一种热诱导的基因编辑系统CRISPR-Cas12b在陆地棉中的应用

    公开(公告)号:CN111378684A

    公开(公告)日:2020-07-07

    申请号:CN202010179130.1

    申请日:2020-03-15

    Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域,具体涉及一种热诱导的基因编辑系统CRISPR-Cas12b首次在陆地棉中的应用。对含有棉花内源启动子pGhU6-7的pRGEB32-GhU6.7-NPT Ⅱ载体进行改造,以密码子优化合成的AaCas12b蛋白取代原Cas9蛋白,构建棉花中具有编辑能力的载体。选取GhCLA为目标基因验证载体在棉花中的应用。设计2个靶标,利用农杆菌介导的转化将Cas12b编辑系统导入棉花基因组,使用三种温度不同时间处理下胚轴,转基因植株进行相关测序,检测异源四倍体棉花基因组中的编辑效率和全基因组检测脱靶效应。本发明使用特定的温度和处理时间得到良好的编辑效率和特异性。

    利用植物介导的RNAi创造棉花抗绿盲蝽种质的方法

    公开(公告)号:CN111286515A

    公开(公告)日:2020-06-16

    申请号:CN201910011587.9

    申请日:2019-01-05

    Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域,具体涉及利用植物介导的RNAi创造棉花抗绿盲蝽种质的方法。本发明以绿盲蝽LIM基因的保守序列作为靶序列构建了RNAi载体,利用农杆菌介导的遗传转化方法将所述的绿盲蝽LIM基因成功导入棉花宿主,得到了表达绿盲蝽LIM基因双链RNA的转基因棉花。将该转基因棉花种植于室外网室中,接虫实验表明该转基因棉花可以导致绿盲蝽LIM基因的表达量下调,进而导致其无法完成正常羽化而死亡,最终导致绿盲蝽种群数量减少,从而达到抗虫的效果。本发明的转基因棉花对绿盲蝽具有抵抗能力。且转基因棉花可以与BT棉杂交生产多抗虫棉花的新种质。

    超表达GhCBL2基因在促进棉花叶片中可溶性糖积累的应用

    公开(公告)号:CN111153973A

    公开(公告)日:2020-05-15

    申请号:CN202010036135.9

    申请日:2020-01-14

    Abstract: 本发明涉及超表达GhCBL2基因在促进棉花叶片中可溶性糖积累的应用,属于植物基因工程技术领域。本发明提供了核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的GhCBL2基因或氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示的GhCBL2蛋白在促进棉花叶片中可溶性糖积累的应用。将棉花中克隆的GhCBL2基因构建到超表达载体pKGWFS7.0上,借助农杆菌介导的遗传转化,使棉花叶片可溶性糖含量显著提升,从而提高棉花对非生物逆境的抗性,可以为培育节水高产棉花新品种提供理想的途径。

    调控棉花黄萎病抗性的棉花钙依赖蛋白激酶GhCPK33基因及应用

    公开(公告)号:CN109112149A

    公开(公告)日:2019-01-01

    申请号:CN201810147454.X

    申请日:2018-02-12

    Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域,具体涉及调控棉花黄萎病抗性的棉花钙依赖蛋白激酶GhCPK33基因及应用。本发明通过对陆地棉中接种黄萎病菌后,利用不同时间点RAN-Seq数据进行分析,筛选得到一种受黄萎病诱导表达的依赖钙离子的蛋白激酶GhCPK33基因,该基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示;该基因编码的蛋白质序列如SEQ ID NO:2所示。通过VIGS体系,在棉花中沉默相应的基因,接种黄萎病菌,快速鉴定该基因在棉花黄萎病抗性中的功能。本发明分离的基因对棉花黄萎病的抗性中起负调控作用,沉默该基因,能够显著提高棉花对黄萎病菌的抗性。

    两个花药发育特异启动子及应用

    公开(公告)号:CN107541512A

    公开(公告)日:2018-01-05

    申请号:CN201610481110.3

    申请日:2016-06-26

    Abstract: 本发明属于植物基因工程领域,具体涉及两个花药发育特异启动子及应用。从拟南芥哥伦比亚野生型中得到两个花药后期高效特异表达并能受到高温诱导表达的启动子PAtCKL2和PAtCKL7,这两个启动子的核酸序列如SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示。这两个启动子在花药发育后期特异高效表达。通过高温处理启动子PAtCKL2和PAtCKL7的转基因拟南芥植株,表明在高温胁迫下PAtCKL2和PAtCKL7启动子能驱动GUS基因在拟南芥花药的早期组织中表达。还公开了所述启动子构建的表达盒的结构以及其在拟南芥和各作物中的基因工程改良,以最终创制雄性不育系或者改良高温胁迫下对雄性生殖器官发育的调控的应用。

    一种鉴别深棕色棉花的分子标记

    公开(公告)号:CN107365861A

    公开(公告)日:2017-11-21

    申请号:CN201710750264.2

    申请日:2017-08-28

    Abstract: 本发明公开了一种鉴别深棕色棉花的分子标记,属于棉花分子育种技术领域,该分子标记为位于基因组TM-1上的SSR182和SSR241,按如下方法实现:以深棕色棉花为父本,陆地棉邯郸208为母本,杂交得F1,使F1自交得到F2群体;以该F2群体单株作为棕色棉基因标记开发的材料,另收集材料构建关联分析群体,验证和筛选有效的分子标记;提取F2单株幼嫩叶片的DNA和收集材料关联群体的DNA;基于已经构建的棉花高密度遗传图谱和TM-1基因组数据开发新的标记,进行极端单株的混池筛选与目标基因紧密连锁的分子标记,进一步在F2白棉单株中利用毛细管电泳仪进行基因分型,最后进行遗传距离计算和遗传作图;利用分子紧密连锁标记在收集材料关联群体中进行验证。

    一种提高棉花再生及转化效率的方法及应用

    公开(公告)号:CN106801065A

    公开(公告)日:2017-06-06

    申请号:CN201510833618.0

    申请日:2015-11-25

    Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域,具体涉及一种提高棉花再生及转化效率的方法及应用。通过再生能力比较筛选获得农艺性状优良的棉花转基因受体材料Y668,以Y668为受体转GFP基因获得的分离群体T1代中的阴性单株Null为组织培养受体材料,经过连续两次的体细胞再生获得R2群体,最后经过典型单株选择、自交获得再生能力比亲本提高3倍的转化受体材料Jin 668。本发明还公开了Jin 668在棉花转基因中的应用。以本发明培育的Jin668作为转基因受体材料,将多个抗虫、提高油份的基因导入棉花宿主细胞,得到表达外源基因的转基因棉花植株。

    GhEXLB2基因在增强植物抗旱性中的应用

    公开(公告)号:CN104694552A

    公开(公告)日:2015-06-10

    申请号:CN201510145634.0

    申请日:2015-03-30

    Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域,具体涉及一个GhEXLB2基因在增强植物抗旱性中的应用。从棉花中克隆得到一个GhEXLB2基因,对其进行了相关的功能验证及应用。GhEXLB2基因cDNA序列如SEQ ID NO:1中第1-1151位碱基对应的序列所示,其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。本发明还涉及构建一个超表达该基因的载体,通过遗传转化能提高棉花对干旱的耐受性。

    介导棉花广谱抗性的棉花漆酶GhLac1基因及应用

    公开(公告)号:CN103421822B

    公开(公告)日:2015-04-01

    申请号:CN201310109621.9

    申请日:2013-03-29

    Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域,具体涉及一个介导棉花广谱抗性的棉花漆酶GhLac1基因及应用。所述的GhLac1基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示,其编码的蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示,该基因的开放读码框是SEQ ID NO:1所示第20-1720位碱基对应的序列。本发明还公开了该基因在棉花遗传转化中的应用。通过超量表达该基因能够促进植物体内木质素的合成,加快木质部的木质化进程,同时能够加快受损细胞的细胞壁重建。利用本发明克隆的基因,通过遗传转化可应用于棉花的广谱抗病或抗虫新品种的选育。

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