公开(公告)号：KR100256023B1

公开(公告)日：2000-05-01

申请号：KR1019970054926

申请日：1997-10-24

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 최의성 ,  강현아 ,  이상기 ,  손정훈

IPC: C12N15/81 ,  C12Q1/68

Abstract: PURPOSE: Provided are an expression vector for Hansenula polymorpha which introduces foreign genes in multiple rows and a method for easily selecting Hansenula polymorpha transformants. CONSTITUTION: An expression vector for Hansenula polymorpha is inserted into cells in multiple rows. At 3'-terminal, the vector has repeated segments of 5'-GGGTGGCG-3', self-replicable segment, promoter, and selective genes for nutritional requirement etc. And a method for selecting Hansenula polymorpha transformants is comprised of the next steps of: i) transforming Hansenula polymorpha with the expression vector; ii) cultivating and selecting transformants in a minimal medium; iii) cultivating the transformants continuously in a complex medium to stabilize vectors; and iv) cultivating stabilized transformants in a selective medium containing antibiotics to select transformants resistant to the antibiotics.

Abstract translation: 目的：提供多种多形汉逊酵母的表达载体，其可以将多个外来基因引入多行，并且可以方便地选择汉逊酵母多形汉逊酵母转化株。 构成：将多形汉逊酵母的表达载体插入多行细胞。 在3'末端，载体具有重复的5'-GGGTGGCG-3'区段，可自我复制区段，启动子和选择性基因的营养需求等。选择汉逊酵母多形汉逊酵母转化体的方法包括以下步骤 ：i）用表达载体转化汉逊酵母多形汉逊酵母; ii）在基本培养基中培养和选择转化体; iii）在复杂培养基中连续培养转化体以稳定载体; 和iv）在含有抗生素的选择性培养基中培养稳定的转化体以选择对抗生素具有抗性的转化体。

公开(公告)号：KR1020000014502A

公开(公告)日：2000-03-15

申请号：KR1019980033969

申请日：1998-08-21

Applicant: 한국과학기술연구원 ,  주식회사 두산

Inventor： 이상기 ,  배정훈 ,  최의성 ,  손정훈 ,  강현아 ,  박장서

IPC: C12N15/52 ,  C12N15/67

CPC classification number: C12N15/52 ,  C12N15/67 ,  C12N15/70

Abstract: PURPOSE: Glyceraldehyde-3-phsphate dehydrogenase (GAPDH) promoter gene isolated from GAPDH gene coding glyceraldehyde-3-phsphate dehydrogenase derived from pichia ciferrii is able to increase yield of tetraacetyl phytosphingosine(TAPS) by amplifying LCB2 gene. CONSTITUTION: Tetraacetyl phytosphingosine(TAPS) is produced by cultivating transformant pichia ciferrii transformed with plasmid containing ribosome DNA derived from pichia ciferrii, CYH gene with resistance to antibiotic cycloheximide, glyceraldehyde-3-phsphate dehydrogenase(GAPDH) promoter gene, LCB2 gene coding serine palmitoyl transferase derived from pichia ciferrii and by extracting tetraacetyl phytosphingosine from culture media.

Abstract translation: 目的：从GAPDH基因中分离得到的甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）启动子基因，通过扩增LCB2基因能够提高四氢乙酰植物鞘氨醇（TAPS）的产量。 构成：四乙酰植物鞘氨醇（TAPS）是通过培养由含有来自毕赤酵母的核糖体DNA，具有抗生素环己酰亚胺，甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）启动子基因，编码丝氨酸棕榈酰基的LCB2基因的CYH基因的质粒转化的转化体毕赤酵母产生的 从毕赤酵母衍生的转移酶和从培养基中提取四乙酰植物鞘氨醇。

公开(公告)号：KR1020000010068A

公开(公告)日：2000-02-15

申请号：KR1019980030775

申请日：1998-07-30

Applicant: 한국과학기술연구원 ,  제이더블유중외제약 주식회사

Inventor： 이상기 ,  강현아 ,  최의성 ,  손정훈 ,  홍원경 ,  오달균 ,  최근범 ,  김영환

IPC: A61K38/38

CPC classification number: C07K14/765 ,  C12N1/16 ,  C12N15/81

Abstract: PURPOSE: A method is provided to culture and generate efficiently a human serum albumin by minimizing the analysis of the albumin being revealed from a transformed body. CONSTITUTION: A method for generating a re-combined human serum albumin comprises: assembling a revealing vector containing an existent promoter being connected to a human serum albumin cDNA to a yeast saccharomyces cerevisiae; introducing the assembled material to the yeast saccharomyces cerevisiae for forming a transformed yeast strain; fermenting and culturing for revealing efficiently the human serum albumin. Herein, a buffering liquid or a nitrogen is added to the transformed yeast strain for maintaining the pH of the culturing for 5 ¯ 6 for minimizing the analysis of the albumin being revealed by fermenting and culturing.

Abstract translation: 目的：提供一种通过最小化从转化体发现的白蛋白的分析来培养和有效生成人血清白蛋白的方法。 构成：产生重组合人血清白蛋白的方法包括：将含有与人血清白蛋白cDNA连接的存在启动子的显示载体装配到酵母酿酒酵母; 将组装的材料引入到酵母酿酒酵母中以形成转化的酵母菌株; 发酵培养，有效显露人血清白蛋白。 本文中，向转化的酵母菌株中加入缓冲液或氮气以保持培养物的pH值为5，以最小化通过发酵和培养所揭示的白蛋白的分析。

公开(公告)号：KR1019990084508A

公开(公告)日：1999-12-06

申请号：KR1019980016310

申请日：1998-05-07

Applicant: 한국과학기술연구원 ,  주식회사 두산

Inventor： 이상기 ,  배정훈 ,  최의성 ,  손정훈 ,  강현아 ,  박장서

IPC: C12N15/31 ,  C12N15/63

Abstract: 본 발명은 피치아 시페리(Pichia ciferrii)용 발현 플라스미드에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 피치아 시페리 유래의 리보좀 DNA, 항생제 시클로헥시미드(cycloheximide)에 대해 저항성을 갖는 CYH
r 유전자, 및 목적 유전자로 구성되는 플라스미드에 관한 것이다.
본 발명에 의해 제공되는 플라스미드를 이용하면 피치아 시페리에의 형질전환 효율이 높다.

公开(公告)号：KR100278109B1

公开(公告)日：2001-01-15

申请号：KR1019980030775

申请日：1998-07-30

Applicant: 한국과학기술연구원 ,  제이더블유중외제약 주식회사

Inventor： 이상기 ,  강현아 ,  최의성 ,  손정훈 ,  홍원경 ,  오달균 ,  최근범 ,  김영환

IPC: A61K38/38

Abstract: 본 발명은 효모 사카로마이세스 세레비시에(Saccharomyces cerevisiae)에서 재조합 인간 혈장 알부민을 효율적으로 생산하는 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 효모 사카로마이세스 세레비시에 유래의 프로모터에 인간 혈장 알부민 cDNA가 연결된 발현벡터를 조립하고, 이를 효모 사카로마이세스 세레비시에에 도입한 형질 전환 효모 균주를 선별, 발효 배양시켜 인간 혈장 알부민을 고효율로 발현시킴을 특징으로 하는 인간 혈장 알부민의 제조 방법에 관한 것이다. 또한 이때 형질전환 효모 균주를 완충액 또는 질소원의 첨가로 인해 배지의 pH를 5~6으로 유지하여 발효 배양시켜 발현 분비된 알부민의 분해를 최소화시킴을 특징으로 한다.

公开(公告)号：KR1019990084507A

公开(公告)日：1999-12-06

申请号：KR1019980016309

申请日：1998-05-07

Applicant: 한국과학기술연구원 ,  주식회사 두산

Inventor： 이상기 ,  배정훈 ,  최의성 ,  손정훈 ,  강현아 ,  박장서

IPC: C12N15/54

Abstract: 본 발명은 피치아 시페리(Pichia ciferrii) ATCC 14091 유래의 세린 팔미토일 트랜스퍼라제(serine palmitoyl transferase)를 코딩하는 유전자 LCB2, 이 유전자를 포함하는 플라스미드 prACL2(KCTC-0468BP), 이에 의해 형질전환된 피치아 시페리 및 이를 배양하여 세라미드의 원료인 테트라아세틸 피토스핑고신(TAPS : tetraacetyl phytosphingosine)을 대량 생산하는 방법을 제공한다.
본 발명에 의해 제공되는 플라스미드 prACL2(KCTC-0468BP)에 의해 형질전환된 형질전환체는 모균주 KFCC-10937에 비하여 최소 1.3배의 TAPS 생산능을 갖고 있다.

公开(公告)号：KR1019990033548A

公开(公告)日：1999-05-15

申请号：KR1019970054926

申请日：1997-10-24

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 최의성 ,  강현아 ,  이상기 ,  손정훈

IPC: C12N15/81 ,  C12Q1/68

Abstract: 본 발명은 한세눌라 폴리모르파(Hansenula polymorpha)의 염색체에 외래 유전자를 다중으로 도입하는 다중병렬도입형 발현벡터에 관한 것으로, 구체적으로는 3'-말단에 서열 5'-GGGTGGCG-3'의 반복단위를 포함하는 한세눌라 폴리모르파 DL-1(ATCC 26012)의 다중병렬도입형 자기복제서열, 프로모터, 상기 프로모터의 하류에 위치하는 지배적 선별 유전자 및 영양요구성 선별 유전자를 포함하는 선별 카세트를 포함하는, 한세눌라 폴리모르파의 다중병렬도입형 발현 벡터에 관한 것이다.