公开(公告)号：CN111378684B

公开(公告)日：2023-06-27

申请号：CN202010179130.1

申请日：2020-03-15

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 金双侠 ,  张献龙 ,  王琼琼 ,  王福秋 ,  李波 ,  丁宵

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/66 ,  A01H5/00 ,  A01H6/60

Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种热诱导的基因编辑系统CRISPR‑Cas12b首次在陆地棉中的应用。对含有棉花内源启动子pGhU6‑7的pRGEB32‑GhU6.7‑NPT Ⅱ载体进行改造，以密码子优化合成的AaCas12b蛋白取代原Cas9蛋白，构建棉花中具有编辑能力的载体。选取GhCLA为目标基因验证载体在棉花中的应用。设计2个靶标，利用农杆菌介导的转化将Cas12b编辑系统导入棉花基因组，使用三种温度不同时间处理下胚轴，转基因植株进行相关测序，检测异源四倍体棉花基因组中的编辑效率和全基因组检测脱靶效应。本发明使用特定的温度和处理时间得到良好的编辑效率和特异性。

公开(公告)号：CN111378684A

公开(公告)日：2020-07-07

申请号：CN202010179130.1

申请日：2020-03-15

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 金双侠 ,  张献龙 ,  王琼琼 ,  王福秋 ,  李波 ,  丁宵

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/66 ,  A01H5/00 ,  A01H6/60

Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种热诱导的基因编辑系统CRISPR-Cas12b首次在陆地棉中的应用。对含有棉花内源启动子pGhU6-7的pRGEB32-GhU6.7-NPT Ⅱ载体进行改造，以密码子优化合成的AaCas12b蛋白取代原Cas9蛋白，构建棉花中具有编辑能力的载体。选取GhCLA为目标基因验证载体在棉花中的应用。设计2个靶标，利用农杆菌介导的转化将Cas12b编辑系统导入棉花基因组，使用三种温度不同时间处理下胚轴，转基因植株进行相关测序，检测异源四倍体棉花基因组中的编辑效率和全基因组检测脱靶效应。本发明使用特定的温度和处理时间得到良好的编辑效率和特异性。