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公开(公告)号：CN106755498B
公开(公告)日：2020-06-30
申请号：CN201710059163.0
申请日：2017-01-24
Applicant: 青岛市畜牧兽医研究所
IPC: C12Q1/6888 , C12N15/11
Abstract: 本发明属于动物分子标记制备技术领域，具体涉及一种与奶山羊产奶量性状相关的分子标记的制备与应用。所述的分子标记由山羊H‑FABP基因克隆得到，它的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示，在序列表SEQ ID NO.1所示的第124位碱基处有一个A/C突变，该突变导致Sma Ⅰ‑PFLP多态性。本发明还公开了获得分子标记的制备方法及多态性检测方法的应用，为奶山羊的标记辅助选育提供了一个新的分子标记。
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公开(公告)号：CN106520831B
公开(公告)日：2020-05-26
申请号：CN201611013679.3
申请日：2016-11-18
Applicant: 青岛市畜牧兽医研究所
Abstract: 一种哺乳动物基因组修饰方法，属于基因工程技术领域。本发明根据研究目的选定哺乳动物基因组上特定区域的靶基因DNA序列，设计识别靶基因DNA序列的一对单链DNA寡核苷酸然后与本发明构建的质粒载体pcDNA‑DN按照质量比1‑2:1‑2:5‑20的比例共转染哺乳动物细胞，48小时后提取基因组DNA，PCR扩增并克隆测序，检测靶标区域序列的突变比例。与现有技术相比，本发明通过合成一对短链向导DNA引导核酸酶X在细胞或个体水平上对哺乳动物特定基因进行切割以达到敲除或修饰某一基因的目的，从而解析基因的功能、构建基因突变库。有益效果在于，向导DNA的总长度为40nt以上，极大增加了基因组修饰的特异性。
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公开(公告)号：CN106755498A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201710059163.0
申请日：2017-01-24
Applicant: 青岛市畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明属于动物分子标记制备技术领域，具体涉及一种与奶山羊产奶量性状相关的分子标记的制备与应用。所述的分子标记由山羊H‑FABP基因克隆得到，它的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示，在序列表SEQ ID NO.1所示的第124位碱基处有一个A/C突变，该突变导致Sma Ⅰ‑PFLP多态性。本发明还公开了获得分子标记的制备方法及多态性检测方法的应用，为奶山羊的标记辅助选育提供了一个新的分子标记。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN106399373A
公开(公告)日：2017-02-15
申请号：CN201611018714.0
申请日：2016-11-18
Applicant: 青岛市畜牧兽医研究所
Abstract: 一种Cas9表达载体，属于基因工程技术领域，本发明的目的在于提供一种可在哺乳动物细胞中稳定表达Cas9基因的质粒DNA载体。通过使用内切酶AgeⅠ、EcoRⅠ、SacⅡ三酶切pX330载体得Cas9编码区，在两侧添加合适的酶切位点后，构建到pUC-EIN载体中序列如SEQ ID NO.2所示，得Cas9表达载体pUC-CIN，其序列如SEQ ID NO.11所示。使用pUC-CIN载体稳定转染猪细胞系，经单克隆筛选可以获得稳定表达Cas9基因的细胞株。
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公开(公告)号：CN106755499A
公开(公告)日：2017-05-31
申请号：CN201710059165.X
申请日：2017-01-24
Applicant: 青岛市畜牧兽医研究所
Abstract: 本发明属于动物分子标记制备技术领域，具体涉及一种与奶山羊乳体细胞数性状相关的分子标记的制备与应用。所述的分子标记由山羊SPARC基因克隆得到，它的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示，在序列表SEQ ID NO.1所示的第203‑210位区域存在插入/缺失突变，该突变导致Nar Ⅰ‑RFLP多态性。本发明还公开了获得分子标记的制备方法及多态性检测方法的应用，为奶山羊的标记辅助选育提供了一个新的分子标记。
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公开(公告)号：CN106520831A
公开(公告)日：2017-03-22
申请号：CN201611013679.3
申请日：2016-11-18
Applicant: 青岛市畜牧兽医研究所
Abstract: 一种哺乳动物基因组修饰方法，属于基因工程技术领域。本发明根据研究目的选定哺乳动物基因组上特定区域的靶基因DNA序列，设计识别靶基因DNA序列的一对单链DNA寡核苷酸然后与本发明构建的质粒载体pcDNA-DN按照质量比1-2:1-2:5-20的比例共转染哺乳动物细胞，48小时后提取基因组DNA，PCR扩增并克隆测序，检测靶标区域序列的突变比例。与现有技术相比，本发明通过合成一对短链向导DNA引导核酸酶X在细胞或个体水平上对哺乳动物特定基因进行切割以达到敲除或修饰某一基因的目的，从而解析基因的功能、构建基因突变库。有益效果在于，向导DNA的总长度为40nt以上，极大增加了基因组修饰的特异性。
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公开(公告)号：CN106755499B
公开(公告)日：2020-06-30
申请号：CN201710059165.X
申请日：2017-01-24
Applicant: 青岛市畜牧兽医研究所
IPC: C12Q1/6888 , C12N15/11
Abstract: 本发明属于动物分子标记制备技术领域，具体涉及一种与奶山羊乳体细胞数性状相关的分子标记的制备与应用。所述的分子标记由山羊SPARC基因克隆得到，它的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1所示，在序列表SEQ ID NO.1所示的第203‑210位区域存在插入/缺失突变，该突变导致Nar Ⅰ‑RFLP多态性。本发明还公开了获得分子标记的制备方法及多态性检测方法的应用，为奶山羊的标记辅助选育提供了一个新的分子标记。
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公开(公告)号：CN106399373B
公开(公告)日：2019-05-24
申请号：CN201611018714.0
申请日：2016-11-18
Applicant: 青岛市畜牧兽医研究所
Abstract: 一种Cas9表达载体，属于基因工程技术领域，本发明的目的在于提供一种可在哺乳动物细胞中稳定表达Cas9基因的质粒DNA载体。通过使用内切酶AgeⅠ、EcoRⅠ、SacⅡ三酶切pX330载体得Cas9编码区，在两侧添加合适的酶切位点后，构建到pUC‑EIN载体中序列如SEQ ID NO.2所示，得Cas9表达载体pUC‑CIN，其序列如SEQ ID NO.11所示。使用pUC‑CIN载体稳定转染猪细胞系，经单克隆筛选可以获得稳定表达Cas9基因的细胞株。
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