公开(公告)号：KR100818982B1

公开(公告)日：2008-04-04

申请号：KR1020060114786

申请日：2006-11-20

Applicant: 주식회사농심 ,  재단법인서울대학교산학협력재단

Inventor： 이형주 ,  안창원 ,  신동석 ,  정도원 ,  한기선

IPC: C12N15/64 ,  C12N15/63

Abstract: A method for mass-producing a recombinant antihypertensive peptide is provided to be usefully used for producing a peptide having low molecular weight at low cost with high efficiency and use the antihypertensive peptide for a recombinant expression system for foods. A method for preparing a recombinant pEUH40 having a cleavage map depicted in Fig. 2 comprises the steps of: (a) inserting a gene of SEQ ID : NO. 1 into a cloning vector pUC18; (b) after self-ligating the gene of SEQ ID : NO. 1, inserting the self-ligated gene into the recombinant vector obtained from the step(a) to transform E. coli DH5alpha; and (c) after inserting the vector obtained from the step(b) into a vector pET29b, fusing a ubiquitin gene thereinto. A method for mass-producing a recombinant antihypertensive peptide His-His-Leu comprises the steps of: (a) culturing 40 copies of His-His-Leu sequences using a transgenic E.coli KCTC 11004BP including the recombinant pEUH40 plasmid; (b) after centrifuging the culture material, eluting cells therefrom and extracting and purifying a cell eluent with cation exchange chromatography; and (c) after hydrolyzing the purified material with leucine aminopeptidase, isolating His-His-Leu from the hydrolysate through HPLC.

Abstract translation: 提供了大规模生产重组抗高血压肽的方法，可有效地用于高效率地低成本生产低分子量的肽，并使用抗高血压肽作为食品的重组表达系统。 制备具有图1所示切割图的重组pEUH40的方法。 2包括以下步骤：（a）插入SEQ ID NO： 1转化成克隆载体pUC18; （b）在自身连接SEQ ID NO： 1，将自连接基因插入从步骤（a）获得的重组载体中，以转化大肠杆菌DH5α; 和（c）将从步骤（b）获得的载体插入载体pET29b之后，将泛素基因融合在其中。 用于大规模生产重组抗高血压肽His-His-Leu的方法包括以下步骤：（a）使用包含重组pEUH40质粒的转基因大肠杆菌KCTC 11004BP培养40个拷贝的His-His-Leu序列; （b）离心培养物后，从其中洗脱细胞，用阳离子交换色谱提取和纯化细胞洗脱液; 和（c）在用亮氨酸氨基肽酶水解纯化的物质后，通过HPLC从水解产物中分离出His-His-Leu。

公开(公告)号：KR1020050097637A

公开(公告)日：2005-10-10

申请号：KR1020040022824

申请日：2004-04-02

Applicant: 재단법인서울대학교산학협력재단

Inventor： 이형주 ,  김정환 ,  정도원 ,  최연철 ,  이정민

IPC: C12N15/31

Abstract: 본 발명은 유산균으로부터 분리된 신규한 프로모터(promoter)에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 프로모터를 포함하지 않는 프로모터 탐색용 셔틀벡터를 이용하여 유산균 염색체로부터 스크리닝한 신규한 프로모터에 관한 것이다.
본 발명의 프로모터는 유전자 산물을 낮은 비용과 고효율로 발현시키는데 유용하게 사용될 수 있다. 특히, 본 발명의 프로모터는 안정성이 확보된 균으로부터 분리된 것으로서 식품용 발현벡터에 사용할 수 있는 효과가 있다.

公开(公告)号：KR1020050097636A

公开(公告)日：2005-10-10

申请号：KR1020040022823

申请日：2004-04-02

Applicant: 재단법인서울대학교산학협력재단

Inventor： 이형주 ,  김정환 ,  정도원 ,  최연철 ,  이정민

IPC: C12N15/31

Abstract: 본 발명은 유산균으로부터 분리된 신규한 프로모터(promoter)에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 프로모터를 포함하지 않는 프로모터 탐색용 셔틀벡터를 이용하여 유산균 염색체로부터 스크리닝한 신규한 프로모터에 관한 것이다.
본 발명의 프로모터는 유전자 산물을 낮은 비용과 고효율로 발현시키는데 유용하게 사용될 수 있다. 특히, 본 발명의 프로모터는 안정성이 확보된 균으로부터 분리된 것으로서 식품용 발현벡터에 사용할 수 있는 효과가 있다.