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公开(公告)号：CN108251550B
公开(公告)日：2021-11-16
申请号：CN201711320346.X
申请日：2017-12-12
Applicant: 贵州省烟草科学研究院 , 浙江大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/686 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种HRM检测烟草镉转运基因NtHMA4突变的方法，其特征在于：包含以下步骤：(1)采用CTAB法提取烟草样品苗期叶片基因组DNA；(2)以所述基因组DNA为模板，利用引物对进行PCR扩增；(3)PCR扩增产物利用HRM检测仪器LightScanner96进行突变位点扫描；(4)根据HRM曲线结果，判断烟草待检样品的基因型；当待测样品的HRM曲线与野生型对照贵烟1号一致时，则为野生型材料；如果出现其他曲线类型，且HRM荧光曲线峰值ΔF≥0.05，则为疑似基因突变材料；(5)DNA测序验证HRM筛选结果；(6)NtHMA4材料的镉表型测定。
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公开(公告)号：CN107904323B
公开(公告)日：2021-02-09
申请号：CN201711322924.3
申请日：2017-12-12
Applicant: 贵州省烟草科学研究院 , 浙江大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6858 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种鉴定烟草低镉突变体杂交后代基因型的引物对，其特征在于：所述引物对的引物1为Seq ID No.1所示序列，引物2为Seq ID No.2所示序列，Seq ID No.1：5’GAAATAGAGGGTGATAGTTTCA 3’；Seq ID No.2：5’CATTTCAGCGTAATGCAGAATTA 3’。利用本发明所述的基因特异性引物结合HRM技术可高通量、快速对NtHMA4突变材料杂交后代的大量分离群体进行筛选，准确区分野生型、纯合突变型及杂合突变型材料，进而鉴定出含烟草NtHMA4突变基因的低镉烟草材料。
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公开(公告)号：CN107557437B
公开(公告)日：2020-12-01
申请号：CN201710939902.5
申请日：2017-09-30
Applicant: 贵州省烟草科学研究院 , 浙江大学
IPC: C12Q1/6895 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种鉴定烟草低降烟碱突变体杂交后代基因型的引物对，其特征在于：所述的引物对的引物1为Seq ID No.1所示序列，引物2为Seq ID No.2所示序列，Seq ID No.1：5’GATGAGATGTGTGCATACTTG 3’；Seq ID No.2:5’CCAAATTAGAAAAACTCGTACTG 3’。利用本发明获得引物结合HRM可以对大量杂交后代群体进行筛选，可有效区分非突变、突变杂合体与突变纯合体，从而准确高效鉴定出含烟草CYP82E4突变基因的材料。
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公开(公告)号：CN107557437A
公开(公告)日：2018-01-09
申请号：CN201710939902.5
申请日：2017-09-30
Applicant: 贵州省烟草科学研究院 , 浙江大学
Abstract: 本发明公开了一种鉴定烟草低降烟碱突变体杂交后代基因型的引物对，其特征在于：所述的引物对的引物1为Seq ID No.1所示序列，引物2为Seq ID No.2所示序列，Seq ID No.1：5’GATGAGATGTGTGCATACTTG 3’；Seq ID No.2:5’CCAAATTAGAAAAACTCGTACTG 3’。利用本发明获得引物结合HRM可以对大量杂交后代群体进行筛选，可有效区分非突变、突变杂合体与突变纯合体，从而准确高效鉴定出含烟草CYP82E4突变基因的材料。
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公开(公告)号：CN108251550A
公开(公告)日：2018-07-06
申请号：CN201711320346.X
申请日：2017-12-12
Applicant: 贵州省烟草科学研究院 , 浙江大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/686 , C12N15/11
Abstract: 本发明公开了一种HRM检测烟草镉转运基因NtHMA4突变的方法，其特征在于：包含以下步骤：(1)采用CTAB法提取烟草样品苗期叶片基因组DNA；(2)以所述基因组DNA为模板，利用引物对进行PCR扩增；(3)PCR扩增产物利用HRM检测仪器LightScanner96进行突变位点扫描；(4)根据HRM曲线结果，判断烟草待检样品的基因型；当待测样品的HRM曲线与野生型对照贵烟1号一致时，则为野生型材料；如果出现其他曲线类型，且HRM荧光曲线峰值ΔF≥0.05，则为疑似基因突变材料；(5)DNA测序验证HRM筛选结果；(6)NtHMA4材料的镉表型测定。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN107904323A
公开(公告)日：2018-04-13
申请号：CN201711322924.3
申请日：2017-12-12
Applicant: 贵州省烟草科学研究院 , 浙江大学
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6858 , C12N15/11
CPC classification number: C12Q1/6895 , C12Q1/6858 , C12Q2600/156 , C12Q2600/172 , C12Q2531/113 , C12Q2527/107
Abstract: 本发明公开了一种鉴定烟草低镉突变体杂交后代基因型的引物对，其特征在于：所述引物对的引物1为Seq ID No.1所示序列，引物2为Seq ID No.2所示序列，Seq ID No.1：5’GAAATAGAGGGTGATAGTTTCA 3’；Seq ID No.2：5’CATTTCAGCGTAATGCAGAATTA 3’。利用本发明所述的基因特异性引物结合HRM技术可高通量、快速对NtHMA4突变材料杂交后代的大量分离群体进行筛选，准确区分野生型、纯合突变型及杂合突变型材料，进而鉴定出含烟草NtHMA4突变基因的低镉烟草材料。
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公开(公告)号：CN115852022B
公开(公告)日：2024-08-13
申请号：CN202211156238.4
申请日：2021-09-16
Applicant: 贵州省烟草科学研究院
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6858 , C12N15/11 , G16B30/20 , G16B30/10 , G16B20/20 , G06Q30/018 , G06K19/06 , G06K17/00
Abstract: 本发明公开了基于全基因组重测序和KASP技术开发的烟草核心SNP标记及其应用。本发明基于150份烟草全基因组重测序数据，利用前期探索的数据分析方法，挖掘获得了超过百万个SNP位点，对这些位点进一步分析，利用KASP技术平台，鉴定筛选出240个SNP标记及配套KASP引物，覆盖了烟草24条染色体/连锁群，并进一步从中确定了48个核心SNP。本发明为烟草生物学研究提供了一套可信、便于后期利用的SNP标记，这套SNP标记和检测引物，可用于烟草SNP检测试剂盒开发、烟草品种DNA指纹图谱构建、烟草种质资源和遗传群体基因分型，烟草定向改良品种背景回复率检测、烟草品种纯度/真伪度检测、烟草分子标记辅助选择育种等。
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公开(公告)号：CN116622881A
公开(公告)日：2023-08-22
申请号：CN202310473323.1
申请日：2023-04-27
Applicant: 贵州省烟草科学研究院
IPC: C12Q1/6895 , C12N15/11
Abstract: 本发明涉及一种烟草全基因组SNP位点组合、探针、芯片及其应用，所述应用包括基因分型、全基因组关联分析、全基因组连锁分析、分子标记辅助选择育种、分子指纹图谱构建、遗传资源基因型鉴定中的任一项；所述烟草全基因组SNP位点组合包括18981个SNP位点，所述18981个SNP位点的物理位置是基于烟草品种K326基因组序列比对确定的；所述18981个SNP位点的物理位置信息见表1。本发明能够进行烟草种质资源或育种群体材料规模化、高通量、低成本的基因分型检测工作，满足烟草种质资源鉴定及进一步育种利用的需求，加快烟草种质资源利用和分子育种的选择效率。
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公开(公告)号：CN110387383B
公开(公告)日：2022-12-06
申请号：CN201910695031.6
申请日：2019-07-30
Applicant: 贵州省烟草科学研究院
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，尤其涉及一种调控NtCBT基因在烟草组织中表达的方法及其应用。本发明从栽培烟草K326基因组DNA中克隆获得NtCBT基因启动子，并在栽培烟草中验证NtCBT基因启动子三种类型的片段缺失后驱动GUS基因的表达模式；根据启动子顺式作用元件分析以及片段缺失实验，聚焦启动子中控制腺毛特异表达的核心区域。本发明研究发现启动子‑198bp～‑192bp片段(CAGTTA)的缺失能够使NtCBT基因由腺毛特异表达变为组成性表达，为解析烟草类西柏烷代谢途径的分子调控机制、腺毛特异启动子精准调控关键酶基因的表达提供新策略，为培育高类西柏烷烟草种质奠定研究基础。
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公开(公告)号：CN115261446A
公开(公告)日：2022-11-01
申请号：CN202210980928.5
申请日：2022-08-16
Applicant: 贵州省烟草科学研究院
IPC: C12Q1/6806 , C12Q1/6869 , C12Q1/6895
Abstract: 本申请公开了抽核缓冲液、缓冲液组合、制备方法和应用，用于抽提烟草幼嫩组织单细胞核测序样本，以便对其进行snRNA‑seq测序。该抽核缓冲液包含：0.5～1.5M DTT，0.3～0.75％Triton×‑100，0.5～1.5tablet/50mL蛋白酶抑制剂，0.3～0.6U/μL RNA酶抑制剂，0.05～0.15mM精胺和0.3～0.7mM亚精胺的PBS溶液，pH值为6.5～7.5。通过本申请的抽核缓冲液、缓冲液组合及采用该缓冲液组合制备而成的烟草单细胞核样品具有背景纯度高、结团率低，保持细胞核形态完整和细胞核RNA质量满足snRNA‑seq测序的优点。
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