公开(公告)号：CN109468412A

公开(公告)日：2019-03-15

申请号：CN201811534929.7

申请日：2018-12-14

Applicant: 河南普诺易生物制品研究院有限公司 ,  新乡医学院

Inventor： 林重超 ,  王建华 ,  王天云 ,  郭潇 ,  杨献军 ,  王燕芳

IPC: C12Q1/70 ,  C12Q1/686 ,  C12N15/11

Abstract: 本发明涉及一种检测CHO细胞中Vesivirus 2117病毒污染的引物、试剂盒及方法，属于生物医药技术领域。本发明的检测Vesivirus 2117病毒的实时荧光定量PCR引物序列为：正向引物：5′-ACGTTGACGATAGGGGGAGA-3′；反向引物：5′-CTTTGGCAAAGACCCCGTTG-3′；试剂盒还包括阳性质控品和内参管家基因GAPDH引物序列，其引物序列为：正向引物：5′-CCCATGGCAAGTTCAAAGGCA-3′；反向引物：5′-TGGTGAAGACGCCAGTAGATT-3′。本发明的试剂盒具有高灵敏度、高特异性、高效率高的特点，且操作简单，节约时间。

公开(公告)号：CN109628489B

公开(公告)日：2022-09-23

申请号：CN201910012271.1

申请日：2019-01-07

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 林重超 ,  王天云 ,  郭潇 ,  赵春澎 ,  倪天军 ,  林艳 ,  王燕芳

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/67 ,  C12N15/113

Abstract: 本发明涉及一种提高CHO细胞重组蛋白表达水平的方法及其应用，表达载体、表达系统及其制备方法，属于基因工程技术领域。本发明中的方法应用CHO细胞内源miRNAs与3′‑UTR转录区互补结合来对筛选标记基因表达进行负性调节，进而提高目的基因的表达量。将miRNAs与3′‑UTR转录区克隆到筛选标记基因的下游，构建真核表达载体；然后将目的基因克隆到真核表达载体获得重组表达载体，然后将其转染细胞，获得CHO细胞表达系统，实现目的基因的高效表达。本发明的CHO细胞表达系统，可以显著提高目的基因在CHO细胞中的表达水平，实现目的蛋白在CHO细胞的高产量稳定表达。

公开(公告)号：CN109628489A

公开(公告)日：2019-04-16

申请号：CN201910012271.1

申请日：2019-01-07

Applicant: 新乡医学院

Inventor： 林重超 ,  王天云 ,  郭潇 ,  赵春澎 ,  倪天军 ,  林艳 ,  王燕芳

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/65 ,  C12N15/67 ,  C12N15/113

CPC classification number: C12N15/85 ,  C12N15/113 ,  C12N15/65 ,  C12N15/67 ,  C12N2310/141

Abstract: 本发明涉及一种提高CHO细胞重组蛋白表达水平的方法及其应用，表达载体、表达系统及其制备方法，属于基因工程技术领域。本发明中的方法应用CHO细胞内源miRNAs与3′‑UTR转录区互补结合来对筛选标记基因表达进行负性调节，进而提高目的基因的表达量。将miRNAs与3′‑UTR转录区克隆到筛选标记基因的下游，构建真核表达载体；然后将目的基因克隆到真核表达载体获得重组表达载体，然后将其转染细胞，获得CHO细胞表达系统，实现目的基因的高效表达。本发明的CHO细胞表达系统，可以显著提高目的基因在CHO细胞中的表达水平，实现目的蛋白在CHO细胞的高产量稳定表达。