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公开(公告)号:CN110295147A
公开(公告)日:2019-10-01
申请号:CN201910662025.0
申请日:2019-07-22
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12N5/10 , C12N15/90 , C12Q1/6886
Abstract: 本发明属于分子生物学技术领域,尤其涉及一种食管癌细胞系中功能基因敲除后增殖表型的快速鉴定方法及其应用。本发明通过分别转染目的基因sgRNA与CRISPR/Cas9载体同源重组后的质粒和CRISPR/Cas9的空载,然后利用流式细胞仪分选细胞,接种至六孔板中。余下的细胞裂解获取DNA,PCR后作琼脂糖凝胶鉴定验证。分选的细胞在细胞培养箱中培养2周后,终止培养,以4%多聚甲醛固定后,再经结晶紫染色。此时可肉眼判断每组细胞的克隆形成数目,克隆形成率可准确反映细胞的增殖能力和群体依赖性。根据克隆形成结果即可快速判断食管癌功能基因敲除后的增殖表型,本发明具有高效率、高精确和高通量等优势。
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公开(公告)号:CN110305963B
公开(公告)日:2021-04-13
申请号:CN201910663015.9
申请日:2019-07-22
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12Q1/6886 , G01N33/574 , A61K45/00 , A61P35/00
Abstract: 本发明属于癌症的免疫检测技术领域,尤其涉及一种食管癌分子标志物及其应用。本发明利用组织芯片发现PARK2基因在食管癌患者癌组织和癌旁正常组织中存在差异表达,PARK2在食管癌组织的表达与癌旁组织相比显著降低,并且PARK2的表达与食管癌肿瘤分期负相关,另外,通过比对TCGA数据库交叉验证了以上差异表达。PARK2是RING‑BETWEEN‑RING(RBR)家族的一种E3泛素连接酶,本发明首次发现了PARK2基因表达与食管癌相关,通过检测受试者食管组织中PARK2的表达,可以判断受试者是否患有食管癌、或者判断受试者是否存在患有食管癌的风险。
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公开(公告)号:CN110551822A
公开(公告)日:2019-12-10
申请号:CN201910963197.1
申请日:2019-10-11
Applicant: 郑州大学第一附属医院 , 新乡医学院
IPC: C12Q1/6886 , C12N15/11
Abstract: 本发明属于肿瘤分子生物学技术领域,尤其涉及一种食管癌细胞系迁移表型的分子标志物及其应用。RNF31是一种E3泛素连接酶,本发明首次发现了RNF31基因表达与食管癌细胞系迁移能力相关,通过检测受试食管癌细胞系中RNF31的表达,可以判断受试食管癌细胞系迁移能力的强弱。本发明中的受试食管癌细胞是分别转染目的基因siRNA和不含目的基因siRNA,利用western blot和q-PCR技术检测siRNA沉默效率。食管癌细胞系迁移的判断,是通过划痕和和transwell实验可准确反映细胞的迁移能力。根据对受试食管癌细胞系RNF31蛋白和mRNA含量的检测即可快速判断食管癌的迁移表型。
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公开(公告)号:CN110512004A
公开(公告)日:2019-11-29
申请号:CN201910963210.3
申请日:2019-10-11
Applicant: 新乡医学院 , 郑州大学第一附属医院
IPC: C12Q1/6886 , C12N15/11 , G01N33/574 , G01N33/573
Abstract: 本发明属于肿瘤分子生物学技术领域,尤其涉及一种用于检测食管癌细胞迁移和侵袭能力的分子标志物及其应用。本发明运用RT-PCR、q-PCR、Western Blot、划痕实验和Transwell小室模型等现代分子生物学技术。成功构建了靶向RBCK1基因干扰siRNA,在细胞水平研究干扰RBCK1基因后对食管癌细胞迁移能力的影响,本发明提供的试剂盒,可用于检测食管癌迁移能力,具有很好的实用性。本发明首次发现了RBCK1基因表达与食管癌细胞系迁移能力有关,食管癌细胞迁移能力在一定程度上可反映食管癌患者发生转移的可能性大小,为食管癌的治疗提供了新的思路和新的方案。
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公开(公告)号:CN113817771B
公开(公告)日:2022-06-21
申请号:CN202111000023.9
申请日:2021-08-27
Applicant: 新乡医学院第三附属医院
Inventor: 李秀敏 , 侯婧晗 , 王伟隆 , 陈贞 , 周孝峰 , 高灿 , 闫子怡 , 吕本洁 , 徐凌钰 , 王晓 , 胡斯佳 , 关瑞瑞 , 赵梓均 , 宋美丽 , 申芳芳 , 刘凤艳
Abstract: 本发明属于生物技术领域,尤其涉及RNF31在调控YAP的泛素化水平中的应用。本发明通过在HEK293T细胞系转染RNF31质粒从而引起RNF31蛋白表达增高,同时转染YAP与泛素质粒,通过免疫共沉淀方式进行泛素化实验,利用western blot检测RNF31的蛋白表达水平和YAP蛋白的泛素化水平。本发明首次发现了RNF31蛋白表达与YAP蛋白的泛素化水平相关,通过检测受试细胞系中RNF31的表达,可以判断受试细胞YAP蛋白的泛素化水平的强弱。同时,通过在受试细胞中转染RNF31质粒,可以调控RNF31蛋白的表达量,从而调控YAP蛋白的泛素化水平。
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公开(公告)号:CN113817771A
公开(公告)日:2021-12-21
申请号:CN202111000023.9
申请日:2021-08-27
Applicant: 新乡医学院第三附属医院
Inventor: 李秀敏 , 侯婧晗 , 王伟隆 , 陈贞 , 周孝峰 , 高灿 , 闫子怡 , 吕本洁 , 徐凌钰 , 王晓 , 胡斯佳 , 关瑞瑞 , 赵梓均 , 宋美丽 , 申芳芳 , 刘凤艳
Abstract: 本发明属于生物技术领域,尤其涉及RNF31在调控YAP的泛素化水平中的应用。本发明通过在HEK293T细胞系转染RNF31质粒从而引起RNF31蛋白表达增高,同时转染YAP与泛素质粒,通过免疫共沉淀方式进行泛素化实验,利用western blot检测RNF31的蛋白表达水平和YAP蛋白的泛素化水平。本发明首次发现了RNF31蛋白表达与YAP蛋白的泛素化水平相关,通过检测受试细胞系中RNF31的表达,可以判断受试细胞YAP蛋白的泛素化水平的强弱。同时,通过在受试细胞中转染RNF31质粒,可以调控RNF31蛋白的表达量,从而调控YAP蛋白的泛素化水平。
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公开(公告)号:CN110551822B
公开(公告)日:2021-05-25
申请号:CN201910963197.1
申请日:2019-10-11
Applicant: 郑州大学第一附属医院 , 新乡医学院
IPC: C12Q1/6886 , C12N15/11
Abstract: 本发明属于肿瘤分子生物学技术领域,尤其涉及一种食管癌细胞系迁移表型的分子标志物及其应用。RNF31是一种E3泛素连接酶,本发明首次发现了RNF31基因表达与食管癌细胞系迁移能力相关,通过检测受试食管癌细胞系中RNF31的表达,可以判断受试食管癌细胞系迁移能力的强弱。本发明中的受试食管癌细胞是分别转染目的基因siRNA和不含目的基因siRNA,利用western blot和q‑PCR技术检测siRNA沉默效率。食管癌细胞系迁移的判断,是通过划痕和和transwell实验可准确反映细胞的迁移能力。根据对受试食管癌细胞系RNF31蛋白和mRNA含量的检测即可快速判断食管癌的迁移表型。
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公开(公告)号:CN110512004B
公开(公告)日:2020-11-24
申请号:CN201910963210.3
申请日:2019-10-11
Applicant: 新乡医学院 , 郑州大学第一附属医院
IPC: C12Q1/6886 , C12N15/11 , G01N33/574 , G01N33/573
Abstract: 本发明属于肿瘤分子生物学技术领域,尤其涉及一种用于检测食管癌细胞迁移和侵袭能力的分子标志物及其应用。本发明运用RT‑PCR、q‑PCR、Western Blot、划痕实验和Transwell小室模型等现代分子生物学技术。成功构建了靶向RBCK1基因干扰siRNA,在细胞水平研究干扰RBCK1基因后对食管癌细胞迁移能力的影响,本发明提供的试剂盒,可用于检测食管癌迁移能力,具有很好的实用性。本发明首次发现了RBCK1基因表达与食管癌细胞系迁移能力有关,食管癌细胞迁移能力在一定程度上可反映食管癌患者发生转移的可能性大小,为食管癌的治疗提供了新的思路和新的方案。
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公开(公告)号:CN110305963A
公开(公告)日:2019-10-08
申请号:CN201910663015.9
申请日:2019-07-22
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12Q1/6886 , G01N33/574 , A61K45/00 , A61P35/00
Abstract: 本发明属于癌症的免疫检测技术领域,尤其涉及一种食管癌分子标志物及其应用。本发明利用组织芯片发现PARK2基因在食管癌患者癌组织和癌旁正常组织中存在差异表达,PARK2在食管癌组织的表达与癌旁组织相比显著降低,并且PARK2的表达与食管癌肿瘤分期负相关,另外,通过比对TCGA数据库交叉验证了以上差异表达。PARK2是RING-BETWEEN-RING(RBR)家族的一种E3泛素连接酶,本发明首次发现了PARK2基因表达与食管癌相关,通过检测受试者食管组织中PARK2的表达,可以判断受试者是否患有食管癌、或者判断受试者是否存在患有食管癌的风险。
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