公开(公告)号：KR1020080020251A

公开(公告)日：2008-03-05

申请号：KR1020060083489

申请日：2006-08-31

Applicant: (주)엠젠

Inventor： 박광욱 ,  설재구 ,  허기남 ,  김은정 ,  유지연

IPC: C12N5/07 ,  C12N15/12 ,  C12N5/10

Abstract: A transgenic pig clonal somatic cell line expressing protectin CD59 gene is provided to minimize complement activation by inhibiting cytotoxicity destruction in xenotransplantation, so that the cell line is useful for inhibition of hyperacute rejection occurred by xenotransplantation. A transgenic pig clonal somatic cell line expressing protectin CD59 gene(KCLRF-BP-00139) contains an expression cassette pcDNA-CD59(neo) encoding CD59 gene having the nucleotide sequence of SEQ ID NO:1. A method for manufacturing the transgenic pig clonal somatic cell line expressing protectin CD59 gene(KCLRF-BP-00139) comprises the steps of: (1) separating a somatic cell from the fetal pig by using primers of SEQ ID NOs:2 and 3; (2) preparing an expression vector containing a CD59 gene and transducing the expression vector into the somatic cell; and (3) selecting and culturing the transduced somatic cells. Further, the CD59 gene is SEQ ID NO:1.

Abstract translation: 提供表达保护素CD59基因的转基因猪克隆体细胞系以通过抑制异种移植中的细胞毒性破坏来最小化补体激活，使得细胞系可用于通过异种移植发生的超急性排斥的抑制。 表达保护素CD59基因（KCLRF-BP-00139）的转基因猪克隆体细胞系含有编码具有SEQ ID NO：1的核苷酸序列的CD59基因的表达盒pcDNA-CD59（neo）。 用于制备表达保护素CD59基因（KCLRF-BP-00139）的转基因猪克隆体细胞系的方法包括以下步骤：（1）使用SEQ ID NO：2和3引物从胎猪分离体细胞; （2）制备含有CD59基因并将表达载体转导入体细胞的表达载体; （3）选择和培养转导的体细胞。 此外，CD59基因是SEQ ID NO：1。

公开(公告)号：KR100790514B1

公开(公告)日：2008-01-02

申请号：KR1020050078585

申请日：2005-08-26

Applicant: (주)엠젠 ,  박광욱

Inventor： 박광욱 ,  최기명 ,  설재구 ,  허기남 ,  박창식

IPC: C12N15/27 ,  C12N15/06

Abstract: 본 발명은 인간 ＧＭ-ＣＳＦ를 유선에서 발현하는 형질전환 복제 돼지 및 그의 제조 방법에 관한 것이다. 보다 구체적으로는 1) 돼지 태아로부터 체세포를 분리하는 단계; 2) 유선(mammary gland) 특이적 프로모터 및 CSF(Colony stimulating factor, 세포집락 자극 인자)를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 발현벡터를 제조한 후 상기 체세포에 도입시키는 단계; 3) 상기 발현 벡터가 도입된 클론 체세포를 선별한 후 배양하는 단계; 4) 모돈으로부터 채취한 난자의 핵을 제거하고 상기 체세포와 융합시키는 단계; 및 5) 상기 융합된 복제란을 대리모돈에 이식하고 자돈을 출산하는 단계를 포함하는 CSF 단백질을 발현하는 형질전환 돼지 및 그의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명의 제조방법에 의하여 제조된 형질전환 돼지는 기존 방법의 후-번역 수정(post-translational modification) 또는 대량 생산등의 문제점을 극복할 수 있으며, hGM-CSF를 유선에서 발현함으로써 쉽게 획득할 수 있는 잇점과 함께 이를 백혈병 치료 보조제 및 면역 강화제 등으로 사용될 수 있을 것으로 기대된다.

公开(公告)号：KR1020040102982A

公开(公告)日：2004-12-08

申请号：KR1020030034844

申请日：2003-05-30

Applicant: (주)엠젠 ,  박광욱

Inventor： 박광욱 ,  설재구 ,  허기남 ,  이승현 ,  박창식

IPC: C12N5/16

CPC classification number: C12N15/8778 ,  C12N15/85

Abstract: PURPOSE: A method for producing porcine clonal somatic cell line expressing green fluorescent protein is provided, which method allows for observation of differentiation and development of introduced cells at a cell therapy. CONSTITUTION: The method for producing porcine clonal somatic cell line expressing green fluorescent protein comprises the steps of: (1) isolating a somatic cell from a fetal pig; (2) producing an expression vector, pEGFP-C1 or PCX-EGFP, containing a fluorescent protein gene and cloning the expression vector into the somatic cell; and (3) selecting the expression vector cloned somatic cell and culturing the selected clonal somatic cell, wherein the fetal pig is 30 to 40 day of pregnancy pig; the fluorescent protein is EGFP(enhanced GFP); and the porcine clonal somatic cell line is PCX-8(KCLRF-BP-00079).

Abstract translation: 目的：提供一种生产表达绿色荧光蛋白的猪克隆体细胞系的方法，该方法允许观察细胞治疗引入细胞的分化和发育。 构成：产生表达绿色荧光蛋白的猪克隆体细胞系的方法包括以下步骤：（1）从胎猪中分离体细胞; （2）产生含有荧光蛋白基因的表达载体pEGFP-C1或PCX-EGFP，并将表达载体克隆入体细胞; （3）选择克隆体细胞的表达载体并培养选定的克隆体细胞，其中胎猪为妊娠猪30〜40天; 荧光蛋白是EGFP（增强GFP）; 猪克隆体细胞系为PCX-8（KCLRF-BP-00079）。

公开(公告)号：KR1020060106590A

公开(公告)日：2006-10-12

申请号：KR1020050084409

申请日：2005-09-10

Applicant: (주)엠젠

Inventor： 박광욱 ,  한귀승 ,  설재구 ,  허기남 ,  박창식

IPC: C12N15/06 ,  C12N5/16

Abstract: 본 발명은 HLA-G 유전자를 발현하는 형질전환 복제 돼지 및 그의 제조 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 1) 돼지 태아로부터 체세포를 분리하는 단계; 2) HLA-G 유전자를 포함하는 발현벡터를 제조한 후 단계 1의 체세포에 도입시키는 단계; 3) 상기 발현벡터가 도입된 체세포를 선별한 후 배양하는 단계; 4) 모돈으로부터 채취한 난자의 핵을 제거하고 상기 체세포와 융합시키는 단계; 및 5) 상기 융합된 복제란을 대리모돈에 이식하고 자돈을 출산하는 단계를 포함하는 HLA-G 유전자를 발현하는 형질 전환 복제돼지 및 그의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명의 제조 방법에 의한 HLA-G 유전자를 발현하는 형질 전환 복제돼지는 기존 방법의 후-번역 수정(post-translational modification) 또는 대량 생산등의 문제점을 극복할 수 있으며, 자연살해 세포(natural killer cell, NK cell)의 활성을 저해시켜 대상세포의 용해를 막아 이식 거부 반응을 억제함으로, 핵이식을 통한 HLA-G 유전자를 발현하는 돼지 생산 등 세포이용 치료 분야 및 이종 장기 이식 분야의 연구에 유용하게 사용할 수 있다.
HLA-G

公开(公告)号：KR1020060106319A

公开(公告)日：2006-10-12

申请号：KR1020050028951

申请日：2005-04-07

Applicant: (주)엠젠 ,  박광욱

Inventor： 박광욱 ,  유지연 ,  설재구 ,  허기남 ,  박창식

IPC: C12N15/06 ,  C12N5/16

Abstract: 본 발명은 US2 단백질을 발현하는 형질전환 돼지 클론 체세포주 및 상기 세포주의 제조 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 1) 돼지 태아로부터 체세포를 분리하는 단계; 2) US2 유전자를 포함하는 발현벡터를 제조한 후 단계 1의 체세포에 도입시키는 단계; 및 3) 상기 발현벡터가 도입된 체세포를 선별한 후 배양하는 단계를 포함하는 US2 단백질을 발현하는 형질전환 돼지 클론 체세포주의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명의 제조 방법에 의한 US2 단백질을 발현하는 돼지 클론 체세포주는 주요 조직적합성 복합체 제 1형 항원(major histocompatibility complex: MHC Class I)의 발현이 저해되어 세포성 면역거부반응이 최소화됨으로써, 핵이식을 통한 US2 단백질 발현 돼지의 생산에 이용하여 이종장기이식 연구 및 이의 산업적 이용성에 유용하게 사용할 수 있다.

公开(公告)号：KR100500412B1

公开(公告)日：2005-07-12

申请号：KR1020030014132

申请日：2003-03-06

Applicant: (주)엠젠 ,  박광욱

Inventor： 박광욱 ,  박창식 ,  설재구 ,  허기남

IPC: C12N5/16

Abstract: 본 발명은 동물의 복제란 제조방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 난자의 핵을 염색하지 않고 제 1 극체와 10 내지 20%의 세포질을 흡입(suction)하여 난자의 핵을 제거하는 단계; 제 1 극체와 핵을 제거한 상기 난자의 위란강에 체세포를 주입하여 난자-체세포 복합체를 제조하는 단계; 및 ⅲ) 0.5 내지 2 ㎸/㎝, 6 내지 150 ㎲로 1 내지 3회 시행하는 전기적 자극으로 상기 난자-체세포 복합체를 세포융합 및 활성화시키는 단계를 포함하는 동물의 복제란 제조방법에 관한 것이다. 본 발명의 복제란 제조방법은 고효율의 제핵률을 나타낼 뿐만 아니라 복제과정을 단순화시킴으로써 다양한 생물의 체세포를 복제하는데 유용하게 사용될 수 있다.

公开(公告)号：KR100502480B1

公开(公告)日：2005-07-29

申请号：KR1020030034844

申请日：2003-05-30

Applicant: (주)엠젠 ,  박광욱

Inventor： 박광욱 ,  설재구 ,  허기남 ,  이승현 ,  박창식

IPC: C12N5/16

Abstract: 본 발명은 형광단백질을 발현하는 돼지 클론 체세포주의 제조 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 1) 돼지 태아로부터 체세포를 분리하는 단계; 2) 형광단백질 유전자를 포함하는 발현벡터를 제조한 후 단계 1의 체세포에 도입시키는 단계; 및 3) 상기 발현벡터가 도입된 체세포를 선별한 후 배양하는 단계를 포함하는 형광단백질을 발현하는 돼지 클론 체세포주의 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명의 제조 방법에 의한 형광단백질이 발현되는 돼지 클론 체세포주는 세포 치료시 주입 세포의 분화 및 발달 단계를 관찰할 수 있으며, 또한 핵이식을 통한 형광단백질 발현 돼지의 생산 등 발생공학 분야의 연구에 유용하게 사용될 수 있다.

公开(公告)号：KR1020050034187A

公开(公告)日：2005-04-14

申请号：KR1020030070029

申请日：2003-10-08

Applicant: (주)엠젠 ,  박광욱

Inventor： 박광욱 ,  설재구 ,  허기남 ,  박창식

IPC: C12N5/07

CPC classification number: A61D19/04 ,  A01K67/0273 ,  A01K2227/108 ,  C12N2517/00

Abstract: 본 발명은 돼지 복제란을 대리모돈에게 이식하는 방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 1) 수정란 수송 키트에서 복제란을 배양하는 단계; 2) 펜토탈소디움과 아이소프란으로 대리모돈을 마취시키는 단계; 및 3) 배란직전 내지 배란 후 2일 이내의 난소를 가지는 대리모돈에게 단계 1의 복제란을 이식하는 단계를 포함하는 돼지 복제란을 대리모돈에게 이식하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 돼지 복제란의 이식 방법은 복제란의 이식에 있어서의 종래 문제점들을 개선하여 이식 후 임신효율을 높임으로써 복제돼지의 생산 효율을 증대시킬 수 있으며, 아울러 복제란 뿐만 아니라 일반 돼지수정란의 이식에도 응용되어 돼지의 생산효율을 증대시킬 수 있다.

公开(公告)号：KR100479704B1

公开(公告)日：2005-03-31

申请号：KR1020030070031

申请日：2003-10-08

Applicant: (주)엠젠 ,  박광욱

Inventor： 박광욱 ,  설재구 ,  허기남 ,  이승현 ,  홍승표 ,  최기명

IPC: A01K67/027

Abstract: Provided is a method of producing a transgenic pig expressing a green-fluorescent protein to be effectively used in a field of producing a transgenic protein for curing. The method of producing a transgenic pig expressing a green-fluorescent protein comprises the steps of (1) separating somatic cells from a pig fetus, (2) producing a expression vector pCX-EGFP/neo with a fluorescent protein gene and then introducing the somatic cells of the (1) step thereinto, (3) selecting clone somatic cells introduced with the expression vector pCX-EGFP/neo and then cultivating the clone somatic cells, (4) removing a nucleus of an ovum taken from a mother pig and fusing it with the somatic cells, (5) transplanting the fused cloning egg in a surrogate mother pig and giving birth to a baby pig.

公开(公告)号：KR1020040079189A

公开(公告)日：2004-09-14

申请号：KR1020030014132

申请日：2003-03-06

Applicant: (주)엠젠 ,  박광욱

Inventor： 박광욱 ,  박창식 ,  설재구 ,  허기남

IPC: C12N5/16

CPC classification number: C12N15/8778 ,  A01K67/0273 ,  A01K2227/108 ,  A61D19/04 ,  C12N5/16 ,  C12N13/00 ,  C12N2517/00

Abstract: PURPOSE: A method for production of cloned animal embryos by nuclear transfer is provided to reduce the number of cloning processes. Therefore, itt can be useful for preservation of animals threatened with extinction, production of useful proteins, development of disease model, and supply of deficient organs. CONSTITUTION: The method for production of cloned animal embryos by nuclear transfer comprises the steps of: (i) inhaling a first polar body and 10 to 20% of cytoplasm without dying the nuclear of an egg cell by using a glass pipe having diameter of 20 to 40 micrometer to remove the nuclear from the egg cell; (ii) introducing a somatic cell into the first polar body and nuclear removed egg cell to prepare an egg-somatic cell complex within 1 minute during the inhalation process; and (iii) subjecting the egg-somatic cell complex to electric stimulation of 0.5 to 2 kv/cm and 6 to 150 microseconds 1 to 3 times to fuse and activate the egg-somatic cell complex, wherein the egg cell is collected from a mammal selected from pig, cow, sheet, mouse, rat, rabbit, dog and cat.

Abstract translation: 目的：提供通过核转移生产克隆动物胚胎的方法，以减少克隆过程的数量。 因此，它可以用于保护受灭绝威胁的动物，生产有用的蛋白质，发展疾病模型和供应不足的器官。 构成：通过核转移生产克隆动物胚胎的方法包括以下步骤：（i）通过使用直径为20的玻璃管，吸入第一极体和10-20％细胞质而不致死卵细胞核 至40微米，以从卵细胞中除去核; （ii）在吸入过程中在1分钟内将体细胞引入第一极体和核移除的卵细胞中以制备卵体细胞复合物; 和（iii）使卵体细胞复合物经受0.5至2kv / cm和6至150微秒的电刺激1至3次以融合并活化卵体细胞复合物，其中从哺乳动物收集卵细胞 选自猪，牛，片，鼠，大鼠，兔，狗和猫。