Abstract:
The present invention provides a knock-in vector for producing a therapeutic protein comprises a 5′ end fragment containing 5176 bp promoter, exon 1, and 2 of bovine beta-casein genome DNA composed of polynucleotides having nucleic acid sequences of sequence number 1, as 5′ arm; a gene encoding the therapeutic protein; and exon 3 and 4 of bovine beta-casein genome DNA composed of polynucleotides having nucleic acid sequences written by sequence number 2, as 3′ arm.
Abstract:
본 발명은 돼지 베타-카제인(porcine β-casein genomic DNA)을 이용한 넉-인(knock-in)벡터로 생리활성물질(human basic FGF, hFGF)을 생산하기 위한 돼지 체세포의 생산 및 생리활성 물질의 생산 방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는 본 발명은 첫째, 돼지 베타-카제인 유전자 타겟팅 넉-인 벡터로 돼지의 체세포를 형질전환시키는 단계; 둘째, 돼지의 체세포를 배양하여 상동재조합을 유도하는 단계; 셋째, 상동재조합에 의해 돼지 베타-카제인 유전자가 타겟팅된 돼지의 체세포를 선별하는 단계: 넷째, 돼지 난자의 핵을 제거하고 유전자 타겟팅된 세포를 도입하여 체세포 핵이식된 수정란을 제조하는 단계; 및 다섯째, 상기 수정란을 착상시키는 단계를 포함하는 돼지 베타-카제인 유전자가 타겟팅된 돼지의 체세포를 제조하는 방법을 제공하기 위한 것이다. 본 발명은 상기 방법으로 제조된 hFGF 발현 형질전환 돼지는 유선 특이적으로 사람 생리활성물질을 발현하며, 기존의 방법에 비해 매우 높은 농도로 유즙 중에 사람 생리활성물질을 발현하며 또한, 본 발명의 형질전환된 돼지로부터 생산된 hFGF 단백질은 시판되는 동종 단백질이 나타내는 것 이상의 안정성 및 우수한 생리활성을 나타내며, 기존의 hFGF 보다 우수한 생리활성을 갖는 hFGF 단백질을 생산하는데 유용하게 사용될 수 있다. 돼지 베타-카제인, 상동유전자 재조합, 넉-인, human basic FGF(hFGF)
Abstract:
The present invention relates to a knock-in vector that can target a complement regulatory protein (decay accelerating factor, DAF) gene and a human alpha 1,2-fucosyltransferase (HT) gene in a position of an alpha 1,3-galactosyl transferase (alpha 1,3-GT) gene, a cell transduced with the vector, a fertilized egg that is nuclear transplanted in the cell, a transgenic animal that is knocked out by the vector, and a method for producing the same. The knock-in vector of the present invention can be used to produce a transgenic animal in which hyperacute rejection that occurs in xeno-transplantation is controlled, so that the knock-in vector can be widely used for the production of a transgenic animal that can be used for effective xeno-transplantation.
Abstract translation:本发明提供了用于产生转基因牛外部蛋白质的敲入载体。 所述敲入载体包含基因构建体,并且所述基因构建体包含:i)包含具有由SEQ ID NO:1表示的核酸序列的多核苷酸的5'-臂,其包含β-内含子6和外显子7的一部分 牛基因组DNA编码区; ii)用于编码与对应于框架的β-酪蛋白编码区域连接的治疗性蛋白质的多核苷酸; 和iii)包含具有由SEQ ID NO:2表示的核酸序列的多核苷酸的3'-臂,其包含在牛基因组DNA的β-酪蛋白编码区中具有含有外显子8和外显子9的片段的基因构建体。
Abstract:
본 발명은 치료용 단백질의 대량 생산을 위하여, 5' 아암(arm)으로서, 서열번호 1로 기재되는 핵산서열을 갖는 폴리뉴클레오티드로 구성된 소 베타-카제인 게놈 DNA의 5176 bp 프로모터, 엑손 1 및 2를 포함하는 5' 말단 단편; 치료용 단백질(therapeutic protein)을 암호화하는 유전자; 및 3' 아암으로서, 서열번호 2로 기재되는 핵산서열을 갖는 폴리뉴클레오티드로 구성된 소 베타-카제인 게놈 DNA의 엑손 3 및 엑손 4를 포함하는, 치료용 단백질 생산용 넉-인(knock in) 벡터를 제공한다.
Abstract:
PURPOSE: A method for producing porcine somatic cells for producing a human basic FGF(hFGF) with a knock-in vector is provided to express the hFGF with high concentration and to ensure stability and excellent physical activity. CONSTITUTION: A method for manufacturing porcine somatic cells in which porcine beta-casein is targeted comprises: a step of transforming porcine somatic cells with porcine beta-casein gene targeting knock-in vector ; a step of culturing the porcine somatic cells to induce homology recombination; and a step of selecting porcine somatic cells in which porcine beta-casein gene is targeted by the homology recombination. A method for transforming porcine comprises: a step of transforming porcine somatic cells with porcine beta-casein gene targeting knock-in vector; a step of culturing porcine somatic cells to induce homology recombination; a step of selecting the porcine somatic cells; a step of removing nucleus of the porcine ovary and introducing the targeted cells to obtain a fertilized egg in which somatic cells are nuclear transplanted; and a step of implanting the fertilized egg.