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公开(公告)号：CN112592388A
公开(公告)日：2021-04-02
申请号：CN202011476275.4
申请日：2020-12-14
Applicant: 河南普诺易生物制品研究院有限公司 , 新乡医学院
IPC: C07K14/09 , C07K14/095 , C12N15/85 , C07K16/24
Abstract: 本发明涉及一种2A肽、双顺反子表达载体、重组蛋白表达系统及应用。本发明提供了一种2A肽(SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3)，提供了含有所述2A肽编码基因的双顺反子表达载体及其构建方法，并通过构建含有所述2A肽的重组蛋白表达系统，将其应用于重组蛋白的表达，可以实现2个目的基因在哺乳动物细胞的高效表达。试验证明，在同等条件下，与其他2A肽比较，本发明提供的基于E2A和F2A的重组蛋白表达系统能够显著提高哺乳动物细胞重组蛋白的稳定表达水平，可广泛应用于制备各种目的蛋白，特别是抗体的制备。为改善哺乳动物细胞表达系统，进一步提高重组蛋白的表达量、增强细胞株的稳定性、降低生产成本奠定了基础。
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公开(公告)号：CN109468323A
公开(公告)日：2019-03-15
申请号：CN201811394239.6
申请日：2018-11-21
Applicant: 新乡医学院 , 河南普诺易生物制品研究院有限公司
IPC: C12N15/113 , C12N15/85 , C12N15/67 , C12N5/10
Abstract: 本发明涉及一种人工合成的内含子、哺乳动物细胞重组表达载体、哺乳动物宿主细胞、表达方法及其应用，属于生物技术领域。本发明利用人工合成的内含子，构建哺乳动物细胞重组表达载体，可以增强转录产物的稳定性，进而提高外源基因的表达量，降低哺乳动物细胞重组蛋白的生产成本。
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公开(公告)号：CN111304144B
公开(公告)日：2023-04-07
申请号：CN201911207739.9
申请日：2019-11-30
Applicant: 河南普诺易生物制品研究院有限公司 , 新乡医学院
Abstract: 本发明涉及生物制药技术领域，具体涉及一种昆虫细胞培养基及其制备方法。该培养基有效成分包括氨基酸、维生素、无机盐、碳源、脂类物质和功能添加剂；其中功能添加剂包括腐胺、抗坏血酸磷酸酯镁、乙醇胺、次黄嘌呤、酵母提取物、棉籽水解物、丙酸钠、泊洛沙姆188、柠檬酸铁、柠檬酸钠、丙酮酸钠。本发明公开的培养基无血清、无蛋白，能避免添加血清带来的潜在风险及利于下游重组蛋白的纯化；同时培养基不含动物源添加物，适合生物药物的生产；本发明公开的培养基活细胞密度与细胞存活率高，蛋白表达量高，适合重组蛋白和疫苗的生产。
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公开(公告)号：CN111235100B
公开(公告)日：2022-04-29
申请号：CN202010109042.4
申请日：2020-02-21
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12N5/0775
Abstract: 本发明属于细胞生物学领域，具体涉及一种人脐带血间充质干细胞的培养方法。包括以下步骤：将脐带血单个核细胞用第一培养基培养至细胞生长状态稳定，后续改用第二培养基进行培养，所述第一培养基主要由基础培养基、胎牛血清、抗生素和间充质干细胞生长添加物组成，其中胎牛血清体积占比为8‑12％，间充质干细胞生长添加物体积占比为0.1‑0.2％；所述第二培养基主要由基础培养基、胎牛血清、抗生素组成，其中胎牛血清体积占比为8‑12％；所述基础培养基为DMEM/F12培养基。本发明的人脐带血间充质干细胞的培养方法，步骤简单、经济成本较低、培养成功率高，适于获取大量的间充质干细胞以满足相关疾病治疗时的使用量较大的需求。
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公开(公告)号：CN110894487B
公开(公告)日：2022-07-19
申请号：CN201911338744.3
申请日：2019-12-23
Applicant: 新乡医学院 , 河南普诺易生物制品研究院有限公司
IPC: C12N5/071
Abstract: 本发明涉及一种无血清无蛋白CHO细胞培养基及其制备方法、应用，属于CHO细胞培养技术领域。本发明的CHO细胞培养基包含氨基酸、维生素、微量元素、无机盐、脂类、碳水化合物和添加剂，所述脂类包括：亚麻酸0.02‑0.15mg/L、孕酮0.02‑0.15mg/L、亚油酸0.04‑0.24mg/L、胆固醇1‑7.5mg/L和花生四烯酸0.001‑0.008mg/L。培养基中营养成分均衡，尤其是脂类、碳水化合物和添加剂物质充分，在该培养基中CHO细胞生长倍数可高达20.88。在利用CHO细胞表达目的蛋白时，使用前述培养基不仅CHO细胞的生长倍数高，并且CHO细胞中目的蛋白的含量仍然能够达到较高的水平。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN109486859A
公开(公告)日：2019-03-19
申请号：CN201811394238.1
申请日：2018-11-21
Applicant: 新乡医学院 , 河南普诺易生物制品研究院有限公司
Abstract: 本发明涉及一种人工合成的polyA、哺乳动物细胞重组表达载体、哺乳动物宿主细胞、表达方法及应用，属于生物技术领域。本发明polyA可用于哺乳动物细胞重组表达载体，polyA可以通过控制mRNA的稳定性，提高mRNA的翻译效率来增强哺乳动物或者其他来源蛋白质的分泌表达，能有效提高哺乳动物细胞中蛋白质的产量并降低生产成本。
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公开(公告)号：CN116064560A
公开(公告)日：2023-05-05
申请号：CN202211271340.9
申请日：2022-10-18
Applicant: 新乡医学院 , 河南普诺易生物制品研究院有限公司
Abstract: 本发明属于基因工程技术领域，本发明提供了一种提高哺乳动物细胞附着体载体转基因表达水平的方法。本发明方法利用优化后的SAF‑A基因构建辅助基因重组表达载体，先转染宿主细胞，经筛选得到稳定细胞株后，再转染外源基因表达载体，经稳定筛选，宿主细胞可稳定表达目的蛋白。通过实验验证，使用本发明的方法，宿主细胞采用CHO细胞或人结肠癌细胞HCT116，能显著提高转基因表达水平与表达稳定性，表达的目的蛋白具有生物学功能。
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公开(公告)号：CN109468311B
公开(公告)日：2021-08-24
申请号：CN201811427952.6
申请日：2018-11-27
Applicant: 河南普诺易生物制品研究院有限公司 , 新乡医学院
IPC: C12N15/10
Abstract: 本发明涉及一种提取质粒DNA的菌体裂解液、试剂盒及提取质粒DNA的方法，属于生物技术领域。本发明提取质粒DNA的菌体裂解液由裂解缓冲液、溶菌酶、RNase A组成，裂解缓冲液的组成为：每100mL裂解缓冲液中含有1.5～10g蔗糖、0.7～2.2g乙二胺四乙酸二钠、0.3～0.9g三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐、2.7～5.4g NH4Cl、0.1～2.0mL 0.5％的Triton X‑100、0.2～0.6g CaCl2、0.5～8g盐酸胍、0.5～3g异硫氰酸胍，其余量为水。本发明提取质粒DNA的试剂盒，包括上述菌体裂解液、漂洗液和洗脱液。该试剂盒成本低、提取质粒纯度高、适用性好。
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公开(公告)号：CN113201490A
公开(公告)日：2021-08-03
申请号：CN202110579979.2
申请日：2021-05-26
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12N5/0775
Abstract: 本发明涉及一种三联培养基序贯培养人脐带间充质干细胞的方法。本发明提供了三联培养基序贯培养法，该方法的脐带MSCs原代分离培养采用主要由DMEM高糖培养基、胎牛血清、抗生素组成的第一培养基，并在组织块上放置无菌的盖玻片以促进组织块贴壁和间充质干细胞的生长；待第一培养基培养至细胞生长状态稳定，改用主要由DMEM高糖培养基、胎牛血清、抗生素和间充质干细胞生长添加物组成的第二培养基进行传代培养；传代两次后，后续重新换回第一培养基进行培养。试验证明，该方法分离培养的MSCs能够用于再生医学相关研究领域。本发明的方法极大地降低了分离、培养人脐带间充质干细胞的成本，步骤简单、成功率高，适用于人脐带间充质干细胞的大规模培养。
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公开(公告)号：CN110894487A
公开(公告)日：2020-03-20
申请号：CN201911338744.3
申请日：2019-12-23
Applicant: 新乡医学院 , 河南普诺易生物制品研究院有限公司
IPC: C12N5/071
Abstract: 本发明涉及一种无血清无蛋白CHO细胞培养基及其制备方法、应用，属于CHO细胞培养技术领域。本发明的CHO细胞培养基包含氨基酸、维生素、微量元素、无机盐、脂类、碳水化合物和添加剂，所述脂类包括：亚麻酸0.02-0.15mg/L、孕酮0.02-0.15mg/L、亚油酸0.04-0.24mg/L、胆固醇1-7.5mg/L和花生四烯酸0.001-0.008mg/L。培养基中营养成分均衡，尤其是脂类、碳水化合物和添加剂物质充分，在该培养基中CHO细胞生长倍数可高达20.88。在利用CHO细胞表达目的蛋白时，使用前述培养基不仅CHO细胞的生长倍数高，并且CHO细胞中目的蛋白的含量仍然能够达到较高的水平。
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