Abstract:
A method for analyzing interaction between a HIF-1 peptide and a VBC protein induced by proline hydroxylation is provided to be able to simply analyze the interaction by measuring the change of fluorescence polarization, thereby being effectively applied to an ultra-speed searching using a well-plate. The method comprises the steps of: (a) attaching a fluorescent material to a HIF-1 peptide including a hydroxyproline group to prepare a fluorescent probe; (b) reacting the fluorescent probe with a VBC protein; and (c) after measuring the fluorescence polarization of the reactant, comparing it with the fluorescence polarization of the fluorescent probe itself so as to observe the change of the fluorescence polarization. In the method, the fluorescent probe is prepared by synthesizing a peptide from a specific peptide sequence known to be linked to a VBC protein among amino acid sequences of the known HIF-1 protein, linking an aminocaproic acid linker to an N-terminal of the synthesized peptide, and then labeling a fluorescent material to the end thereof.
Abstract:
본발명은나노와이어를이용하여세포내에서생체물질을포획또는포획된생체물질을세포밖으로분리함으로써세포를용해하지않고세포내에서의생체물질또는생체물질들의상호작용을검출하는방법에관한것이다. 본발명은, 세포내의특정생체물질과특이적으로결합하는리간드가결합된나노와이어를이용하여생체물질을포획하고세포밖으로분리시킨후 나노와이어에남아있는생체물질을분석하는방법을제공할수 있다. 또한세포를파괴하지않고특정생물질을포획하여세포밖으로제거함으로써일어나는세포의변화를관찰하는데에도용이하게활용할수 있다.
Abstract:
금 나노입자를 이용하여 신호 증폭도가 향상된, 표적 물질의 다중화 처리 분석 방법과 그 시스템을 개시한다. 이 표적 물질의 분석 시스템은 지지체, 상기 지지체에 고정되어 있고, 상기 표적 물질에 선택적으로 결합하는 포획자, 금 나노입자 복합체, 형광 RNA 탐지자 및 리보핵산 분해 효소 H를 포함한다. 이 복합체에서 검출자는 상기 표적 물질에 선택적으로 결합하는, 상기 포획자와 다른 물질로서 금 나노입자의 표면에 결합하고 있다. 이 금 나노입자의 표면의 다른 영역에는 단일 가닥의 동일한 디옥시리보뉴클레오티드가 복수 개 연결되어 있다. 상기 형광 RNA 탐지자는 이 상기 검출자-금 나노입자 복합체에 고유한 것으로서, 말단에 형광원과 상기 형광원에 대한 소광제가 연결된 단일 가닥의 리보뉴클레오티드를 포함하고, 상기 리보뉴클레오티드는 상기 디옥시리보뉴클레오티드에 상보적인 서열을 포함한다. 시료 속에 상기 포획자 및 상기 검출자의 표적 물질이 존재하면 상기 디옥시리보뉴클레오티드와 상기 리보뉴클레오티드의 혼성화가 일어나고, 이를 리보핵산 분해 효소 H가 가수분해함으로써 형광 억제가 풀려 형광 신호를 발생·증폭시킨다.
Abstract:
본 발명은 형광편광도를 이용하여 HIF-1 펩타이드와 VBC 단백질의 상호작용을 분석하는 방법에 관한 것으로서, 구체적으로 1) 형광물질이 부착된 하이드록시프롤린(hydroxyproline)기를 포함하는 HIF-1 펩타이드에 형광물질을 부착하여 형광 프로브를 제조하는 단계; 2) 상기 형광 프로브를 VBC 단백질과 반응시키는 단계; 3) 상기 반응물의 형광편광도를 측정한 후 형광 프로브 자체의 형광편광도와 비교하여 형광편광도의 변화를 관찰함으로써 HIF-1-VBC 단백질 결합체의 형성을 정량적으로 분석하는 방법; 상기 방법을 이용하여 HIF-1 펩타이드와 VBC 단백질의 결합을 방해하는 물질을 검색하는 방법; 및 상기 방법을 이용하여 프롤릴 하이드록실라제(prolyl hydroxylase)의 활성을 분석하는 방법에 관한 것이다. 본 발명의 분석방법은 결합유무에 따른 형광편광도의 변화로 HIF-1 펩타이드와 VBC 단백질의 상호작용을 간단히 분석할 수 있어 웰 플레이트를 이용한 초고속 검색에 효과적으로 적용될 수 있다.
Abstract:
본 발명은 형광편광도를 이용한 파네소이드 X 수용체-리간드 복합체의 상호작용 분석방법 및 결합저해물질 검색방법에 관한 것으로서, 구체적으로 형광편광도를 이용한 파네소이드 X 수용체 (FXR)와 형광표지된 리간드간의 상호작용 분석방법 및 형광표지된 리간드와 파네소이드 X 수용체를 포함한 시료에 결합저해 후보물질을 가하고, 형광편광도를 측정하여 파네소이드 X 수용체에 대한 리간드와 결합저해 후보물질의 경쟁적 결합여부를 확인함으로써 파네소이드 X 수용체와 리간드 복합체의 결합 저해물질 검색방법에 관한 것이다. 본 발명의 상호작용 분석방법 및 결합 저해물질 검색방법은 웰 플레이트를 이용한 초고속 검색에 효과적으로 적용될 수 있어서 고지혈증 치료제 개발에 매우 유용하다. 파네소이드 X 수용체, 형광편광도, 리간드