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公开(公告)号：CN113073112A
公开(公告)日：2021-07-06
申请号：CN202110487854.7
申请日：2021-04-30
Applicant: 华中农业大学
IPC: C12N15/82 , C12N15/113 , A01H4/00 , A01H5/12 , A01H6/82
Abstract: 本发明涉及植物基因工程技术领域，且公开了一种用植物介导CRISPR技术挖掘烟草青枯病抗性基因的方法，包括以下步骤：1)、2)和3)。该用植物介导CRISPR技术挖掘烟草青枯病抗性基因的方法，以NtTOGT基因序列作为靶序列构建了CRISPR载体，利用农杆菌介导的遗传转化方法将所述的NtTOGT基因靶标序列成功导入烟草品种岩烟97中，得到了NtTOGT基因编辑突变体材料，将该转基因烟草于温室中，用高通量的检测方法对突变体材料进行检测获得基因编辑情况，针对编辑率较高的株系进行接菌试验，通过接菌实验结果，表明经过基因编辑的烟草可以导致NtTOGT基因的表达量下调，进而影响烟草植株抗青枯病的能力，导致植株抗病性降低，说明NtTOGT基因可能与烟草抗青枯病相关。
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公开(公告)号：CN111944842A
公开(公告)日：2020-11-17
申请号：CN202010859131.0
申请日：2020-08-24
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了构建陆地棉抗虫相关基因编辑突变体库的方法，涉及植物基因工程技术领域，通过一次性快速构建混合载体文库，经遗传转化获得陆地棉基因编辑突变体库材料，利用本发明构建的载体文库混合侵染陆地棉下胚轴，通过遗传转化获得陆地棉基因编辑突变体库材料，用高通量的检测方法对突变体材料进行检测获得基因编辑情况，针对棉花抗虫性状结合抗虫鉴定结果筛选有表型的抗感虫陆地棉基因。该构建陆地棉抗虫相关基因编辑突变体库的方法，本发明一次性快速构建了包含968个sgRNA覆盖502个基因的混合载体文库用于棉花遗传转化，本发明创建了包含五千多份愈伤两千多份再生植株的棉花基因编辑突变体文库，突变体库覆盖度高达82.07％。
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公开(公告)号：CN111926034A
公开(公告)日：2020-11-13
申请号：CN202010859115.1
申请日：2020-08-24
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明公开了陆地棉基因组单碱基编辑(ABE)系统，涉及基因工程技术领域。能够精准编辑单个碱基的陆地棉基因组高效转化载体GhABE7.10nCas9，该载体的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，该载体通过下列步骤制备获得：获得目的序列TadA-TadA7.10-2linker，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：4所示，利用Ale Ⅰ和Pac Ⅰ对SEQ ID NO：1所示的GhBE3载体进行酶切，与TadA-TadA7.10-2linker目的序列进行连接，通过测序验证，得到如SEQ ID NO：3所示的适用于陆地棉的单碱基编辑的高效转化载体GhABE7.10n。该陆地棉基因组单碱基编辑(ABE)系统，本发明在棉花中的编辑效率达64.86％，本发明在棉花中有较高的特异性，该方法显示出较高的编辑效率和很高的实用性，它将成为棉花功能基因组研究新的重要的技术手段。
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公开(公告)号：CN113189240A
公开(公告)日：2021-07-30
申请号：CN202110499760.1
申请日：2021-05-08
Applicant: 华中农业大学
Abstract: 本发明涉及棉花代谢组学解析领域技术领域，且公开了一种高效的棉花代谢组学样本制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1)、取棉花特定组织样品，迅速浸没于液氮中保存制成冷冻样本。本发明的样品制备和检测方法，通过真空冷冻干燥使样品的称量更加方便、准确，同时也保证了样品内代谢物的稳定性；在提取液中加入甲酸，通过降低提取液PH的方法，减弱提取反应过程中代谢产物发生的氧化反应，进一步保持样品提取过程的稳定性；通过多次试验，优化出一个相对合适的色谱梯度，这一个色谱方法可以旨在压缩较少代谢物出峰阶段的时间，减少分析时长，提升分离效率，与此同时，延长较多代谢物出峰的时间段，减少质谱分析中的离子抑制作用。
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