公开(公告)号：KR100288889B1

公开(公告)日：2001-05-02

申请号：KR1019980033190

申请日：1998-08-17

Applicant: 한국과학기술연구원 ,  제이더블유중외제약 주식회사

Inventor： 이상기 ,  강현아 ,  최의성 ,  손정훈 ,  홍원경 ,  오달균 ,  최근범 ,  김영환

IPC: C12N15/14 ,  C07K14/765 ,  C12N5/10 ,  C12N15/63

Abstract: 본 발명은 효모 한세눌라 폴리모르파 DL-1 유래의 MOX 프로모터와 알부민 자체의 분비 시그날을 포함하는 알부민 cDNA를 이용하여 발현벡터를 조립하고, 이를 효모 한세눌라 폴리모르파에 도입하여 조립된 발현벡터가 염색체에 삽입(integration)된 형질 전환 효모를 선별, 발효 배양시켜 인간 혈청 알부민을 고효율로 발현시킴을 특징으로 하는 인간 혈청 알부민의 제조 방법, 발현 벡터 및 형질전환 효모에 관한 것이다.

公开(公告)号：KR1020000014005A

公开(公告)日：2000-03-06

申请号：KR1019980033190

申请日：1998-08-17

Applicant: 한국과학기술연구원 ,  제이더블유중외제약 주식회사

Inventor： 이상기 ,  강현아 ,  최의성 ,  손정훈 ,  홍원경 ,  오달균 ,  최근범 ,  김영환

IPC: C12N15/14 ,  C07K14/765 ,  C12N5/10 ,  C12N15/63

CPC classification number: C12N15/63 ,  C07K14/765 ,  C12N5/16 ,  C12N15/81

Abstract: PURPOSE: Human serum albumin is over expressed in Hansenula polymorpha DL-1 transformed with HSA gene under the control of methanol oxidase gene promoter. CONSTITUTION: The invention is disclosed transformed yeasts Hansenula polymorpha DL-1 which has integrated HSA gene, isolated from human fetal liver cDNA library and removed 5'UTR without signal sequence, controlled by methanol oxidase gene promoter. Transformed yeast is cultured in YPM medium( 1 % of yeast extract, 2 % of Bacto peptone, and 2 % of methanol) at 37°C for 72 hrs. Methanol is supplied at every 12 hrs to keep the concentration 2 % of methanol in the medium constant after 24 hrs. The concentration of expressed HSA is 40-50 mg/l by western blotting compared with authentic standard HSA. This method also detects smaller degraded HSA proteins in the medium.

Abstract translation: 目的：在甲醇氧化酶基因启动子控制下，用HSA基因转化的汉逊酵母多形汉逊酵母DL-1中过表达人血清白蛋白。 构成：公开了本发明的转化酵母多形汉逊酵母DL-1，其具有整合的HSA基因，从人胎肝cDNA文库中分离，并除去甲氧化酶基因启动子控制的没有信号序列的5'UTR。 在YPM培养基（1％的酵母提取物，2％的Bacto蛋白胨和2％的甲醇）中，将转化的酵母在37℃培养72小时。 每12小时供应甲醇，以保持培养基中2％的甲醇浓度在24小时后恒定。 与正常的标准HSA相比，通过Western印迹，表达的HSA的浓度为40-50mg / l。 该方法还检测培养基中较小的降解的HSA蛋白。

公开(公告)号：KR1019990025486A

公开(公告)日：1999-04-06

申请号：KR1019970047147

申请日：1997-09-12

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 정봉현 ,  김수정 ,  이상기 ,  강현아 ,  최의성

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/14

Abstract: 본 발명은 효모로부터 인체 부갑상선 호르몬(human parathyroid hormone: hPTH)을 효율적으로 생산하는 방법에 관한 것으로 단백질 분해 효소인 효모 아스파틱 프로테아제 3 (Yeast Aspartic Protease 3: YAP3) 결손 균주를 제작하여 인체 부갑상선 호르몬의 분해를 최소화하므로써 완전한 형태의 인체 부갑상선 호르몬을 생산하는 방법을 제공한다.

公开(公告)号：KR1019960035021A

公开(公告)日：1996-10-24

申请号：KR1019950004261

申请日：1995-03-02

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 유명희 ,  강현아 ,  이관수 ,  권기선

IPC: G01N33/68

Abstract: 본 발명은 B형 간염 표면항원 preS2의 에피토프 태깅을 이용한 단백질의 면역화학적 분석 방법에 관한 것으로, 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열의 5′또는 3′말단에 B형 간염 표면 항원 preS2의 에피토프를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 삽입하여 에피토프로 태깅된 융합 단백질을 생산하고, 모노클로날 항체 H8을 이용하여 연구대상 단백질을 면역화학적으로 감지 및 분리하는 방법이다. 이 방법에 의해 연구 대상 단백질의 특정 항체가 없어도 이를 쉽게 감지 및 분리할 수 있다.

公开(公告)号：KR1019960031601A

公开(公告)日：1996-09-17

申请号：KR1019950003140

申请日：1995-02-18

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 정봉현 ,  남수완 ,  박영훈 ,  유명희 ,  강현아

IPC: C12N15/81 ,  C12N15/15

Abstract: 효모로부터 재조합 인간 안티트립신-α-1 단백질을 세로의 배지로 효율적으로 분비시키는 발현 분비 벡터에 관한 것으로, 이누리나제 분비 시그날 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드와 연결된 인간 안티트립신-α-1 구조 유전자를 포함하는 인간 안티트립신-α-1의 발현 분비 벡터, 상기 발현 분비 벡터로 형질 전환된 재조합 효모 세포; 및 상기 재조합 효모 세포를 배양하여 인간 안티트립신-α-1 단백질을 생산하는 방법을 제공한다.

公开(公告)号：KR100267668B1

公开(公告)日：2000-11-01

申请号：KR1019980016309

申请日：1998-05-07

Applicant: 한국과학기술연구원 ,  주식회사 두산

Inventor： 이상기 ,  배정훈 ,  최의성 ,  손정훈 ,  강현아 ,  박장서

IPC: C12N15/54

Abstract: PURPOSE: A serine palmitoyl transferase coding gene derived from Pichia ciferrii and a tetraacetyl phytosphingosine(TAPS) producing method using the same are provided, thereby tetraacetyl phytosphingosine(TAPS) can be mass produced with low costs. CONSTITUTION: The gene LCB2 encoding serine palmitoyl transferase and derived from Pichia ciferrii (ATCC 14091) is represented by sequence ID No. 1 described as in the description. The expression vector prACL2(KCTC-0468BP) having an endonuclease map of Fig. 3 contains the gene LCB2, CYHr gene being resistant to cycloheximide, and ribosome DNA derived from Pichia ciferrii, wherein the ribosome DNA comprises a 0.6kb non transcribed region which is obtained by cleavage with HindIII/EcoRV. A transformant is produced by transforming Pichia ciferrii with the expression vector prACL2(KCTC-0468BP). Tetraacetyl phytosphingosine(TAPS) which is a raw material of ceramides is produced by incubating the transformed Pichia ciferrii and extracting TAPS from the fermented culture, wherein ceramides are used in protecting the skin and maintaining the humidity of the skin.

Abstract translation: 目的：提供从毕赤酵母（Pichia ciferrii）衍生的丝氨酸棕榈酰转移酶编码基因和使用其的四乙酰植物鞘氨醇（TAPS）生产方法，从而可以低成本批量生产四乙酰植物鞘氨醇（TAPS）。 构成：编码丝氨酸棕榈酰转移酶并衍生自毕赤酵母（ATCC 14091）的基因LCB2由描述中描述的序列ID 1表示。 具有图1的核酸内切酶图谱的表达载体prACL2（KCTC-0468BP） 3包含基因LCB2，对放线菌酮具有抗性的CYHr基因和衍生自毕赤酵母的核糖体DNA，其中核糖体DNA包含通过用HindIII / EcoRV切割获得的0.6kb非转录区域。 通过用表达载体prACL2（KCTC-0468BP）转化毕赤酵母来产生转化体。 作为神经酰胺原料的四乙酰植物鞘氨醇（TAPS）是通过将转化的毕赤酵母培养并从发酵培养物中提取TAPS产生的，其中使用神经酰胺来保护皮肤并保持皮肤湿度。

公开(公告)号：KR100267666B1

公开(公告)日：2000-11-01

申请号：KR1019980016310

申请日：1998-05-07

Applicant: 한국과학기술연구원 ,  주식회사 두산

Inventor： 이상기 ,  배정훈 ,  최의성 ,  손정훈 ,  강현아 ,  박장서

IPC: C12N15/31 ,  C12N15/63

Abstract: PURPOSE: Provided is an expression plasmid for Pichia ciferrii to insert targeted genes as many as possible into the strain when transformation of Pichia ciferrii is required. CONSTITUTION: The expression plasmid for Pichia ciferrii is obtained by the next steps of: i) separating the gene of ribosome protein L41 of sequence ID. No. 1 from Pichia ciferrii; ii) making the L41 gene resistant to cycloheximide and manufacturing plasmid pCYH1.9¬r to select transformants; iii) separating ribosome DNA and making plasmid prDX9.0 to insert targeted genes into chromosome more effectively; and iv) making a recombinant plasmid by treating ribosome DNA with restriction enzyme.

Abstract translation: 目的：提供毕赤酵母在需要转化毕赤酵母时将目标基因尽可能多地插入菌株的表达质粒。 构成：通过以下步骤获得毕赤酵母的表达质粒：i）分离序列ID的核糖体蛋白L41的基因。 毕赤酵母1号; ii）使L41基因对放线菌酮具有抗性，并制备质粒pCYH1.9-r以选择转化体; iii）分离核糖体DNA，制作质粒prDX9.0，将靶基因更有效地插入染色体; 和iv）用限制酶处理核糖体DNA制备重组质粒。

公开(公告)号：KR100246932B1

公开(公告)日：2000-03-15

申请号：KR1019970047147

申请日：1997-09-12

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 정봉현 ,  김수정 ,  이상기 ,  강현아 ,  최의성

IPC: C12N1/19 ,  C12N15/14

Abstract: 본 발명은 효모로부터 인체 부갑상선 호르몬(human parathyroid hormone: hPTH)을 효율적으로 생산하는 방법에 관한 것으로 단백질 분해 효소인 효모 아스파틱 프로테아제 3(Yeast Aspartic Protease 3: YAP3) 결손 균주를 제작하여 인체 부갑상선 호르몬의 분해를 최소화하므로써 완전한 형태의 인체 부갑상선 호르몬을 생산하는 방법을 제공한다.

公开(公告)号：KR100145948B1

公开(公告)日：1998-08-01

申请号：KR1019950003140

申请日：1995-02-18

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 정봉현 ,  남수완 ,  박영훈 ,  유명희 ,  강현아

IPC: C12N15/81 ,  C12N15/15

Abstract: 본 발명은 효모세포에서 발현된 인간 안티트립신-α-1 단백질을 세포의 배지로 효율적으로 분비시키는 발현 분비 벡터에 관한 것으로, 이누리나제 분비 시그날 서열을 코딩하는 폴리뉴클레오티드와 연결된 인간 안티트립신-α-1 구조 유전자를 포함하는 인간 안티트립신-α-1의 발현 분비 벡터, 상기 발현 분비 벡터로 형질 전환된 재조합 효모 세포; 및 상기 재조합 효모 세포를 배양하여 인간 안티트립신-α-1 단백질을 생산하는 방법을 제공한다.

公开(公告)号：KR100287483B1

公开(公告)日：2001-05-02

申请号：KR1019980033969

申请日：1998-08-21

Applicant: 한국과학기술연구원 ,  주식회사 두산

Inventor： 이상기 ,  배정훈 ,  최의성 ,  손정훈 ,  강현아 ,  박장서

IPC: C12N15/52 ,  C12N15/67

Abstract: 본 발명은
피치아 시페리 (
Pichia ciferrii ) ATCC 14091 유래의 글리세르알데히드-3-인산 탈수소효소(GAPDH : glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase) 프로모터 유전자, 이 프로모터 유전자를 포함하는 플라스미드 prACGL2(KCTC-0498BP)와 prHECGL2(KCTC-0511BP), 이에 의해 형질전환된
피치아 시페리 형질전환체 및 이를 배양하여 세라미드의 원료인 테트라아세틸 피토스핑고신(TAPS : tetraacetyl phytosphingosine)을 대량 생산하는 방법을 제공한다.
본 발명에 의해 제공되는 플라스미드 prACGL2(KCTC-0498BP) 또는 prHECGL2(KCTC-0511BP)에 의해 형질전환된 형질전환체는 모균주 KFCC-10937에 비하여 최소 2.1배의 TAPS 생산능을 갖고 있다.