公开(公告)号：CN111850019A

公开(公告)日：2020-10-30

申请号：CN201910331494.4

申请日：2019-04-25

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 王燕 ,  崔彩霞 ,  张玉阳 ,  周晨妍 ,  刘婷威 ,  张瑶

IPC: C12N15/70 ,  C12N15/56 ,  C12N1/21 ,  C12R1/19

Abstract: 本发明提供一种琼胶酶融合酶工程菌株的构建方法，包括以下步骤：S1、质粒提取得到重组质粒Aga0917-pMD19T和CBM13-pUC57-DH5α；S2、PCR扩增得到Aga0917基因片段和CBM13基因片段；S3、Aga0917基因片段和CBM13基因片段的重叠PCR得到Aga0917-CBM13；S4、Aga0917-CBM13的末端加A；S5、末端带A的Aga0917-CBM13与克隆载体进行连接，得到克隆载体溶液；S6、表达载体构建得到琼胶酶融合酶工程菌株。本发明提出的构建方法，具有应用价值，且得到的琼胶酶融合酶工程菌株酶活性高、耐热性能优越、适用范围广，易应用于工业化生产中。

公开(公告)号：CN111826297A

公开(公告)日：2020-10-27

申请号：CN201910311086.2

申请日：2019-04-18

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 王燕 ,  崔彩霞 ,  张玉阳 ,  刘婷威 ,  张瑶

IPC: C12N1/20 ,  C12N1/02 ,  C12N15/70

Abstract: 本发明属于产琼胶酶菌株选育领域，尤其是一种产琼胶酶菌株的选育方法，针对现有的产琼胶酶菌株在琼脂平板上会形成凹陷，同时培养基中的有机营养物含量高，蛋白胨为1％，酵母粉为0.5％，无法纯化产琼胶酶菌株的问题，现提出如下方案，其包括以下步骤：S1：制备三种分离培养基，三种分离培养基分别为I型培养基、II型培养基、III型培养基，S2：挑取凹陷中的菌落与1毫升无菌水，混匀，作为种子液；S3：将种子液梯度稀释，稀释成三种浓度的种子液，然后将三种浓度的种子液涂布于三种分离培养基上，本发明所用培养基为寡营养培养基，有机营养物含量低，能够顺利纯化产琼胶酶菌株，同时能够精准控制人工海水加入量。