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公开(公告)号：CN116790806A
公开(公告)日：2023-09-22
申请号：CN202311006844.2
申请日：2023-08-11
IPC: C12Q1/6895 , C12Q1/6858 , C12N15/11 , A01H1/04
Abstract: 本发明属于分子标记及种质资源鉴定技术领域，具体涉及一种位于陆地棉GhHRK1基因上游调控区域上的SNP变异及其应用。本发明所述SNP变异位于GhHRK1基因上游调控区域，与高温抗性表型存在紧密连锁，并以所述SNP变异开发得到KASP标记，以此可以实现棉花种质高温抗性的鉴定，即仅需要对待测棉花种质基因组DNA为模板进行PCR扩增，即可通过分子标记带型，准确判断待测棉花种质是否具有高温抗性，便捷高效，为棉花育种提供了技术基础和支持。
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公开(公告)号：CN112813076B
公开(公告)日：2022-09-09
申请号：CN202110283859.8
申请日：2021-03-17
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/29 , C12N15/113 , C12N15/84 , A01H5/10 , A01H6/60
Abstract: 本发明提供了一种敲除棉花GhTSTs基因的sgRNA组合物及其在创制棉花无短绒突变体中的应用，属于植物基因工程技术领域。本发明针对8个GhTSTs基因的保守区段设计的3条基因编辑用sgRNA，构建二套CRISPR‑Cas9载体，进行农杆菌介导的遗传转化，获得棉花无短绒突变体。因此，本发明提供了GhTSTs基因在创制棉无短绒突变体中的应用。同时本发明还提供了敲除GhTSTs基因的载体在创制棉花无短绒突变体中的应用。本发明确定了GhTSTs基因为创制棉花无短绒性状的靶点基因，并成功创建棉花无短绒突变体，为后续研究短绒发生和无短绒相关育种及筛选提供材料基础。
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公开(公告)号：CN112680455B
公开(公告)日：2022-08-05
申请号：CN202110086687.5
申请日：2021-01-22
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/29 , C07K14/415 , C12N15/113 , C12N15/82 , A01H5/02 , A01H6/60
Abstract: 本发明提供了一种棉花隐性核不育恢复基因GhNSP及其应用和创制棉花雄性不育种质的方法，属于棉花育种技术领域。所述棉花隐性核不育恢复基因GhNSP为以下核苷酸序列中的一种：1)序列表SEQ ID NO：1中所示的DNA序列；2)编码序列表SEQ ID NO：2所示蛋白质的DNA序列。本发明还提供了一种敲除所述棉花隐性核不育恢复基因GhNSP的试剂在棉花细胞核雄性不育系中的应用。此外，本发明还提供了一种创制棉花雄性不育种质的方法，采用所述sgRNA或CRISPR/Cas9系统敲除陆地棉中基因GhNSP，创制出陆地棉新的不育系材料，对杂种优势利用和群体改良具有非常重要的意义。
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公开(公告)号：CN108165658B
公开(公告)日：2022-04-26
申请号：CN201810200184.4
申请日：2018-03-12
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12Q1/6895 , C12N15/11
Abstract: 本发明提供了陆地棉棉仁含油量基因GhKAS1的分子标记及其筛选方法。本发明通过设计Indel引物对503份陆地棉自然品种进行基因型分析，结合两年四个环境的油份表型数据检测到一个与棉仁含油量相关的基因为雷蒙德氏棉中预测的GrKAS1；将GrKAS1基因在陆地棉基因组中搜索到6个拷贝，以其为模板分别设计引物，分别对503份陆地棉品种用聚丙烯凝胶电泳分析及关联分析；对陆地棉品种中的10份极端材料中的GhKAS1基因进行测序，找出突变位点，自设计引物对503份陆地棉资源群体进行分析，利用聚丙烯凝胶电泳分析及关联分析。本发明发掘了与棉籽油含量相关的分子标记，为棉籽油的分子标记辅助选择育种提供参考依据。
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公开(公告)号：CN112094862B
公开(公告)日：2022-04-19
申请号：CN201911304475.9
申请日：2019-12-17
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种带有标记的棉花雄性不育系的创制方法。本发明提供利用CRISPR‑Cas9系统创造带有新型标记的棉花雄性不育系。本发明的特征在于，选取特异针对GhEMS1基因的靶位点sgRNA1、sgRNA2，与Cas9蛋白在棉花内稳定表达，获得带有新型标记的棉花雄性不育系。转基因再生植株的花药表面带有黑斑表型可稳定地遗传至下一代，且不育性稳定。本发明的优点在于克服了传统人工去雄方法做杂交费时费力的缺陷，并且不育株带有黑斑标记，便于早期确定不育株。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN113832180A
公开(公告)日：2021-12-24
申请号：CN202110885202.9
申请日：2021-08-03
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，公开了一种CRISPR/Cas13b介导的棉花RNA转录调控方法，对含有棉花内源启动子载体进行改造，以PbuCas13b蛋白取代原有的nCas9+Tad蛋白，构建在棉花中具有RNA编辑能力的载体CRISPR/PbuCas13b；选取GhCLA和GhPGF为目标基因验证CRISPR/PbuCas13b在棉花中的应用；设计靶标，利用农杆菌介导的遗传转化将单碱基编辑系统导入棉花基因组，对转基因植株进行qRT‑PCR，以jin668为对照，检测CRISPR/PbuCas13b在异源四倍体棉花基因组中的编辑效率。本发明的转化载体可在陆地棉基因组编辑中应用。
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公开(公告)号：CN113337539A
公开(公告)日：2021-09-03
申请号：CN202110583896.0
申请日：2021-05-27
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明涉及植物基因工程技术领域，且公开了一种适用于陆地棉的基因精准高效编辑的方法，所述该载体的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。该适用于陆地棉的基因精准高效编辑的方法，通过对含有棉花内源启动子pGhU6‑7的pRGEB32‑GhU6.7‑NPTⅡ载体进行改造，以BeYDV双生病毒中复制子元件为载体，将sgRNA序列构建在复制环内，构建了在棉花中具有基因编辑功能的载体BeYDV‑Cas9，选取GhCLA为目标基因验证BeYDV‑Cas9在棉花中的应用，并且设计1个靶标，利用农杆菌介导的遗传转化将BeYDV‑Cas9基因编辑系统导入棉花基因组，对转基因植株进行Sanger测序，检测本发明在异源四倍体棉花基因组中的编辑效率类型，从而有效的解决了传统的CRISPR‑Cas9系统在对陆地棉进行基因编辑时无能为力，且并无可行有效编辑工具的问题。
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公开(公告)号：CN113073112A
公开(公告)日：2021-07-06
申请号：CN202110487854.7
申请日：2021-04-30
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/82 , C12N15/113 , A01H4/00 , A01H5/12 , A01H6/82
Abstract: 本发明涉及植物基因工程技术领域，且公开了一种用植物介导CRISPR技术挖掘烟草青枯病抗性基因的方法，包括以下步骤：1)、2)和3)。该用植物介导CRISPR技术挖掘烟草青枯病抗性基因的方法，以NtTOGT基因序列作为靶序列构建了CRISPR载体，利用农杆菌介导的遗传转化方法将所述的NtTOGT基因靶标序列成功导入烟草品种岩烟97中，得到了NtTOGT基因编辑突变体材料，将该转基因烟草于温室中，用高通量的检测方法对突变体材料进行检测获得基因编辑情况，针对编辑率较高的株系进行接菌试验，通过接菌实验结果，表明经过基因编辑的烟草可以导致NtTOGT基因的表达量下调，进而影响烟草植株抗青枯病的能力，导致植株抗病性降低，说明NtTOGT基因可能与烟草抗青枯病相关。
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公开(公告)号：CN110283840B
公开(公告)日：2021-04-13
申请号：CN201910290886.0
申请日：2019-04-11
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及陆地棉基因组的精确高效编辑方法。本发明对含有棉花内源启动子pGhU6‑7的pRGEB32‑GhU6.7‑NPTⅡ载体进行改造，以LbCpf1蛋白取代原有的Cas9蛋白，构建在棉花中具有编辑能力的载体GhRBE3。选取GhCLA为目标基因验证GhRBE3在棉花中的应用。设计1个靶标，利用农杆菌介导的遗传转化将Cpf1基因编辑系统导入棉花基因组，对转基因植株进行Sanger测序和高通量测序，检测本发明在异源四倍体棉花基因组中的编辑效率及脱靶效应。本发明具有良好的编辑效率和特异性。
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公开(公告)号：CN109295074B
公开(公告)日：2020-11-20
申请号：CN201811411360.5
申请日：2018-11-24
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/29 , C12Q1/6895 , C12N15/11
Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种棉花抗枯萎病基因及其应用。从棉花群体抗枯萎病鉴定和全基因组关联分析将陆地棉抗枯萎病基因定位在17号染色体1.7‑2.1Mb的400kb的基因组区间内。利用病毒介导的基因沉默技术对这一基因组区间所有基因的表达进行抑制并接种鉴定后筛选得到棉花抗枯萎病主效基因GhFov1。该基因编码一种谷氨酸受体蛋白激酶，抗病的陆地棉中被沉默后极显著地降低了对枯萎病的抗性。转化烟草发现GhFov1蛋白可识别棉花枯萎病菌并激活免疫反应产生过敏性坏死。开发了一对能检测陆地棉中GhFov1基因型的引物，利用该引物和优化的PCR反应体系可对棉花种质资源和品种的枯萎病抗性进行评价。
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