公开(公告)号：KR1020140015959A

公开(公告)日：2014-02-07

申请号：KR1020120082501

申请日：2012-07-27

Applicant: 대한민국(농림축산식품부 농림축산검역본부장)

Inventor： 고영준 ,  이향심 ,  박종현 ,  이광녕 ,  김수미 ,  조인수

IPC: C12N7/01 ,  G01N33/569 ,  C12N15/33 ,  C07K16/08

Abstract: The present invention relates to a method for diagnosing foot-and-mouth diseases virus type C using foot-and-mouth diseases virus type C recombinant protein antigens and monoclonal antibodies. An embodiment of the method for diagnosing foot-and-mouth diseases virus type C using foot-and-mouth diseases virus type C recombinant protein antigens and monoclonal antibodies can be performed by the following step (1) to (11): (1) a step which makes the foot-and-mouth diseases virus type C antibodies react on a plate; (2) a step which removes the antibodies not attached to the plate by washing; (3) a step which makes foot-and-mouth diseases virus type C protein react with diagnostic antigens on the plate; (4) a step which removes the foot-and-mouth diseases virus type C protein not attached to the plate by washing; (5) a step which makes serum test samples react on the plate; a step which removes the serum test samples not attached to the plate by washing; (7) a step which makes foot-and-mouth diseases virus type C monoclonal antibodies by placing the same on the plate; (8) a step which removes the foot-and-mouth diseases virus type C monoclonal antibodies not attached to the plate; (9) a step which makes anti-mouse antibodies with which horseradish peroxidase is combined react on the plate; (10) a step which removes the anti-mouse antibodies with which horseradish peroxidase is combined not attached to the plate by washing; and (11) a step which measures the foot-and-mouth diseases virus type C antibodies among the serum test samples by measruing absorbance of color reaction caused by enzyme reaction. [Reference numerals] (AA) Positive reaction; (BB) Negative reaction; (CC) No color formation; (DD) Color formation; (E1) Foot-and-mouth diseases virus type C rabbit blood serum antibodies; (E2) Gene recombinant protein antigen; (E3) Foot-and-mouth diseases virus type C positive blood serum antibodies; (E4) Foot-and-mouth diseases virus type C monoclonal antibodies; (E5) Peroxidase binding anti-mouse antibodies; (E6) Peroxidase substrate; (E7) Substance after peroxidase substrate reaction

Abstract translation: 本发明涉及使用口蹄疫病毒C型重组蛋白抗原和单克隆抗体诊断口蹄疫病毒C型的方法。 使用口蹄疫病毒C型重组蛋白抗原和单克隆抗体诊断口蹄疫病毒C型的方法的一个实施方案可以通过以下步骤（1）至（11）进行：（1） 使口蹄疫病毒C型抗体在板上反应的步骤; （2）通过洗涤除去未附着于板的抗体的步骤; （3）使口蹄疫病毒C型蛋白与板上的诊断抗原反应的步骤; （4）通过洗涤除去未附着在板上的口蹄疫病毒C型蛋白质的步骤; （5）使血清试样在板上反应的步骤; 通过洗涤除去未附着在板上的血清测试样品的步骤; （7）使口蹄疫病毒C型单克隆抗体通过将其放置在板上的步骤; （8）除去未附着在板上的口蹄疫病毒C型单克隆抗体的步骤; （9）使辣根过氧化物酶结合的抗小鼠抗体与板反应的步骤; （10）除去通过洗涤将辣根过氧化物酶组合而不附着在板上的抗小鼠抗体的步骤; 和（11）通过测量由酶反应引起的显色反应的吸光度，测量血清测试样品中口蹄疫病毒C型抗体的步骤。 （标号）（AA）正反应; （BB）阴性反应; （CC）无颜色形成; （DD）成色; （E1）口蹄疫病毒C型兔血清抗体; （E2）基因重组蛋白抗原; （E3）口蹄疫病毒C型阳性血清抗体; （E4）口蹄疫病毒C型单克隆抗体; （E5）过氧化物酶结合抗小鼠抗体; （E6）过氧化物酶底物; （E7）过氧化物酶底物反应后的物质

公开(公告)号：KR101293670B1

公开(公告)日：2013-08-12

申请号：KR1020110076694

申请日：2011-08-01

Applicant: 대한민국(농림축산식품부 농림축산검역본부장)

Inventor： 김수미 ,  르반빤 ,  박종현 ,  이광녕 ,  조인수

IPC: C12N15/11 ,  C12Q1/68

Abstract: 본 발명은 구제역 O형, A형, Aisa1형 바이러스 진단용 프라이머 및 이를 이용한 멀티플렉스 RT-PCR 기법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 서열번호 1의 VN-VP1R 리버스 프라이머 및 서열번호 2의 VN-OF 포워드 프라이머로 이루어진 구제역 O형 바이러스 진단용 프라이머 세트; 서열번호 1의 VN-VP1R 리버스 프라이머 및 서열번호 3의 VN-As1F 포워드 프라이머로 이루어진 구제역 Asia1형 바이러스 진단용 프라이머 세트; 및 서열번호 1의 VN-VP1R 리버스 프라이머 및 서열번호 4의 AN-AF 포워드 프라이머로 이루어진 구제역 A형 바이러스 진단용 프라이머 세트; 에 관한 것이다. 궁극적으로 본 발명은 (i) 서열번호 1의 VN-VP1R 리버스 프라이머 및 서열번호 2의 VN-OF 포워드 프라이머로 이루어진 프라이머 세트, (ii) 서열번호 1의 VN-VP1R 리버스 프라이머 및 서열번호 3의 VN-As1F 포워드 프라이머로 이루어진 프라이머 세트 및 (iii) 서열번호 1의 VN-VP1R 리버스 프라이머 및 서열번호 4의 AN-AF 포워드 프라이머로 이루어진 프라이머 세트를 이용하여 구제역 O형, A형 및 Asia1형 바이러스를 동시진단하기 위한 multiplex-RT-PCR 기법에 관한 것이다.

公开(公告)号：KR101247981B1

公开(公告)日：2013-03-27

申请号：KR1020090095646

申请日：2009-10-08

Applicant: 대한민국(농림축산식품부 농림축산검역본부장)

Inventor： 김수미 ,  이광녕 ,  박종현 ,  고영준 ,  이향심 ,  권창희

IPC: C12Q1/68 ,  C12N15/11

CPC classification number: H04W8/20

Abstract: 본 발명은 구제역 바이러스의 7가지 혈청형(O, A, Asia 1, C, SAT 1, SAT 2, SAT 3)을 감별하는 유전자 진단방법에 관한 것이다.
본 발명의 목적은 아시아에서 실질적으로 적용할 수 있고 7가지 혈청형을 정확하게 감별할 수 있는 일반적 유전자 진단법(Conventional Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction; Conventional RT-PCR)을 개발하는데 있다. 보다 상세하게는 혈청형 특이적인 프라이머를 서로 다른 size 로 구분하도록 디자인한 후, 편리성과 특이도, 민감도를 동시에 확보하기 위하여 O와 Asia 1의 동시진단 세트, A와 C의 동시진단 세트, SAT 1, SAT 2, SAT 3의 동시진단 세트로 나누어 진단전략을 수립하였다. 각각의 세트에 대한 반응조건을 확립한 뒤 혈청형별 비특이 여부와 민감도를 측정하였다. 각 세트(set)에서 다른 혈청형에 대한 비특이는 관찰되지 않았으며, 평균적으로 10
3 copy의 민감도를 관찰하였으며, 또한 야외 실증 시험을 통하여 적용 가능성을 증명하였다.
본 발명에서 제공하는 구제역 혈청형 감별을 위한 유전자 진단방법은 새롭게 디자인된 프라이머를 사용하여 7가지 혈청형을 전기영동상의 DNA size로 감별할 수 있으며, 시료의 RNA를 추출하여 One-step RT-PCR하는 방법으로 진단할 수 있다. 뿐만 아니라, 3개의 튜브에 동시에 RNA 시료를 넣어 동일한 조건에서 증폭을 진행하도록 설정되어 교차오염을 줄이면서도 간편하게 혈청형 감별이 가능하다. 따라서 본 진단방법을 킷트화할 경우 우리나라 및 주변의 아시아 국가들에서 간편한 사용법과 저렴한 비용으로 짧은 시간 안에 구제역 혈청형을 감별해 낼 수 있다.
구제역 바이러스, 동시 진단, 혈청형 감별, 유전자 진단법, Conventional RT-PCR

公开(公告)号：KR101105833B1

公开(公告)日：2012-01-13

申请号：KR1020090088714

申请日：2009-09-18

Applicant: 대한민국(농림축산식품부 농림축산검역본부장) ,  주식회사 메디안디노스틱

Inventor： 고영준 ,  이향심 ,  정혜영 ,  허은정 ,  박종현 ,  이광녕 ,  김수미 ,  권창희 ,  주후돈 ,  장병식

IPC: G01N33/68 ,  C12N15/09 ,  G01N33/563

Abstract: 본 발명은 구제역바이러스 아시아 1형 항체를 검출하기 위한 진단방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 (1) 96웰 마이크로플레이트에 O형, A형, 아시아1형 및 C형의 구제역바이러스 혈청형 공통 항체 70-17을 반응시키는 단계; (2) 상기 플레이트에 부착되지 않은 단클론항체를 세척하여 제거하는 단계; (3) 진단항원으로서 구제역바이러스 아시아1형 유전자재조합 단백질항원을 반응시키는 단계; (4) 상기 플레이트에 부착되지 않은 단백질항원을 세척하여 제거하는 단계; (5) 검사혈청시료를 반응시키는 단계; (6) 상기 플레이트에 부착되지 않은 검사혈청시료를 세척하여 제거하는 단계; (7) 호스레디쉬 페록시다제 효소가 결합된 아시아1형 특이 단클론항체를 경합적으로 반응시키는 단계; (8) 상기 플레이트에 부착되지 않은 단클론항체를 세척하여 제거하는 단계; 및 (9) 효소반응에 의한 발색반응의 흡광도를 측정하여 검사혈청 중의 구제역바이러스 아시아1형 항체 수준을 측정하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 구제역바이러스 아시아1형 항체를 검출하기 위한 진단방법에 관한 것이다.
본 발명의 진단방법은 경합방식의 효소결합면역측정법으로서 소, 돼지, 염소 등 축종에 상관없이 동일한 방식으로 검사할 수 있으며 구제역바이러스 아시아 1형 감염여부를 판정하거나 백신접종시 백신항체역가를 신속하게 측정할 수 있기 때문에 표준검사법인 바이러스중화시험법을 대체할 수 있는 신규 진단법으로의 활용이 가능하며, 또한 기존 진단법과는 달리 생바이러스를 취급하지 않기 때문에 바이러 스 취급에 따른 불의의 사고로 바이러스가 유출되어 질병이 발생할 수 있는 우려를 사전에 차단할 수 있다.
구제역바이러스 아시아1형, 유전자재조합 단백질항원, 단클론항체, 효소결합면역측정법

公开(公告)号：KR1020110135532A

公开(公告)日：2011-12-19

申请号：KR1020100055310

申请日：2010-06-11

Applicant: 대한민국(농림축산식품부 농림축산검역본부장)

Inventor： 김수미 ,  이광녕 ,  박종현 ,  고영준 ,  이향심 ,  권창희

IPC: A61K39/21 ,  A61K39/235 ,  A61K38/16 ,  A61P31/12

CPC classification number: A61K39/135 ,  A61K39/235 ,  C12N2770/32111 ,  Y10S930/222

Abstract: PURPOSE: A virus vector for expressing three different siRNAs and a vaccine containing the same for foot and mouth disease are provided to induce silencing of three site of the virus. CONSTITUTION: A virus vector for preventing foot and mouth disease contains siRNA of sequence numbers 1 to 3. The virus vector contains three promoters, shRNA coding region, and transcription termination factor. The promoter is U6 promoter of sequence number 12 and CMV promoter of sequence number 13. The shRNA coding region contains one or more pair of shRNA coding regions of each sequence number 4-11. The transcription termination factor is pol III or pol II gene. The virus vector is retrovirus, adenovirus or adeno-associated virus.

Abstract translation: 目的：提供用于表达三种不同siRNA的病毒载体和含有其的口蹄疫疫苗，以诱导三个病毒部位的沉默。 构成：用于预防口蹄疫的病毒载体含有序列号1〜3的siRNA。病毒载体含有3个启动子，shRNA编码区和转录终止因子。 启动子是序列号12的U6启动子和序列号13的CMV启动子.RNA编码区包含每个序列号4-11的一对或多个shRNA编码区。 转录终止因子是pol III或pol II基因。 病毒载体是逆转录病毒，腺病毒或腺相关病毒。

公开(公告)号：KR100478435B1

公开(公告)日：2005-03-28

申请号：KR1020020088561

申请日：2002-12-31

Applicant: 대한민국(농림축산식품부 농림축산검역본부장) ,  주식회사 메디안디노스틱

Inventor： 최은진 ,  송재영 ,  박종현 ,  안동준 ,  차상호 ,  권준헌 ,  장병식 ,  박흥숙 ,  방선영

IPC: C12N5/18

Abstract: 본 발명은 돼지콜레라바이러스( Classical Swine Fever Virus: CSFV)에 대한 단일클론항체들과 이를 생산하는 세포주들, 상기 단일클론항체들을 이용한 돼지콜레라 바이러스 검출법 및 진단 키트에 관한 것이다. 더욱 상세하게는 돼지콜레라 바이러스에 특이하게 반응하는 코팅용 단일클론항체를 면역플레이트에 코팅하여 부착하고 상기에서 제작한 단일클론항체에 효소를 콘쥬게이션시켜 얻은 검출용 단일클론항체와 전처리한 시료를 반응시켜 시료 내에 돼지콜레라 바이러스의 존재 유무를 신속, 정확하게 검출하는 방법에 관한 것이다.

公开(公告)号：KR1020030066038A

公开(公告)日：2003-08-09

申请号：KR1020020006191

申请日：2002-02-04

Applicant: 주식회사 엠아이텍 ,  대한민국(농림축산식품부 농림축산검역본부장)

Inventor： 정인권 ,  안동준 ,  박찬승 ,  안성순 ,  송재영 ,  박종현 ,  차상호 ,  최은진 ,  권준헌

IPC: A61M5/20

Abstract: PURPOSE: An injector for livestock is provided to improve inoculation efficiency since a continuous inoculation is possible, inoculate precisely on an inoculation region of moving livestock and make maintenance easier due to its simple structure. CONSTITUTION: The injector for livestock comprises: an injector main body(2) which has a pressure handle(H) slidably mounted; a chemical feeding unit which injects a chemical by the operation of the pressure handle(H); and a display unit which is mounted at one side face of the chemical feeding unit and displays whether inoculation is carried out or not.

Abstract translation: 目的：提供家禽注射器，以提高接种效率，因为连续接种是可能的，准确地接种在移动的牲畜的接种区域，并由于其简单的结构使维护更容易。 构成：用于家畜的注射器包括：具有可滑动安装的压力手柄（H）的喷射器主体（2）; 化学进料单元，其通过所述压力手柄（H）的操作来喷射化学品; 以及显示单元，其安装在所述化学供给单元的一个侧面，并显示是否进行接种。

公开(公告)号：KR100318093B1

公开(公告)日：2002-09-26

申请号：KR1019980037509

申请日：1998-09-11

Applicant: 대한민국(농림축산식품부 농림축산검역본부장)

Inventor： 현방훈 ,  송재영 ,  안동준 ,  박종현 ,  차상호 ,  안수환

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/86

Abstract: 본 발명은 돼지의 주요 전염병을 예방하기 위한 벡터백신으로 사용될 수 있는 재조합 돼지오제스키병 바이러스에 관한 것으로, 돼지오제스키병 바이러스 양산주(KFCC-11048)의 TK(Thymidine kinase)유전자를 결실시키고, TK 프로모터하에서 돼지 인터류킨-2(Interleukin-2; IL-2) 유전자가 발현될 수 있도록 삽입하는 것에 의해 병원성이 감소되고 세포면역 향상능을 갖는 벡터백신을 제공할 수 있다. 더구나, TK 유전자 결실 및 IL-2 유전자의 삽입에 더하여, gI 유전자를 결실시키고, β-갈락토시다제 유전자를 마커(marker) 유전자로 하여 삽입, 발현시킴으로써, β-갈락토시다제 유전자 대신 바이러스 병원체에 대한 방어항원을 코딩하는 유전자를 외래 유전자로 삽입, 발현할 수 있는 다가 벡터백신을 제공할 수 있다. 따라서, 본 발명의 벡터백신은 종래 예방약보다 면역 효과가 우수한 돼지 오제스키병의 예방약 생산에 사용될 수 있으며, 다른 바이러스등의 병원체에 대한 항원을 코딩하는 유전자를 외래유전자로 삽입하는 경우 다른 병원체의 예방약 생산에도 사용될 수 있다.

公开(公告)号：KR1020010056362A

公开(公告)日：2001-07-04

申请号：KR1019990057805

申请日：1999-12-15

Applicant: 대한민국(농림축산식품부 농림축산검역본부장)

Inventor： 현방훈 ,  송재영 ,  안동준 ,  박종현 ,  차상호 ,  안수환

IPC: A61K39/15

Abstract: PURPOSE: Provided is a diagnosis method of bovine viral diarrhea(BVD) using a recombinant protein consisting of gp53 protein of bovine viral diarrhea virus(BVDV) expressed in an insect cell, as an antigen. CONSTITUTION: The diagnosis method of bovine viral diarrhea(BVD) detects a neutralization antibody of BVDV by indirect Sandwich enzyme linked immunosorbent assay(IS-ELISA) using gp53 protein of BVD expressed in an insect cell. The recombinant protein is produced by an expression vector of gp53 protein of BVD in a transformed insect cells.

Abstract translation: 目的：提供使用由在昆虫细胞中表达的牛病毒性腹泻病毒（BVDV）的gp53蛋白质构成的重组蛋白作为抗原的牛病毒性腹泻（BVD）的诊断方法。 构成：牛病毒性腹泻（BVD）的诊断方法使用在昆虫细胞中表达的BVD的gp53蛋白通过间接夹心酶联免疫吸附测定（IS-ELISA）检测BVDV的中和抗体。 重组蛋白由转化的昆虫细胞中BVD的gp53蛋白的表达载体产生。

公开(公告)号：KR100272697B1

公开(公告)日：2000-11-15

申请号：KR1019980004830

申请日：1998-02-17

Applicant: 대한민국(농림축산식품부 농림축산검역본부장)

Inventor： 현방훈 ,  송재영 ,  안동준 ,  박종현 ,  차상호 ,  안수환

IPC: C12N15/86 ,  C12N15/33

Abstract: PURPOSE: Provided is a method for detecting the infectious bovine rhinotracheitis virus(IBRV)-specific neutralizing antibody by ELISA using gD protein of IBRV, thereby the IBRV-specific neutralizing antibody can be rapidly and exactly detected. CONSTITUTION: The recombinant baculovirus that produces gD protein of IBRV is produced by the steps of: inserting the K gene fragment of an IBRV PQ strain into a plasmid pBluescript SK(+) to prepare a plasmid pPQ8H; inserting the fragment of pPQ8H into a plasmid pBluescript SK(+) to prepare pPQM1.3; inserting the universal stop sequence 5'- TAATTAATTAA- 3' and a simian virus 40 polyadenylation signal into a plasmid pVL1393 to prepare a vector pVL-SV40p(A); ligating pVL-SV40p(A) with pPQ1.3 to produce the recombinant baculovirus that produces gD protein of IBRV. The method for detecting the IBRV-specific neutralizing antibody comprises the steps of: coating the purified anti-gD monoclonal antibody using a coating buffer and blocking-reacting with a blocking solution; coating-reacting gD protein of IBRV, which is produced by the recombinant baculovirus, by diluting it in PBS; reacting the coating-reacted gD protein with bovine serum and washing it with water; subjecting it to the anti-bovine conjugate-reaction with a serum diluting solution; and coloring it and measuring its optical density.

Abstract translation: 目的：提供使用IBRV的gD蛋白通过ELISA检测感染性牛鼻气管炎病毒（IBRV）特异性中和抗体的方法，从而可快速准确地检测IBRV特异性中和抗体。 构成：通过以下步骤产生产生IBRV的gD蛋白的重组杆状病毒：将IBRV PQ菌株的K基因片段插入质粒pBluescript SK（+）中以制备质粒pPQ8H; 将pPQ8H的片段插入质粒pBluescript SK（+）中以制备pPQM1.3; 将通用终止序列5'-TAATTAATTAA-3'和猿病毒40多聚腺苷酸化信号插入质粒pVL1393中以制备载体pVL-SV40p（A）; 将pVL-SV40p（A）与pPQ1.3连接以产生产生IBRV的gD蛋白的重组杆状病毒。 用于检测IBRV特异性中和抗体的方法包括以下步骤：使用涂布缓冲液涂覆纯化的抗gD单克隆抗体并与封闭溶液进行封闭反应; 由重组杆状病毒产生的IBRV的包被反应gD蛋白通过在PBS中稀释; 将涂覆反应的gD蛋白与牛血清反应并用水洗涤; 用血清稀释液进行抗牛共轭反应; 并着色并测量其光密度。