公开(公告)号：KR101054264B1

公开(公告)日：2011-08-08

申请号：KR1020080098659

申请日：2008-10-08

Applicant: 전남대학교산학협력단

Inventor： 강만종 ,  문승주 ,  김혜민 ,  이상미

IPC: C12N15/06 ,  C12N15/12 ,  C12N15/09

CPC classification number: C12N15/8509 ,  A01K2227/108 ,  A01K2267/01 ,  C07K14/50 ,  C12N15/907

Abstract: 본 발명은 돼지 베타-카제인(porcine β-casein genomic DNA)을 이용한 넉-인(knock-in)벡터로 생리활성물질(human basic FGF, hFGF)을 생산하기 위한 돼지 체세포의 생산 및 생리활성 물질의 생산 방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는 본 발명은 첫째, 돼지 베타-카제인 유전자 타겟팅 넉-인 벡터로 돼지의 체세포를 형질전환시키는 단계; 둘째, 돼지의 체세포를 배양하여 상동재조합을 유도하는 단계; 셋째, 상동재조합에 의해 돼지 베타-카제인 유전자가 타겟팅된 돼지의 체세포를 선별하는 단계: 넷째, 돼지 난자의 핵을 제거하고 유전자 타겟팅된 세포를 도입하여 체세포 핵이식된 수정란을 제조하는 단계; 및 다섯째, 상기 수정란을 착상시키는 단계를 포함하는 돼지 베타-카제인 유전자가 타겟팅된 돼지의 체세포를 제조하는 방법을 제공하기 위한 것이다.
본 발명은 상기 방법으로 제조된 hFGF 발현 형질전환 돼지는 유선 특이적으로 사람 생리활성물질을 발현하며, 기존의 방법에 비해 매우 높은 농도로 유즙 중에 사람 생리활성물질을 발현하며 또한, 본 발명의 형질전환된 돼지로부터 생산된 hFGF 단백질은 시판되는 동종 단백질이 나타내는 것 이상의 안정성 및 우수한 생리활성을 나타내며, 기존의 hFGF 보다 우수한 생리활성을 갖는 hFGF 단백질을 생산하는데 유용하게 사용될 수 있다.
돼지 베타-카제인, 상동유전자 재조합, 넉-인, human basic FGF(hFGF)

公开(公告)号：KR1020140052093A

公开(公告)日：2014-05-07

申请号：KR1020120108343

申请日：2012-09-27

Applicant: 전남대학교산학협력단 ,  대한민국(농촌진흥청장)

Inventor： 강만종 ,  오건봉 ,  김지우 ,  이상미 ,  김혜민 ,  황성수 ,  임기순 ,  곽태욱 ,  양병철 ,  김경운 ,  박진기

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/54 ,  A01K67/027

Abstract: The present invention relates to a knock-in vector that can target a complement regulatory protein (decay accelerating factor, DAF) gene and a human alpha 1,2-fucosyltransferase (HT) gene in a position of an alpha 1,3-galactosyl transferase (alpha 1,3-GT) gene, a cell transduced with the vector, a fertilized egg that is nuclear transplanted in the cell, a transgenic animal that is knocked out by the vector, and a method for producing the same. The knock-in vector of the present invention can be used to produce a transgenic animal in which hyperacute rejection that occurs in xeno-transplantation is controlled, so that the knock-in vector can be widely used for the production of a transgenic animal that can be used for effective xeno-transplantation.

Abstract translation: 本发明涉及可以靶向α1,3-半乳糖基转移酶位置的补体调节蛋白（衰变加速因子，DAF）基因和人α1,2-岩藻糖基转移酶（HT）基因的敲入载体 （α1T-GT）基因，用载体转导的细胞，被移植到细胞中的受精卵，被载体敲除的转基因动物及其制备方法。 本发明的敲入载体可用于产生其中控制异种移植中发生超急性排斥反应的转基因动物，使得敲入载体可广泛用于生产转基因动物，其可以 用于有效的异种移植。

公开(公告)号：KR1020100039620A

公开(公告)日：2010-04-16

申请号：KR1020080098659

申请日：2008-10-08

Applicant: 전남대학교산학협력단

Inventor： 강만종 ,  문승주 ,  김혜민 ,  이상미

IPC: C12N15/06 ,  C12N15/12 ,  C12N15/09

CPC classification number: C12N15/8509 ,  A01K2227/108 ,  A01K2267/01 ,  C07K14/50 ,  C12N15/907

Abstract: PURPOSE: A method for producing porcine somatic cells for producing a human basic FGF(hFGF) with a knock-in vector is provided to express the hFGF with high concentration and to ensure stability and excellent physical activity. CONSTITUTION: A method for manufacturing porcine somatic cells in which porcine beta-casein is targeted comprises: a step of transforming porcine somatic cells with porcine beta-casein gene targeting knock-in vector ; a step of culturing the porcine somatic cells to induce homology recombination; and a step of selecting porcine somatic cells in which porcine beta-casein gene is targeted by the homology recombination. A method for transforming porcine comprises: a step of transforming porcine somatic cells with porcine beta-casein gene targeting knock-in vector; a step of culturing porcine somatic cells to induce homology recombination; a step of selecting the porcine somatic cells; a step of removing nucleus of the porcine ovary and introducing the targeted cells to obtain a fertilized egg in which somatic cells are nuclear transplanted; and a step of implanting the fertilized egg.

Abstract translation: 目的：提供用于产生具有敲入载体的人碱性FGF（hFGF）的猪体细胞的生产方法，以高浓度表达hFGF并确保稳定性和优异的身体活动。 构成：猪β-酪蛋白靶向生产猪体细胞的方法包括：用猪β-酪蛋白基因靶向敲入载体转化猪体细胞的步骤; 培养猪体细胞以诱导同源重组的步骤; 以及通过同源重组来选择猪β-酪蛋白基因靶向的猪体细胞的步骤。 一种转化猪的方法包括：用靶向敲入载体的猪β-酪蛋白基因转化猪体细胞的步骤; 培养猪体细胞以诱导同源重组的步骤; 选择猪体细胞的一个步骤; 去除猪卵巢的核并引入目标细胞以获得其中体细胞被移植的受精卵的步骤; 以及植入受精卵的步骤。

公开(公告)号：KR101435635B1

公开(公告)日：2014-08-29

申请号：KR1020120108343

申请日：2012-09-27

Applicant: 전남대학교산학협력단 ,  대한민국(농촌진흥청장)

Inventor： 강만종 ,  오건봉 ,  김지우 ,  이상미 ,  김혜민 ,  황성수 ,  임기순 ,  곽태욱 ,  양병철 ,  김경운 ,  박진기

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/54 ,  A01K67/027

Abstract: 알파 1,3-갈락토실트랜스퍼라아제(α1,3-galactosyl transferase, α1,3-GT) 유전자의 위치에 보체 조절 단백질(decay accelerating factor, DAF) 유전자와 인간의 알파 1,2-푸코실트랜스퍼라아제(human α1,2-fucosyltransferase, HT) 유전자를 적중시킬 수 있는 넉인 벡터, 상기 벡터가 도입된 세포, 상기 세포로 핵이식된 수정란, 상기 벡터에 의해 넉 아웃된 형질전환 동물, 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명의 넉인 벡터는 이종장기이식에서 발생하는 초급성 거부반응이 억제된 형질전환 동물의 제조에 이용될 수 있으므로, 보다 효율적인 이종장기이식에 사용될 수 있는 형질전환 동물의 생산에 널리 활용될 수 있을 것이다.

公开(公告)号：KR101360248B1

公开(公告)日：2014-02-12

申请号：KR1020120111074

申请日：2012-10-08

Applicant: 전남대학교산학협력단

Inventor： 강만종 ,  김지우 ,  이상미 ,  박효영 ,  김영지

IPC: C12N15/63 ,  C12N15/11 ,  C12N15/85

Abstract: The present invention provides a transgenic animal produced by using a recombinant expression vector which includes: a promoter for inducing a fat cell specific expression for researching a function of PEN2 genes in obesity and metabolic syndrome; and presenilin enhancer 2 genes connected to the promotor to be operated.

Abstract translation: 本发明提供一种通过使用重组表达载体产生的转基因动物，其包括：用于诱导脂肪细胞特异性表达的启动子，用于研究肥胖和代谢综合征中PEN2基因的功能; 和早老素增强子2基因连接到待启动启动子。

公开(公告)号：KR100952960B1

公开(公告)日：2010-04-15

申请号：KR1020070141992

申请日：2007-12-31

Applicant: 전남대학교산학협력단

Inventor： 강만종 ,  김혜민 ,  이상미 ,  박효영

IPC: C12N15/64 ,  C12N15/09 ,  C12N15/12

Abstract: 본 발명은 돼지 β-카제인 게놈 DNA(porcine β-casein genomic DNA)를 이용하여 생리활성물질을 생산하기 위한 넉-인(knock-in) 벡터 및 이를 이용한 생리활성물질의 생산방법에 관한 것으로서, 돼지의 유즙으로부터 유용한 생리활성물질, 예를 들어 사람 염기성 섬유아세포 성장인자(bFGF; basic Fibroblast Growth Factor), 녹색형광단백질(GFP; Green Fluorescent Protein) 등을 보다 효율적이고도 안정적으로 발현 생산할 수 있다.
돼지 β-카제인 게놈 DNA, 넉-인 벡터, bFGF, GFP, 유전자 타켓팅, 유선 특이적 발현

Abstract translation: 提供用于产生生物活性物质的敲入载体，以有效和稳定地从猪牛奶中表达bFGF（碱性成纤维细胞生长因子）和GFP（绿色荧光蛋白）。 用于生产生物活性物质的敲入载体包含5'末端片段，编码生物活性物质的基因和3'末端片段。 5'末端片段是5'臂，包含2.65kb的启动子，一个轴突和一个内含子。 3'末端片段是3'臂，并且包含猪β-酪蛋白基因组DNA的轴突5,6和7。 核定位信号（NLS）另外连接到5'端。 敲入载体包含阳性选择标记和阴性可选择标记。 生物活性物质是碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）或绿色荧光蛋白（GFP）。

公开(公告)号：KR1020090073921A

公开(公告)日：2009-07-03

申请号：KR1020070141992

申请日：2007-12-31

Applicant: 전남대학교산학협력단

Inventor： 강만종 ,  김혜민 ,  이상미 ,  박효영

IPC: C12N15/64 ,  C12N15/09 ,  C12N15/12

Abstract: A knock-in vector for producing a bioactive substance is provided to efficiently and stably express bFGF (basic Fibroblast Growth Factor) and GFP (Green Fluorescent Protein) from porcine milk. A knock-in vector for producing a bioactive substance comprises 5' end fragment, gene coding the bioactive substance, and 3' end fragment. The 5' end fragment is 5' arm and comprises 2.65kb of promoter, one axon and one intron. The 3' end fragment is 3' arm, and comprises an axon 5, 6, and 7 of porcine beta-casein genome DNA. A nuclear localization signal (NLS) is additionally connected to the 5' end. The knock-in vector comprises a positive selectable marker and negative selectable marker. The bioactive substance is basic fibroblast growth factor (bFGF) or green fluorescent protein (GFP).

Abstract translation: 提供用于产生生物活性物质的敲入载体，以有效和稳定地从猪牛奶中表达bFGF（碱性成纤维细胞生长因子）和GFP（绿色荧光蛋白）。 用于生产生物活性物质的敲入载体包含5'末端片段，编码生物活性物质的基因和3'末端片段。 5'末端片段是5'臂，包含2.65kb的启动子，一个轴突和一个内含子。 3'末端片段是3'臂，并且包含猪β-酪蛋白基因组DNA的轴突5,6和7。 核定位信号（NLS）另外连接到5'端。 敲入载体包含阳性选择标记和阴性可选择标记。 生物活性物质是碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）或绿色荧光蛋白（GFP）。