公开(公告)号：CN118546949A

公开(公告)日：2024-08-27

申请号：CN202410789006.5

申请日：2024-06-19

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 金双侠 ,  王福秋 ,  王冠英 ,  扶春阳 ,  胡天域 ,  许忠平 ,  王琼琼 ,  梁思佳 ,  李波

IPC: C12N15/29 ,  C12N15/113 ,  C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  A01H6/60

Abstract: 本发明属于农业生物技术领域，具体涉及GhCPK74基因及含有GhCPK74基因的组合基因在棉花抗虫性能上的应用。本发明提供了GhCPK74基因，所述GhCPK74基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，将该基因与GhCPK33基因同时敲除后，有利于提升棉花防治虫害的性能。因此，将目的植物中的GhCPK33基因和GhCPK74基因同时敲除后，能够提升棉花的抗虫性能，培育抗虫棉花，为棉花产业的健康发展奠定基础。

公开(公告)号：CN116875612A

公开(公告)日：2023-10-13

申请号：CN202311087404.4

申请日：2023-08-28

Applicant: 黄淮学院 ,  华中农业大学

Inventor： 梁思佳 ,  金双侠 ,  李婉宁 ,  刘军和 ,  王福秋 ,  李波

IPC: C12N15/12 ,  C07K14/435 ,  C12N15/113 ,  C12N15/11 ,  C12N15/82 ,  A01H5/00 ,  A01H6/00 ,  A01N57/16 ,  A01P7/04

Abstract: 本发明涉及植物基因工程技术领域。本发明提供了一种绿盲蝽CtsL基因及其对应的dsRNA序列和应用，所述绿盲蝽CtsL基因的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。本发明还包括靶向绿盲蝽CtsL基因的dsRNA序列，该序列对绿盲蝽CtsL基因具有良好的沉默效果。注射该dsRNA序列可显著降低绿盲蝽的存活率。因此，本发明所提供的CtsL基因及其致死dsRNA序列可用于转基因抗虫植物或新型杀虫剂的开发。

公开(公告)号：CN111378684B

公开(公告)日：2023-06-27

申请号：CN202010179130.1

申请日：2020-03-15

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 金双侠 ,  张献龙 ,  王琼琼 ,  王福秋 ,  李波 ,  丁宵

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/66 ,  A01H5/00 ,  A01H6/60

Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种热诱导的基因编辑系统CRISPR‑Cas12b首次在陆地棉中的应用。对含有棉花内源启动子pGhU6‑7的pRGEB32‑GhU6.7‑NPT Ⅱ载体进行改造，以密码子优化合成的AaCas12b蛋白取代原Cas9蛋白，构建棉花中具有编辑能力的载体。选取GhCLA为目标基因验证载体在棉花中的应用。设计2个靶标，利用农杆菌介导的转化将Cas12b编辑系统导入棉花基因组，使用三种温度不同时间处理下胚轴，转基因植株进行相关测序，检测异源四倍体棉花基因组中的编辑效率和全基因组检测脱靶效应。本发明使用特定的温度和处理时间得到良好的编辑效率和特异性。

公开(公告)号：CN117721145A

公开(公告)日：2024-03-19

申请号：CN202410129373.2

申请日：2024-01-31

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 金双侠 ,  王福秋 ,  梁思佳 ,  王冠英 ,  王琼琼 ,  许忠平

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/29 ,  A01H5/00 ,  A01H6/60

Abstract: 本发明提供了GhMPK31基因在调控陆地棉虫害防御能力中的应用，属于基因工程技术领域。本发明提供GhMPK31基因在调控陆地棉虫害防御能力中的应用，所述GhMPK31基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明通过超表达陆地棉中GhMPK31基因获得转基因陆地棉，其叶片中的基因超表达导致了类似于过敏反应的细胞死亡表型，损害了棉花对植食性昆虫的防御能力，表明GhMPK31基因与陆地棉虫害防御能力的相关性，为MAPK家族基因在植物与植食性昆虫互作中的作用提供了有价值的见解。

公开(公告)号：CN111378684A

公开(公告)日：2020-07-07

申请号：CN202010179130.1

申请日：2020-03-15

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 金双侠 ,  张献龙 ,  王琼琼 ,  王福秋 ,  李波 ,  丁宵

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/66 ,  A01H5/00 ,  A01H6/60

Abstract: 本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种热诱导的基因编辑系统CRISPR-Cas12b首次在陆地棉中的应用。对含有棉花内源启动子pGhU6-7的pRGEB32-GhU6.7-NPT Ⅱ载体进行改造，以密码子优化合成的AaCas12b蛋白取代原Cas9蛋白，构建棉花中具有编辑能力的载体。选取GhCLA为目标基因验证载体在棉花中的应用。设计2个靶标，利用农杆菌介导的转化将Cas12b编辑系统导入棉花基因组，使用三种温度不同时间处理下胚轴，转基因植株进行相关测序，检测异源四倍体棉花基因组中的编辑效率和全基因组检测脱靶效应。本发明使用特定的温度和处理时间得到良好的编辑效率和特异性。

公开(公告)号：CN111944842A

公开(公告)日：2020-11-17

申请号：CN202010859131.0

申请日：2020-08-24

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 金双侠 ,  张献龙 ,  孙琳 ,  许忠平 ,  王琼琼 ,  李波 ,  王福秋 ,  王冠英 ,  斯欢

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/10 ,  C40B50/06 ,  C12Q1/6895 ,  A01H5/00 ,  A01H6/60

Abstract: 本发明公开了构建陆地棉抗虫相关基因编辑突变体库的方法，涉及植物基因工程技术领域，通过一次性快速构建混合载体文库，经遗传转化获得陆地棉基因编辑突变体库材料，利用本发明构建的载体文库混合侵染陆地棉下胚轴，通过遗传转化获得陆地棉基因编辑突变体库材料，用高通量的检测方法对突变体材料进行检测获得基因编辑情况，针对棉花抗虫性状结合抗虫鉴定结果筛选有表型的抗感虫陆地棉基因。该构建陆地棉抗虫相关基因编辑突变体库的方法，本发明一次性快速构建了包含968个sgRNA覆盖502个基因的混合载体文库用于棉花遗传转化，本发明创建了包含五千多份愈伤两千多份再生植株的棉花基因编辑突变体文库，突变体库覆盖度高达82.07％。

公开(公告)号：CN111926034A

公开(公告)日：2020-11-13

申请号：CN202010859115.1

申请日：2020-08-24

Applicant: 华中农业大学

Inventor： 金双侠 ,  张献龙 ,  王冠英 ,  许忠平 ,  王福秋 ,  孙琳 ,  李波 ,  王琼琼 ,  斯欢

IPC: C12N15/82 ,  C12N15/55 ,  C12N15/66 ,  A01H5/00 ,  A01H6/60

Abstract: 本发明公开了陆地棉基因组单碱基编辑(ABE)系统，涉及基因工程技术领域。能够精准编辑单个碱基的陆地棉基因组高效转化载体GhABE7.10nCas9，该载体的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，该载体通过下列步骤制备获得：获得目的序列TadA-TadA7.10-2linker，其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO：4所示，利用Ale Ⅰ和Pac Ⅰ对SEQ ID NO：1所示的GhBE3载体进行酶切，与TadA-TadA7.10-2linker目的序列进行连接，通过测序验证，得到如SEQ ID NO：3所示的适用于陆地棉的单碱基编辑的高效转化载体GhABE7.10n。该陆地棉基因组单碱基编辑(ABE)系统，本发明在棉花中的编辑效率达64.86％，本发明在棉花中有较高的特异性，该方法显示出较高的编辑效率和很高的实用性，它将成为棉花功能基因组研究新的重要的技术手段。