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公开(公告)号：CN111748564A
公开(公告)日：2020-10-09
申请号：CN202010668042.8
申请日：2020-07-13
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了经过遗传改造的紫色杆菌素生物合成基因簇、重组表达载体、工程菌及其应用，通过对紫色杆菌素生物合成基因簇的核糖体结合位点进行定点突变和密码子缺失突变改造，促进紫色杆菌素合成蛋白的有效翻译，获得生产潜力显著提高的改造基因簇；通过将上述改造基因簇或者含有改造基因簇的重组载体导入到宿主菌，获得了高产紫色杆菌素的工程菌；进一步对工程菌的发酵条件进行了优化并提供紫色杆菌素的分离纯化方法。本发明构建的基因工程菌株不仅能够显著提高紫色杆菌素的产量，且与常规的紫色杆菌素20℃或25℃低温发酵不同，在25-37℃的温度条件下均可高效生产紫色杆菌素代谢产物，解决了发酵过程中的降温成本高的问题，适用于规模化生产。
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公开(公告)号：CN111748564B
公开(公告)日：2022-07-22
申请号：CN202010668042.8
申请日：2020-07-13
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了经过遗传改造的紫色杆菌素生物合成基因簇、重组表达载体、工程菌及其应用，通过对紫色杆菌素生物合成基因簇的核糖体结合位点进行定点突变和密码子缺失突变改造，促进紫色杆菌素合成蛋白的有效翻译，获得生产潜力显著提高的改造基因簇；通过将上述改造基因簇或者含有改造基因簇的重组载体导入到宿主菌，获得了高产紫色杆菌素的工程菌；进一步对工程菌的发酵条件进行了优化并提供紫色杆菌素的分离纯化方法。本发明构建的基因工程菌株不仅能够显著提高紫色杆菌素的产量，且与常规的紫色杆菌素20℃或25℃低温发酵不同，在25‑37℃的温度条件下均可高效生产紫色杆菌素代谢产物，解决了发酵过程中的降温成本高的问题，适用于规模化生产。
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公开(公告)号：CN111850019A
公开(公告)日：2020-10-30
申请号：CN201910331494.4
申请日：2019-04-25
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明提供一种琼胶酶融合酶工程菌株的构建方法，包括以下步骤：S1、质粒提取得到重组质粒Aga0917-pMD19T和CBM13-pUC57-DH5α；S2、PCR扩增得到Aga0917基因片段和CBM13基因片段；S3、Aga0917基因片段和CBM13基因片段的重叠PCR得到Aga0917-CBM13；S4、Aga0917-CBM13的末端加A；S5、末端带A的Aga0917-CBM13与克隆载体进行连接，得到克隆载体溶液；S6、表达载体构建得到琼胶酶融合酶工程菌株。本发明提出的构建方法，具有应用价值，且得到的琼胶酶融合酶工程菌株酶活性高、耐热性能优越、适用范围广，易应用于工业化生产中。
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公开(公告)号：CN111826297A
公开(公告)日：2020-10-27
申请号：CN201910311086.2
申请日：2019-04-18
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明属于产琼胶酶菌株选育领域，尤其是一种产琼胶酶菌株的选育方法，针对现有的产琼胶酶菌株在琼脂平板上会形成凹陷，同时培养基中的有机营养物含量高，蛋白胨为1％，酵母粉为0.5％，无法纯化产琼胶酶菌株的问题，现提出如下方案，其包括以下步骤：S1：制备三种分离培养基，三种分离培养基分别为I型培养基、II型培养基、III型培养基，S2：挑取凹陷中的菌落与1毫升无菌水，混匀，作为种子液；S3：将种子液梯度稀释，稀释成三种浓度的种子液，然后将三种浓度的种子液涂布于三种分离培养基上，本发明所用培养基为寡营养培养基，有机营养物含量低，能够顺利纯化产琼胶酶菌株，同时能够精准控制人工海水加入量。
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