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公开(公告)号：CN112961867B
公开(公告)日：2022-04-01
申请号：CN202110218997.8
申请日：2021-02-26
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明提供了一种棉花高温响应基因GhHRK1、编码蛋白及其应用，属于植物育种技术领域。本发明利用棉花自然群体花药转录组数据，进行了全基因组和全转录组关联分析，发现了棉花响应高温的关键基因GhHRK1。通过转录组数据分析和原位杂交实验，发现极敏高温材料中GhHRK1的转录本丰度明显高于耐高温材料。拟南芥的HRK1同源突变体hrk1的高温抗性也增加，且其高温抗性可以被GhHRK1回补。本发明提供了利用GhHRK1基因创制耐高温棉花种质的方法，对指导棉花种质耐高温抗性改良具有重要意义。
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公开(公告)号：CN113980994A
公开(公告)日：2022-01-28
申请号：CN202010726929.8
申请日：2020-07-26
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于作物分子育种领域，具体涉及GhAOC4基因敲除创造棉花雄性不育和保持两用系的方法。特征为，分离一种棉花雄性不育性状相关的基因片段SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2，和作为分子标记应用的sgRNA1‑guidRNA、sgRNA2‑guidRNA序列，通过与CRISPR/Cas9系统和分子检测后得到棉花雄性不育系。所述的基因通过转基因后的表达被扰乱后，引起常温下棉花雄性不育。通过遗传转化获得棉花基因编辑突变体，早期的花蕾喷施5×10‑4mol/L的茉莉酸甲酯溶液，可恢复突变体的雄性不育表型，通过自交扩繁，得到包含突变体基因的具有雄性不育和保持特征的两用系材料。
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公开(公告)号：CN113240001A
公开(公告)日：2021-08-10
申请号：CN202110509530.9
申请日：2021-05-11
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了一种棉花花药开裂状态识别方法及系统。该方法包括：以黑色幕布为拍摄背景，采集棉花花药RGB图像；获取所述棉花花药RGB图像的标签，构建训练集、测试集和验证集；获取改进后的YOLOv5深度学习网络；通过所述训练集对改进后的YOLOv5深度学习网络进行训练；通过训练后的YOLOv5深度学习网络对棉花花药开裂状态进行识别。本发明采用改进后的YOLOv5深度学习网络能够提高识别精度和速度，并且改进后的YOLOv5深度学习网络模型轻量化，可以植入到可嵌入式系统和移动设备中。
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公开(公告)号：CN113174401A
公开(公告)日：2021-07-27
申请号：CN202110608540.8
申请日：2021-06-01
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，且公开了基因编辑介导的外源基因敲入到棉花基因组的方法，包括以下步骤：1)菜豆黄矮病毒的复制子元件BeSRL和ULIR目的序列的获得：查阅文献DNA Replicons for Plant Genome Engineering从中获取菜豆黄矮病毒的复制子元件BeSRL和ULIR目的序列，然后经过(GenScript)合成；2)转化载体BeYDV‑Cas9‑KI的构建：利用限制性内切酶Sbf I酶切pRGEB32‑GhU6.7‑NPTⅡ载体，连接黄矮病毒的复制子元件BeSRL，将pRGEB32‑GhU6.7‑NPTⅡ进行Sbf I酶切。该基因编辑介导的外源基因敲入到棉花基因组的方法及载体，在棉花中首次成功建立了适应于棉花基因组特性的基因敲入编辑系统，该系统能够将外源基因定点插入到棉花基因组中，它将成为棉花功能基因组研究新的重要的技术手段，且在棉花中的敲入效率达1.0％。
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公开(公告)号：CN113122571A
公开(公告)日：2021-07-16
申请号：CN202110583863.6
申请日：2021-05-27
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明涉及植物基因工程技术领域，且公开了一种新型CRISPR/Cas9基因编辑载体的载体制备方法，所述CRISPR/Cas9载体p7N‑EC通过下列步骤制备获得：获得目的序列EC1.2en‑1.1p，具体地，该目的序列通过以下步骤制备获得：先获得含有目的序列EC1.2en‑1.1p的载体pHEE401E‑ccdB，以pHEE401E‑ccdB载体为模板，利用Primer5软件设计引物，通过PCR扩增获得EC1.2en‑1.1p目的序列，利用SbfⅠ、BstBⅠ两种酶对pRGEB32‑GhU6.7‑NPT Ⅱ载体进行双酶切去除Ubiquitin启动子得到线性载体，然后与获得的EC1.2en‑1.1p目的序列进行In‑fusion连接。该新型CRISPR/Cas9基因编辑载体的载体制备方法，能对棉花基因组进行有效的基因编辑，且具有一定的基因编辑效率。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113122570A
公开(公告)日：2021-07-16
申请号：CN202110583854.7
申请日：2021-05-27
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，且公开了一种新型CRISPR/Cas9基因编辑载体在棉花中的使用方法，包括以下步骤：获得含有目的序列35S启动子的载体pK2GW7.0，以pK2GW7.0载体为模板，利用Primer5软件设计引物。该新型CRISPR/Cas9基因编辑载体在棉花中的使用方法，对含有棉花内源启动子pGhU6‑7的pRGEB32‑GhU6.7‑NPTⅡ载体进行改造，以35S启动子取代原有系统中驱动Cas9蛋白表达的Ubiquitin启动子，分别选取棉花内源Gh_A06G0606和GhCLA为目标基因验证改造后的新系统在棉花中的应用，利用农杆菌介导的遗传转化将CRISPR/Cas9基因编辑系统导入棉花基因组，然后对新载体的愈伤组织进行Sanger测序和Hi‑TOM测序，检测新系统在异源四倍体棉花基因组中的突变位点及编辑效率，具有良好的探究性、创新性和研究价值。
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公开(公告)号：CN112980766A
公开(公告)日：2021-06-18
申请号：CN202110469528.3
申请日：2021-04-28
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N5/04
Abstract: 本发明涉及分子生物技术领域，且公开了一种棉花下胚轴单细胞的分离方法。该棉花下胚轴单细胞的分离方法，基于棉花叶片、愈伤组织、根的原生质体分离技术，对酶促体系进行优化改进，构建了适用于棉花下胚轴单细胞分离的实验体系，利用该方法可得到高质量，数量多的下胚轴单细胞，愈伤组织原生质体酶解方法中，酶解后的原生质体用W5solution重悬，本发明中用PBS+0.04％BSA进行重悬，效果较好，酶解时间只需4‑6小时，两次离心之后过40μm过滤筛，可以得到分散完整的下胚轴单细胞。
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公开(公告)号：CN112813076A
公开(公告)日：2021-05-18
申请号：CN202110283859.8
申请日：2021-03-17
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/29 , C12N15/113 , C12N15/84 , A01H5/10 , A01H6/60
Abstract: 本发明提供了一种敲除棉花GhTSTs基因的sgRNA组合物及其在创制棉花无短绒突变体中的应用，属于植物基因工程技术领域。本发明针对8个GhTSTs基因的保守区段设计的3条基因编辑用sgRNA，构建二套CRISPR‑Cas9载体，进行农杆菌介导的遗传转化，获得棉花无短绒突变体。因此，本发明提供了GhTSTs基因在创制棉无短绒突变体中的应用。同时本发明还提供了敲除GhTSTs基因的载体在创制棉花无短绒突变体中的应用。本发明确定了GhTSTs基因为创制棉花无短绒性状的靶点基因，并成功创建棉花无短绒突变体，为后续研究短绒发生和无短绒相关育种及筛选提供材料基础。
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公开(公告)号：CN109207495B
公开(公告)日：2021-05-11
申请号：CN201811090438.8
申请日：2018-09-18
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域。具体涉及超表达GhCIPK6基因提高植物水分利用效率促进可溶性糖积累。从棉花中克隆的GhCIPK6基因是CIPK蛋白家族的一个关键成员。GhCIPK6基因的cDNA序列如SEQ ID NO：1所示，其编码的蛋白质序列如SEQ ID NO：2所示。本发明涉及构建该基因的超表达载体pK2GW7.0‑GhCIPK6，通过转化该载体能提高棉花对水分的利用效率，同时能显著提高棉花叶片中可溶性糖的含量。
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公开(公告)号：CN111073897B
公开(公告)日：2021-04-27
申请号：CN202010036151.8
申请日：2020-01-14
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/29 , C07K14/415 , C12N15/82 , A01H5/00 , A01H6/60
Abstract: 本发明涉及GhTMT2基因在调节棉花中可溶性糖积累的应用，属于植物基因工程技术领域。本发明提供了核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的GhTMT2基因或氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的GhTMT2蛋白在调节棉花中可溶性糖积累的应用。超表达GhTMT2基因能促进棉花可溶性糖的积累，敲除GhTMT2基因能降低棉花葡萄糖的含量，可以为培育高产棉花新品种提供理想的途径。
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