公开(公告)号：CN110295147A

公开(公告)日：2019-10-01

申请号：CN201910662025.0

申请日：2019-07-22

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 李秀敏 ,  张黎琛 ,  周孝峰 ,  侯静晗 ,  王素杰 ,  张爱佳 ,  庞丹 ,  卢奎 ,  吕本洁 ,  闫子怡 ,  高灿

IPC: C12N5/10 ,  C12N15/90 ,  C12Q1/6886

Abstract: 本发明属于分子生物学技术领域，尤其涉及一种食管癌细胞系中功能基因敲除后增殖表型的快速鉴定方法及其应用。本发明通过分别转染目的基因sgRNA与CRISPR/Cas9载体同源重组后的质粒和CRISPR/Cas9的空载，然后利用流式细胞仪分选细胞，接种至六孔板中。余下的细胞裂解获取DNA，PCR后作琼脂糖凝胶鉴定验证。分选的细胞在细胞培养箱中培养2周后，终止培养，以4％多聚甲醛固定后，再经结晶紫染色。此时可肉眼判断每组细胞的克隆形成数目，克隆形成率可准确反映细胞的增殖能力和群体依赖性。根据克隆形成结果即可快速判断食管癌功能基因敲除后的增殖表型，本发明具有高效率、高精确和高通量等优势。

公开(公告)号：CN110305963B

公开(公告)日：2021-04-13

申请号：CN201910663015.9

申请日：2019-07-22

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 李秀敏 ,  周孝峰 ,  陈志国 ,  王伟隆 ,  庞丹 ,  卢奎 ,  张爱佳 ,  王素杰 ,  侯静晗 ,  高灿 ,  吕本杰 ,  闫子怡

IPC: C12Q1/6886 ,  G01N33/574 ,  A61K45/00 ,  A61P35/00

Abstract: 本发明属于癌症的免疫检测技术领域，尤其涉及一种食管癌分子标志物及其应用。本发明利用组织芯片发现PARK2基因在食管癌患者癌组织和癌旁正常组织中存在差异表达，PARK2在食管癌组织的表达与癌旁组织相比显著降低，并且PARK2的表达与食管癌肿瘤分期负相关，另外，通过比对TCGA数据库交叉验证了以上差异表达。PARK2是RING‑BETWEEN‑RING(RBR)家族的一种E3泛素连接酶，本发明首次发现了PARK2基因表达与食管癌相关，通过检测受试者食管组织中PARK2的表达，可以判断受试者是否患有食管癌、或者判断受试者是否存在患有食管癌的风险。

公开(公告)号：CN110305963A

公开(公告)日：2019-10-08

申请号：CN201910663015.9

申请日：2019-07-22

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 李秀敏 ,  周孝峰 ,  陈志国 ,  王伟隆 ,  庞丹 ,  卢奎 ,  张爱佳 ,  王素杰 ,  侯静晗 ,  高灿 ,  吕本杰 ,  闫子怡

IPC: C12Q1/6886 ,  G01N33/574 ,  A61K45/00 ,  A61P35/00

Abstract: 本发明属于癌症的免疫检测技术领域，尤其涉及一种食管癌分子标志物及其应用。本发明利用组织芯片发现PARK2基因在食管癌患者癌组织和癌旁正常组织中存在差异表达，PARK2在食管癌组织的表达与癌旁组织相比显著降低，并且PARK2的表达与食管癌肿瘤分期负相关，另外，通过比对TCGA数据库交叉验证了以上差异表达。PARK2是RING-BETWEEN-RING(RBR)家族的一种E3泛素连接酶，本发明首次发现了PARK2基因表达与食管癌相关，通过检测受试者食管组织中PARK2的表达，可以判断受试者是否患有食管癌、或者判断受试者是否存在患有食管癌的风险。