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公开(公告)号：CN114891829B
公开(公告)日：2023-09-26
申请号：CN202210573172.2
申请日：2022-05-24
Applicant: 新乡医学院 , 河南普诺易生物制品研究院有限公司
Abstract: 本发明属于表达载体领域，具体涉及一种肝特异性游离型表达载体和基因治疗载体及其应用。该肝特异性游离型表达载体使用肝特异性启动子替换骨架游离表达载体pEMM中的EF‑1α启动子，将增强子序列无缝克隆至所述肝特异性启动子序列的上游。本发明提供的肝特异性游离型表达载体，是以pEMM作为基础载体构建，能够显著提高所携带目的基因的表达水平，同等条件下，用增强子修饰的肝特异性启动子的游离表达载体比不含增强子的载体可显著提高目的基因的表达。
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公开(公告)号：CN114891829A
公开(公告)日：2022-08-12
申请号：CN202210573172.2
申请日：2022-05-24
Applicant: 新乡医学院 , 河南普诺易生物制品研究院有限公司
Abstract: 本发明属于表达载体领域，具体涉及一种肝特异性游离型表达载体和基因治疗载体及其应用。该肝特异性游离型表达载体使用肝特异性启动子替换骨架游离表达载体pEMM中的EF‑1α启动子，将增强子序列无缝克隆至所述肝特异性启动子序列的上游。本发明提供的肝特异性游离型表达载体，是以pEMM作为基础载体构建，能够显著提高所携带目的基因的表达水平，同等条件下，用增强子修饰的肝特异性启动子的游离表达载体比不含增强子的载体可显著提高目的基因的表达。
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公开(公告)号：CN112592388A
公开(公告)日：2021-04-02
申请号：CN202011476275.4
申请日：2020-12-14
Applicant: 河南普诺易生物制品研究院有限公司 , 新乡医学院
IPC: C07K14/09 , C07K14/095 , C12N15/85 , C07K16/24
Abstract: 本发明涉及一种2A肽、双顺反子表达载体、重组蛋白表达系统及应用。本发明提供了一种2A肽(SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：3)，提供了含有所述2A肽编码基因的双顺反子表达载体及其构建方法，并通过构建含有所述2A肽的重组蛋白表达系统，将其应用于重组蛋白的表达，可以实现2个目的基因在哺乳动物细胞的高效表达。试验证明，在同等条件下，与其他2A肽比较，本发明提供的基于E2A和F2A的重组蛋白表达系统能够显著提高哺乳动物细胞重组蛋白的稳定表达水平，可广泛应用于制备各种目的蛋白，特别是抗体的制备。为改善哺乳动物细胞表达系统，进一步提高重组蛋白的表达量、增强细胞株的稳定性、降低生产成本奠定了基础。
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公开(公告)号：CN113201490A
公开(公告)日：2021-08-03
申请号：CN202110579979.2
申请日：2021-05-26
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12N5/0775
Abstract: 本发明涉及一种三联培养基序贯培养人脐带间充质干细胞的方法。本发明提供了三联培养基序贯培养法，该方法的脐带MSCs原代分离培养采用主要由DMEM高糖培养基、胎牛血清、抗生素组成的第一培养基，并在组织块上放置无菌的盖玻片以促进组织块贴壁和间充质干细胞的生长；待第一培养基培养至细胞生长状态稳定，改用主要由DMEM高糖培养基、胎牛血清、抗生素和间充质干细胞生长添加物组成的第二培养基进行传代培养；传代两次后，后续重新换回第一培养基进行培养。试验证明，该方法分离培养的MSCs能够用于再生医学相关研究领域。本发明的方法极大地降低了分离、培养人脐带间充质干细胞的成本，步骤简单、成功率高，适用于人脐带间充质干细胞的大规模培养。
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Patent Agency Ranking
公开(公告)号：CN112779289A
公开(公告)日：2021-05-11
申请号：CN202110113130.6
申请日：2021-01-27
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12N15/85 , C12N15/113 , C12N5/10 , C12P21/00
Abstract: 本发明涉及一种人类及哺乳动物细胞表达载体、表达系统及其构建方法和应用。本发明通过在启动子的上游和PolyA的下游插入MAR 1‑68序列，同时，在MAR序列与启动子之间插入一段长度为500bp的间隔子DNA序列，构建获得MAR1‑68‑Spacer‑CMV‑目的基因‑PolyA‑MAR1‑68载体。该载体中Spacer片段为中性DNA序列，不能提高转基因表达水平，从而能够真正地探讨距离效应对转基因表达的影响。试验证明，包含上述表达载体的人类及哺乳动物细胞表达系统能够显著提高所携带的目的基因表达水平。因此，本发明提供的哺乳动物表达载体和表达系统能够克服转基因沉默，促进外源基因在宿主细胞中高水平稳定表达，可用于重组蛋白的生产。
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公开(公告)号：CN111235100B
公开(公告)日：2022-04-29
申请号：CN202010109042.4
申请日：2020-02-21
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12N5/0775
Abstract: 本发明属于细胞生物学领域，具体涉及一种人脐带血间充质干细胞的培养方法。包括以下步骤：将脐带血单个核细胞用第一培养基培养至细胞生长状态稳定，后续改用第二培养基进行培养，所述第一培养基主要由基础培养基、胎牛血清、抗生素和间充质干细胞生长添加物组成，其中胎牛血清体积占比为8‑12％，间充质干细胞生长添加物体积占比为0.1‑0.2％；所述第二培养基主要由基础培养基、胎牛血清、抗生素组成，其中胎牛血清体积占比为8‑12％；所述基础培养基为DMEM/F12培养基。本发明的人脐带血间充质干细胞的培养方法，步骤简单、经济成本较低、培养成功率高，适于获取大量的间充质干细胞以满足相关疾病治疗时的使用量较大的需求。
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公开(公告)号：CN101781662A
公开(公告)日：2010-07-21
申请号：CN201010116202.4
申请日：2010-02-24
Applicant: 新乡医学院
Abstract: 本发明公开了一种人类和哺乳动物细胞游离表达载体。本发明涉及一种DNA。本发明的目的是提供一种安全性能好、效率高的人类和哺乳动物细胞游离表达载体。本发明的技术方案是，所述载体的多克隆位点下游和上游分别含有人源性的MAR和有治疗作用的外源基因DNA片段且只含有真核表达元件的表达载体。本发明用于基因治疗。
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公开(公告)号：CN112321683A
公开(公告)日：2021-02-05
申请号：CN202011060210.1
申请日：2020-09-30
Applicant: 河南普诺易生物制品研究院有限公司 , 新乡医学院
Abstract: 本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种外显子连接蛋白、核酸分子、表达载体、重组蛋白表达系统、应用。本发明公开了一种具有如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的外显子连接蛋白，通过构建含有外显子连接蛋白基因序列的重组蛋白表达系统，将外显子连接蛋白应用于重组蛋白的表达，同等条件下，与不含外显子连接蛋白的细胞系进行比较，能够显著提高重组蛋白的表达量，表达水平提高6～11倍多，降低生产成本。
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公开(公告)号：CN111235100A
公开(公告)日：2020-06-05
申请号：CN202010109042.4
申请日：2020-02-21
Applicant: 新乡医学院
IPC: C12N5/0775
Abstract: 本发明属于细胞生物学领域，具体涉及一种人脐带血间充质干细胞的培养方法。包括以下步骤：将脐带血单个核细胞用第一培养基培养至细胞生长状态稳定，后续改用第二培养基进行培养，所述第一培养基主要由基础培养基、胎牛血清、抗生素和间充质干细胞生长添加物组成，其中胎牛血清体积占比为8-12％，间充质干细胞生长添加物体积占比为0.1-0.2％；所述第二培养基主要由基础培养基、胎牛血清、抗生素组成，其中胎牛血清体积占比为8-12％；所述基础培养基为DMEM/F12培养基。本发明的人脐带血间充质干细胞的培养方法，步骤简单、经济成本较低、培养成功率高，适于获取大量的间充质干细胞以满足相关疾病治疗时的使用量较大的需求。
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