公开(公告)号：CN114958914B

公开(公告)日：2023-09-26

申请号：CN202210627448.0

申请日：2022-06-06

Applicant: 新乡医学院 ,  新乡医学院第一附属医院

Inventor： 王小引 ,  王天云 ,  张伟莉 ,  张玺 ,  牛敬媛 ,  李树军 ,  张俊河 ,  贾岩龙 ,  李波

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/67 ,  C12N15/64 ,  C12N15/54

Abstract: 本发明属于基因工程及基因治疗技术领域，具体涉及一种高效人类及哺乳动物细胞附着体表达载体，同时还涉及该附着体表达载体的构建方法和应用。本发明在启动子上游反向插入第一核基质结合区序列，启动子下游正向插入内含子序列，内含子序列下游正向插入第二核基质结合序列，并进一步优选启动子序列为EF‑1α序列、第一核基质结合区序列为MAR X‑29、内含子序列为hCMV内含子序列、第二核基质结合区序列为MAR特征性序列构建形成附着体表达载体。通过实验验证，使用本发明构建的表达载体，宿主细胞采用CHO细胞或人结肠癌细胞HCT116，能显著提高转基因表达水平与表达稳定性，表达的目的蛋白具有生物学功能。

公开(公告)号：CN114958914A

公开(公告)日：2022-08-30

申请号：CN202210627448.0

申请日：2022-06-06

Applicant: 新乡医学院 ,  新乡医学院第一附属医院

Inventor： 王小引 ,  王天云 ,  张伟莉 ,  张玺 ,  牛敬媛 ,  李树军 ,  张俊河 ,  贾岩龙 ,  李波

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/67 ,  C12N15/64 ,  C12N15/54

Abstract: 本发明属于基因工程及基因治疗技术领域，具体涉及一种高效人类及哺乳动物细胞附着体表达载体，同时还涉及该附着体表达载体的构建方法和应用。本发明在启动子上游反向插入第一核基质结合区序列，启动子下游正向插入内含子序列，内含子序列下游正向插入第二核基质结合序列，并进一步优选启动子序列为EF‑1α序列、第一核基质结合区序列为MAR X‑29、内含子序列为hCMV内含子序列、第二核基质结合区序列为MAR特征性序列构建形成附着体表达载体。通过实验验证，使用本发明构建的表达载体，宿主细胞采用CHO细胞或人结肠癌细胞HCT116，能显著提高转基因表达水平与表达稳定性，表达的目的蛋白具有生物学功能。

公开(公告)号：CN114561430B

公开(公告)日：2024-03-26

申请号：CN202210305844.1

申请日：2022-03-25

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 王天云 ,  林艳 ,  米春柳 ,  李波 ,  耿少雷 ,  陈芷涵 ,  孙秋丽 ,  郭潇

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/63 ,  C12N15/64 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明属于重组蛋白表达技术领域，具体涉及人源化细胞瞬时表达载体、表达系统及其应用。本发明构建的表达载体，引入TRE/TAP组成的反式激活蛋白元件，并且TAP作为独立表达框，相比未引入该元件的表达载体，能够成倍提高目的蛋白瞬时表达量；更进一步的，本发明将TRE/TAP组成的反式激活蛋白元件与核基质结合区元件MAR和IRES复配使用，相互之间协同增效，进一步提高目的蛋白的瞬时表达量。由此，本发明提供的表达载体和表达系统能够应用于制备蛋白类药物。

公开(公告)号：CN113621577B

公开(公告)日：2023-03-10

申请号：CN202110893768.6

申请日：2021-08-05

Applicant: 河南普诺易生物制品研究院有限公司 ,  新乡医学院

Inventor： 王天云 ,  林艳 ,  窦媛媛 ,  张俊河 ,  樊振林 ,  曹祥祥 ,  耿少雷 ,  李波

IPC: C12N5/10 ,  C12N5/073 ,  C12N5/071 ,  C07K14/02 ,  C12N15/85 ,  A61K39/29 ,  A61P31/20 ,  A61P1/16

Abstract: 本发明属于基因重组疫苗技术领域，具体涉及人源化HEK293细胞系表达重组蛋白用培养基添加剂、重组乙肝疫苗、表达方法。本发明提供人源化HEK293细胞系表达重组蛋白用培养基添加剂，在转染重组表达载体的HEK293细胞悬浮无血清培养过程中添加丁酸钠和氢化肉桂酸，并优选丁酸钠添加量为1.0~3.0 mol/L，氢化肉桂酸的添加量为0.2~1.0 mol/L，协同增效，提高重组蛋白表达量。试验表明，利用本发明提供的培养基添加剂，低温条件下培养，提高乙肝表面抗原（HBsAg）目的基因在HEK293细胞的表达水平。

公开(公告)号：CN113621577A

公开(公告)日：2021-11-09

申请号：CN202110893768.6

申请日：2021-08-05

Applicant: 河南普诺易生物制品研究院有限公司 ,  新乡医学院

Inventor： 王天云 ,  林艳 ,  窦媛媛 ,  张俊河 ,  樊振林 ,  曹祥祥 ,  耿少雷 ,  李波

IPC: C12N5/10 ,  C12N5/073 ,  C12N5/071 ,  C07K14/02 ,  C12N15/85 ,  A61K39/29 ,  A61P31/20 ,  A61P1/16

Abstract: 本发明属于基因重组疫苗技术领域，具体涉及人源化HEK293细胞系表达重组蛋白用培养基添加剂、重组乙肝疫苗、表达方法。本发明提供人源化HEK293细胞系表达重组蛋白用培养基添加剂，在转染重组表达载体的HEK293细胞悬浮无血清培养过程中添加丁酸钠和氢化肉桂酸，并优选丁酸钠添加量为1.0~3.0 mol/L，氢化肉桂酸的添加量为0.2~1.0 mol/L，协同增效，提高重组蛋白表达量。试验表明，利用本发明提供的培养基添加剂，低温条件下培养，提高乙肝表面抗原（HBsAg）目的基因在HEK293细胞的表达水平。

公开(公告)号：CN114561430A

公开(公告)日：2022-05-31

申请号：CN202210305844.1

申请日：2022-03-25

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 王天云 ,  林艳 ,  米春柳 ,  李波 ,  耿少雷 ,  陈芷涵 ,  孙秋丽 ,  郭潇

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/63 ,  C12N15/64 ,  C12N15/12

Abstract: 本发明属于重组蛋白表达技术领域，具体涉及人源化细胞瞬时表达载体、表达系统及其应用。本发明构建的表达载体，引入TRE/TAP组成的反式激活蛋白元件，并且TAP作为独立表达框，相比未引入该元件的表达载体，能够成倍提高目的蛋白瞬时表达量；更进一步的，本发明将TRE/TAP组成的反式激活蛋白元件与核基质结合区元件MAR和IRES复配使用，相互之间协同增效，进一步提高目的蛋白的瞬时表达量。由此，本发明提供的表达载体和表达系统能够应用于制备蛋白类药物。