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公开(公告)号：CN113907042B
公开(公告)日：2023-03-24
申请号：CN202111165581.0
申请日：2021-09-30
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12N15/113 , A01K67/027 , C12N15/85 , C12N15/90 , C12N15/12
Abstract: 本发明属于基因工程和遗传修饰技术领域，具体涉及一种中性粒细胞缺失小鼠模型构建方法。本发明通过CRISPR/Cas9基因组编辑技术将特异性打靶小鼠Gfi1基因的sgRNA串联表达单元敲入进入小鼠Rosa26位点，然后将此表达sgRNA的基因敲入小鼠纯合子与过表达Cas9蛋白的基因敲入小鼠纯合子进行杂交，即可以获得中性粒细胞缺失小鼠模型。对此小鼠外周血使用流式细胞术进行免疫表型检测，结果表明，此小鼠中性粒细胞的清除效率高达100％，为研究中性粒细胞在疾病中的作用提供了一种全新的遗传模型。
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公开(公告)号：CN109402179B
公开(公告)日：2020-12-04
申请号：CN201811394237.7
申请日：2018-11-21
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12N15/90 , C12N15/85 , C12N9/22 , C12Q1/6886
Abstract: 本发明涉及一种细胞系中食管癌功能基因敲除后增殖表型的快速鉴定方法，属于分子生物学技术领域。本发明中的细胞系中食管癌功能基因敲除后增殖表型的快速鉴定方法，利用流式细胞分选仪，将200个带有载体荧光标签的阳性细胞群分选到96孔板的两个孔中，培养0h后进行片段分析（Fragment analysis，FA），可检测到CRISPR‑Cas9打靶该功能基因后目的基因座发生有效编辑的克隆；培养7天后，再次进行片段分析，此时片段分析峰图可根据不同细胞的增殖特性发生变化，其中增殖速度快的细胞出峰显著，而增殖速度慢的细胞群则出峰不明显，甚至不出峰；由此可快速判断食管癌功能基因敲除后的增殖表型。
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公开(公告)号：CN109402179A
公开(公告)日：2019-03-01
申请号：CN201811394237.7
申请日：2018-11-21
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12N15/90 , C12N15/85 , C12N9/22 , C12Q1/6886
CPC classification number: C12N15/907 , C12N9/22 , C12N15/85 , C12Q1/6886
Abstract: 本发明涉及一种细胞系中食管癌功能基因敲除后增殖表型的快速鉴定方法，属于分子生物学技术领域。本发明中的细胞系中食管癌功能基因敲除后增殖表型的快速鉴定方法，利用流式细胞分选仪，将200个带有载体荧光标签的阳性细胞群分选到96孔板的两个孔中，培养0h后进行片段分析（Fragment analysis，FA），可检测到CRISPR-Cas9打靶该功能基因后目的基因座发生有效编辑的克隆；培养7天后，再次进行片段分析，此时片段分析峰图可根据不同细胞的增殖特性发生变化，其中增殖速度快的细胞出峰显著，而增殖速度慢的细胞群则出峰不明显，甚至不出峰；由此可快速判断食管癌功能基因敲除后的增殖表型。
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公开(公告)号：CN108300738A
公开(公告)日：2018-07-20
申请号：CN201810102962.6
申请日：2018-02-01
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12N15/90 , C12N15/89 , C12N9/22 , A01K67/027
Abstract: 本发明涉及一种NOD遗传背景的中性粒细胞缺失的人源化小鼠模型的制备方法，属于基因工程和遗传修饰技术领域。本发明的制备方法包括：将NOD小鼠中Gfi1基因敲除后，即得NOD遗传背景的中性粒细胞缺失的人源化小鼠模型。本发明首次在NOD遗传背景小鼠模型中利用CRISPR/Cas9系统实现了对控制小鼠中性粒细胞发育的关键基因Gfi1进行特异性敲除，获得一种在NOD遗传背景下中性粒细胞缺失的新的人源化小鼠动物模型。该小鼠模型具有接受异种移植的潜力，为开发全新的人源化小鼠提供了新的思路。
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公开(公告)号：CN108271740A
公开(公告)日：2018-07-13
申请号：CN201810078748.1
申请日：2018-01-23
Applicant: 新乡医学院
IPC: A01K67/027 , C12Q1/6888
Abstract: 本发明涉及一种中性粒细胞缺失动脉粥样硬化模型小鼠的建立方法，属于基因工程和遗传修饰技术领域。本发明首次将Gfi1点突变引入到ApoE敲除小鼠基因组，构建出了首例中性粒细胞缺失动脉粥样硬化小鼠遗传模型。通过实验证实，在该模型小鼠中，动脉粥样硬化斑块显著减少，动脉粥样硬化症状明显减轻，表明中性粒细胞缺失动脉粥样硬化模型小鼠构建是成功的，而且中性粒细胞缺失会减轻动脉粥样硬化的病变程度。本发明所获得的中性粒细胞缺失并发动脉粥样硬化的模型小鼠将对于揭开中性粒细胞对动脉粥样硬化的形成与修复的作用及动脉粥样硬化诊断治疗具有十分重要的潜在应用价值。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN107446954A
公开(公告)日：2017-12-08
申请号：CN201710646278.X
申请日：2017-07-28
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12N15/90 , C12N9/22 , A01K67/027
Abstract: 本发明涉及一种SD大鼠T细胞缺失遗传模型的制备方法，属于基因工程和遗传修饰技术领域。本发明在大鼠中利用CRISPR-Cas9系统实现了对控制大鼠T细胞发育的关键基因Lck的特异性敲除，获得SD大鼠T细胞缺失遗传模型。本发明首次确定了2个针对大鼠Lck基因的特异性打靶位点，通过实验证明其具有很高的剪切效率；本发明同时利用2个sgRNA针对大鼠Lck基因进行打靶，并获得了大片段缺失的基因敲除大鼠，一方面可以保证被打靶基因能够彻底失去功能，另外一方面也可以方便后续检测。构建得到的T细胞缺失的SD大鼠动物模型在免疫与疾病研究中有着非常重大的意义。
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公开(公告)号：CN112410341B
公开(公告)日：2023-05-23
申请号：CN202011388283.3
申请日：2020-12-01
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12N15/113 , C12N15/12 , C12N15/90 , C12Q1/686 , A01K67/027
Abstract: 本发明涉及一种可诱导的中性粒细胞特异性剔除的小鼠模型构建方法。本发明通过CRISPR/Cas9基因组编辑技术对Ly6G基因位点进行编辑后获得了一种全新的Ly6G‑DTR基因敲入小鼠模型，实现了DTR的表达直接受Ly6G启动子来驱动，并通过流式细胞术验证了DTR仅在Ly6G表达的中性粒细胞中具有很高的表达量，而T细胞、B细胞中均未检测到DTR表达。试验证明，对Ly6G‑DTR基因敲入小鼠注射白喉毒素，能够高度特异性的清除中性粒细胞，且清除效率高达100％，能够实现中性粒细胞的彻底清除；此外，还可以通过调整白喉毒素的给药剂量和时间来诱导中性粒细胞的清除程度，为中性粒细胞在疾病的发生和发展中扮演角色的解析提供更好的动物遗传模型。
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公开(公告)号：CN111778278B
公开(公告)日：2022-10-11
申请号：CN202010537546.6
申请日：2020-06-12
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明涉及一种Slfn4缺失的动脉粥样硬化模型小鼠的构建方法及其应用。本发明将Slfn4基因敲除通过CRISPR‑Cas9系统引入ApoE基因缺失遗传背景的动脉粥样硬化小鼠，回交和杂交后进行基因型筛选，获得了双基因缺失的纯合子模型小鼠ApoE–/–Slfn4–/–。Slfn4缺失动脉粥样硬化模型小鼠(ApoE–/–Slfn4–/–)较ApoE–/–小鼠动脉粥样硬化斑块显著减少，症状显著减轻，表明Slfn4基因具有促进主动脉粥样硬化斑块形成的作用。针对Slfn4上述功能，Slfn4可以作为药物靶标筛选治疗动脉粥样硬化疾病的药物；Slfn4抑制剂能够用于制备治疗动脉粥样硬化疾病的药物。
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公开(公告)号：CN113907042A
公开(公告)日：2022-01-11
申请号：CN202111165581.0
申请日：2021-09-30
Applicant: 新乡医学院
IPC: A01K67/027 , C12N15/85 , C12N15/90 , C12N15/12
Abstract: 本发明属于基因工程和遗传修饰技术领域，具体涉及一种中性粒细胞缺失小鼠模型构建方法。本发明通过CRISPR/Cas9基因组编辑技术将特异性打靶小鼠Gfi1基因的sgRNA串联表达单元敲入进入小鼠Rosa26位点，然后将此表达sgRNA的基因敲入小鼠纯合子与过表达Cas9蛋白的基因敲入小鼠纯合子进行杂交，即可以获得中性粒细胞缺失小鼠模型。对此小鼠外周血使用流式细胞术进行免疫表型检测，结果表明，此小鼠中性粒细胞的清除效率高达100％，为研究中性粒细胞在疾病中的作用提供了一种全新的遗传模型。
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公开(公告)号：CN108271740B
公开(公告)日：2020-01-17
申请号：CN201810078748.1
申请日：2018-01-23
Applicant: 新乡医学院
IPC: A01K67/027 , C12Q1/6888
Abstract: 本发明涉及一种中性粒细胞缺失动脉粥样硬化模型小鼠的建立方法，属于基因工程和遗传修饰技术领域。本发明首次将Gfi1点突变引入到ApoE敲除小鼠基因组，构建出了首例中性粒细胞缺失动脉粥样硬化小鼠遗传模型。通过实验证实，在该模型小鼠中，动脉粥样硬化斑块显著减少，动脉粥样硬化症状明显减轻，表明中性粒细胞缺失动脉粥样硬化模型小鼠构建是成功的，而且中性粒细胞缺失会减轻动脉粥样硬化的病变程度。本发明所获得的中性粒细胞缺失并发动脉粥样硬化的模型小鼠将对于揭开中性粒细胞对动脉粥样硬化的形成与修复的作用及动脉粥样硬化诊断治疗具有十分重要的潜在应用价值。
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