公开(公告)号：KR1020100039620A

公开(公告)日：2010-04-16

申请号：KR1020080098659

申请日：2008-10-08

Applicant: 전남대학교산학협력단

Inventor： 강만종 ,  문승주 ,  김혜민 ,  이상미

IPC: C12N15/06 ,  C12N15/12 ,  C12N15/09

CPC classification number: C12N15/8509 ,  A01K2227/108 ,  A01K2267/01 ,  C07K14/50 ,  C12N15/907

Abstract: PURPOSE: A method for producing porcine somatic cells for producing a human basic FGF(hFGF) with a knock-in vector is provided to express the hFGF with high concentration and to ensure stability and excellent physical activity. CONSTITUTION: A method for manufacturing porcine somatic cells in which porcine beta-casein is targeted comprises: a step of transforming porcine somatic cells with porcine beta-casein gene targeting knock-in vector ; a step of culturing the porcine somatic cells to induce homology recombination; and a step of selecting porcine somatic cells in which porcine beta-casein gene is targeted by the homology recombination. A method for transforming porcine comprises: a step of transforming porcine somatic cells with porcine beta-casein gene targeting knock-in vector; a step of culturing porcine somatic cells to induce homology recombination; a step of selecting the porcine somatic cells; a step of removing nucleus of the porcine ovary and introducing the targeted cells to obtain a fertilized egg in which somatic cells are nuclear transplanted; and a step of implanting the fertilized egg.

Abstract translation: 目的：提供用于产生具有敲入载体的人碱性FGF（hFGF）的猪体细胞的生产方法，以高浓度表达hFGF并确保稳定性和优异的身体活动。 构成：猪β-酪蛋白靶向生产猪体细胞的方法包括：用猪β-酪蛋白基因靶向敲入载体转化猪体细胞的步骤; 培养猪体细胞以诱导同源重组的步骤; 以及通过同源重组来选择猪β-酪蛋白基因靶向的猪体细胞的步骤。 一种转化猪的方法包括：用靶向敲入载体的猪β-酪蛋白基因转化猪体细胞的步骤; 培养猪体细胞以诱导同源重组的步骤; 选择猪体细胞的一个步骤; 去除猪卵巢的核并引入目标细胞以获得其中体细胞被移植的受精卵的步骤; 以及植入受精卵的步骤。

公开(公告)号：KR101054264B1

公开(公告)日：2011-08-08

申请号：KR1020080098659

申请日：2008-10-08

Applicant: 전남대학교산학협력단

Inventor： 강만종 ,  문승주 ,  김혜민 ,  이상미

IPC: C12N15/06 ,  C12N15/12 ,  C12N15/09

CPC classification number: C12N15/8509 ,  A01K2227/108 ,  A01K2267/01 ,  C07K14/50 ,  C12N15/907

Abstract: 본 발명은 돼지 베타-카제인(porcine β-casein genomic DNA)을 이용한 넉-인(knock-in)벡터로 생리활성물질(human basic FGF, hFGF)을 생산하기 위한 돼지 체세포의 생산 및 생리활성 물질의 생산 방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는 본 발명은 첫째, 돼지 베타-카제인 유전자 타겟팅 넉-인 벡터로 돼지의 체세포를 형질전환시키는 단계; 둘째, 돼지의 체세포를 배양하여 상동재조합을 유도하는 단계; 셋째, 상동재조합에 의해 돼지 베타-카제인 유전자가 타겟팅된 돼지의 체세포를 선별하는 단계: 넷째, 돼지 난자의 핵을 제거하고 유전자 타겟팅된 세포를 도입하여 체세포 핵이식된 수정란을 제조하는 단계; 및 다섯째, 상기 수정란을 착상시키는 단계를 포함하는 돼지 베타-카제인 유전자가 타겟팅된 돼지의 체세포를 제조하는 방법을 제공하기 위한 것이다.
본 발명은 상기 방법으로 제조된 hFGF 발현 형질전환 돼지는 유선 특이적으로 사람 생리활성물질을 발현하며, 기존의 방법에 비해 매우 높은 농도로 유즙 중에 사람 생리활성물질을 발현하며 또한, 본 발명의 형질전환된 돼지로부터 생산된 hFGF 단백질은 시판되는 동종 단백질이 나타내는 것 이상의 안정성 및 우수한 생리활성을 나타내며, 기존의 hFGF 보다 우수한 생리활성을 갖는 hFGF 단백질을 생산하는데 유용하게 사용될 수 있다.
돼지 베타-카제인, 상동유전자 재조합, 넉-인, human basic FGF(hFGF)