抗体诱捕病样中病毒,不必提取样品总RNA进行随机引物逆转录和特异性病毒引物复合PCR反应。本方法将快速、特异的免疫沉淀与灵敏的复合RT-PCR结合,同时设置健康马铃薯随机引物cDNA产物和相应病毒PCR特异片段阳性质粒作为阴、阳性对照,从而快速、准确、灵敏的应用于检测田间马铃薯植株样品、抗病毒材料及田间环境疑似侵染源等方面。
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公开(公告)号:CN103760346A
公开(公告)日:2014-04-30
申请号:CN201410034665.4
申请日:2014-01-25
Applicant: 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
IPC: G01N33/569 , G01N21/64
CPC classification number: G01N33/56983 , G01N33/582
Abstract: 本发明公开了一种定量检测植物病毒的荧光免疫斑点法,是将待测样品研磨,制备检测样品上样液,配制阳性、阴性及空白对照上样液,测出阳性对照上样液的病毒粒体平均数d。将2.0~2.5μl检测样品上样液、阳性、阴性及空白对照上样液分别点在硝酸纤维素膜上,将膜干燥后封闭0.8~1.2h,依次加入稀释后的一抗、二抗,分别反应0.8~1.2h,每次反应后洗膜3~4次,每次5~6min。将膜稍干燥后置于荧光分光光度计中检测荧光强度m,按照下述公式计算检测样品上样液中待检测病毒的粒体平均数d。阳性对照上样液m值:阳性对照上样液d值=检测样品上样液m值:检测样品上样液d值。所述方法能够实现植物病毒的灵敏准确、快捷高效的定量分析,推广应用价值较高。
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公开(公告)号:CN103757138A
公开(公告)日:2014-04-30
申请号:CN201410034605.2
申请日:2014-01-25
Applicant: 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
CPC classification number: C12Q1/70 , C12Q1/6804 , C12Q2531/113 , C12Q2545/101
Abstract: 本发明公开了一种云南马铃薯主栽品种丽薯6号、云薯401、宣薯2号病株中马铃薯Y病毒、马铃薯X病毒、马铃薯A病毒和马铃薯卷叶病毒4种病毒的检测方法。本发明通过对云南马铃薯主栽品种丽薯6号、云薯401、宣薯2号病株中马铃薯Y病毒、马铃薯X病毒、马铃薯A病毒和马铃薯卷叶病毒4种特异性混合抗体诱捕病样中病毒,不必提取样品总RNA进行随机引物逆转录和特异性病毒引物复合PCR反应。本方法将快速、特异的免疫沉淀与灵敏的复合RT-PCR结合,同时设置健康马铃薯随机引物cDNA产物和相应病毒PCR特异片段阳性质粒作为阴、阳性对照,从而快速、准确、灵敏的应用于检测田间马铃薯植株样品、抗病毒材料及田间环境疑似侵染源等方面。
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公开(公告)号:CN104198713B
公开(公告)日:2016-02-10
申请号:CN201410450554.1
申请日:2014-09-05
Applicant: 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
IPC: G01N33/577 , G01N33/569 , G01N21/78
Abstract: 本发明公开了一种快速检测蓟马体内番茄斑萎病毒的方法,将待测的1头或几头蓟马放置到画好分隔的硝酸纤维素膜上,加2μl样品处理缓冲液,用移液枪头将蓟马磨碎于缓冲液中,依次处理不同虫体样品,同样吸取2μl阳性和阴性对照液点在硝酸纤维素膜上;待膜干燥后,用PBST缓冲液配制的5%脱脂奶粉封闭1h,再加入封闭液稀释的一抗培育1h,之后洗膜3次;加入封闭液稀释的二抗培育1h,再洗膜3次;加入显色液显色15min,弃去显色液加入蒸馏水终止显色反应,即可进行结果分析。本发明操作方便、快速、测定结果有良好的稳定性、重现性和准确性,能满足蓟马体内番茄斑萎病毒的检测需要,为尽量避免番茄斑萎病毒的危害奠定了基础。
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公开(公告)号:CN101852807A
公开(公告)日:2010-10-06
申请号:CN201010172279.3
申请日:2010-05-14
Applicant: 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
IPC: G01N33/577 , G01N33/531 , C12N7/02 , C07K16/10 , C07K16/06
Abstract: 本发明公开了一种高粱花叶病毒三抗夹心酶联免疫吸附检测试剂盒,试剂盒包含阳性对照、阴性对照、高粱花叶病毒多克隆抗体、高粱花叶病毒单克隆抗体、酶标抗体及其他材料和药品,其中,高粱花叶病毒多克隆抗体在分离提纯高粱花叶病毒甘蔗分离物后,通过家兔免疫分离血清得到:高粱花叶病毒单克隆抗体在分离提纯高粱花叶病毒甘蔗分离物后,通过小鼠免疫、细胞融合、克隆纯化得到;本发明制备的TAS-ELISA检测试剂盒检测灵敏度高、特异性强,并具有较高的可重复性、经济实用性。
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公开(公告)号:CN118402470A
公开(公告)日:2024-07-30
申请号:CN202410657963.2
申请日:2024-05-24
Applicant: 云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所
IPC: A01H4/00
Abstract: 本发明属于植物组织培养技术领域,具体涉及基于无菌带孔隔层的低污染、快速更换植物组培培养基的方法。本发明提供了基于无菌带孔隔层的低污染、快速更换植物组培培养基的方法,包括以下步骤:将无菌带孔隔层置于培养基中;利用所得培养基对植物进行培养得到组培材料;勾起培养基中的无菌带孔隔层得到包含组培材料的无菌带孔隔层;将包含组培材料的无菌带孔隔层平铺至新培养基;或将组培材料从无菌带孔隔层上取下,转接至包含无菌带孔隔层的新培养基。本发明的方法可实现将组培材料快速更换至新培养基,减少微小材料的损失,避免原培养基附着,并缩短更换时间,极大地降低了污染风险。
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