무세포 단백질 합성 시스템을 이용한 아미노산의 정량 방법

    公开(公告)号:WO2019022467A1

    公开(公告)日:2019-01-31

    申请号:PCT/KR2018/008343

    申请日:2018-07-24

    Abstract: 본 발명은 무세포 단백질 합성 시스템을 이용한 아미노산의 정량 방법에 관한 것으로, 구체적으로 (a) 목적 아미노산이 포함되지 않은 무세포 단백질 합성 반응 혼합물을 준비하는 단계; (b) 상기 무세포 단백질 합성 반응 혼합물에 목적 아미노산이 포함된 분석 시료를 혼합하여 무세포 단백질 합성을 수행하는 단계; (c) 상기 합성된 단백질의 신호를 측정하는 단계; 및 (d) 상기 측정된 신호의 세기를 표준 시료를 이용하여 제작한, 단백질의 신호에 따른 각 아미노산에 대한 표준 농도 곡선과 비교하여 목적 아미노산의 농도를 산출하는 단계를 포함하는 아미노산의 정량 방법, 상기 정량 방법을 이용하는 아미노산 대사 관련 질환의 진단을 위한 정보의 제공 방법, 아미노산 대사 관련 질환의 예방 또는 치료 물질의 스크리닝 방법, 및 트랜스아미나제 기질의 스크리닝 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 아미노산의 정량 방법은 저렴한 비용으로 짧은 시간에 아미노산을 정량할 수 있으므로, 다양한 산업에서 유용하게 활용될 수 있다.

    효소를 이용하여 pH를 조절하는 무세포 단백질 합성 방법
    2.
    发明申请
    효소를 이용하여 pH를 조절하는 무세포 단백질 합성 방법 审中-公开
    在使用酶处理PH时合成无细胞蛋白的方法

    公开(公告)号:WO2015190857A1

    公开(公告)日:2015-12-17

    申请号:PCT/KR2015/005910

    申请日:2015-06-12

    CPC classification number: G01N33/84 C07K1/02 C12P21/02 C12Y401/01 G01N33/6845

    Abstract: 본 발명은 효소를 이용하여 pH를 조절하는 것을 특징으로 하는 무세포 단백질 합성 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 아미노산 탈카르복실화 효소를 이용하여 ATP의 재생 시 생성되는 수소이온을 제거함으로써, pH를 조절하는 것을 특징으로 하는 무세포 단백질 합성 방법에 관한 것이다. 본 발명의 무세포 단백질 합성 방법은 단백질의 발현량을 향상시킬 뿐만 아니라 발현된 단백질의 분리정제 없이 바로 활성분석에 활용할 수 있는 이점이 있다.

    Abstract translation: 本发明涉及一种合成无细胞蛋白的方法,其特征在于使用酶调节pH,更具体地说,涉及合成无细胞蛋白的方法,其特征在于通过使用氨基酸脱羧酶调节pH以除去氢 在ATP再生时产生的离子。 本发明的无细胞蛋白质的合成方法不仅能提高蛋白质的表达水平,而且在活性分析中立即被利用,而不需要分离和纯化表达的蛋白质。

    단일 용기 내에서 합성된 전사체 또는 단백질과 타겟 세포와의 상호작용을 분석하는 방법
    4.
    发明授权
    단일 용기 내에서 합성된 전사체 또는 단백질과 타겟 세포와의 상호작용을 분석하는 방법 有权
    用于分析目标细胞与在单个容器中合成的转录物或蛋白质之间的相互作用的方法

    公开(公告)号:KR101644906B1

    公开(公告)日:2016-08-02

    申请号:KR1020160062535

    申请日:2016-05-23

    Inventor: 김동명

    CPC classification number: G01N33/5005 C12Q1/02 C12Q1/68 G01N33/5097 G01N33/68

    Abstract: 본발명은살아있는타겟세포; 및세포외() 전사체또는단백질생합성을위한반응혼합물;을포함하는단일용기내에주형유전자를첨가하여전사체또는단백질을발현시키고, 상기발현된전사체또는단백질과상기타겟세포의반응을유도하는단계; 및상기전사체또는단백질과타겟세포의반응정도를확인하는단계;를포함하는전사체또는단백질과타겟세포와의상호작용을분석하는방법에관한것이다. 즉, 본발명은전사체또는단백질의세포외 발현과발현된이들이타겟세포와의상호작용까지하나의용기내에서원스톱으로이루어지는방법이므로, 간편하면서도신속한분석이가능하므로, 유효전사체또는단백질등을선별하는스크리닝에유용하게사용될수 있는방법이다.

    Abstract translation: 本发明涉及一种用于分析靶细胞与转录组或蛋白质之间的相互作用的方法,包括以下步骤:通过将模板基因加入到包含活细胞靶的单个容器中来表达转录组或蛋白质; 以及用于离体转录组或蛋白质的生物合成的反应混合物,以及诱导所述表达的转录组或蛋白质与靶细胞之间的反应; 并检查转录组或蛋白质与靶细胞之间的反应程度。 本发明能够使转录组或蛋白质的体外表达以及表达的转录组或蛋白质与目标细胞之间的相互作用在一个容器中立即进行,从而使得能够容易且快速地进行分析。 因此,本发明可以用于选择有效的转录组,蛋白质等的筛选。

    효소를 이용하여 pH를 조절하는 무세포 단백질 합성 방법
    6.
    发明公开
    효소를 이용하여 pH를 조절하는 무세포 단백질 합성 방법 有权
    无细胞蛋白合成方法调节pH与酶

    公开(公告)号:KR1020150142638A

    公开(公告)日:2015-12-22

    申请号:KR1020150083116

    申请日:2015-06-12

    CPC classification number: G01N33/84 C07K1/02 C12P21/02 C12Y401/01 G01N33/6845

    Abstract: 본발명은효소를이용하여 pH를조절하는것을특징으로하는무세포단백질합성방법에관한것으로, 더욱상세하게는아미노산탈카르복실화효소를이용하여 ATP의재생시 생성되는수소이온을제거함으로써, pH를조절하는것을특징으로하는무세포단백질합성방법에관한것이다. 본발명의무세포단백질합성방법은단백질의발현량을향상시킬뿐만아니라발현된단백질의분리정제없이바로활성분석에활용할수 있는이점이있다.

    Abstract translation: 本发明涉及一种合成无细胞蛋白质的方法,该蛋白质能够使用酶调节pH,更具体地说,涉及一种合成无细胞蛋白质的方法,该方法能够通过消除在三磷酸腺苷的再生过程中产生的氢离子来调节pH, ATP)通过氨基酸脱羧酶。 本发明的合成无细胞蛋白的方法不仅可以增加蛋白质的表达,而且还可以直接应用于活性测定中,而不需要分离和纯化表达的蛋白质。

    유전자가 접합된 마이크로비드 및 겔 매트릭스를 이용한 무세포 단백질 발현 및 동소 고정화 방법
    7.
    发明授权
    유전자가 접합된 마이크로비드 및 겔 매트릭스를 이용한 무세포 단백질 발현 및 동소 고정화 방법 有权
    使用基因共轭微珠和凝胶基质进行无细胞蛋白表达和原位固定的方法

    公开(公告)号:KR101506596B1

    公开(公告)日:2015-03-27

    申请号:KR1020130011153

    申请日:2013-01-31

    Inventor: 김동명 이경호

    Abstract: 본 발명은 타겟 유전자 주형이 접합된 제 1 포획체 및 Ni-NTA(nitrilotriacetic acid)가 접합된 제 2 포획체가 결합된 마이크로비드가 담지된 하이드로 겔을 포함하는 동소 고정(
    in

    situ ) 단백질 합성용 겔-매트릭스, 이의 제조방법, 상기 제조방법에 따른 단백질 동소 고정 어레이 및 이를 이용한 단백질의 검출 또는 분석방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 겔-매트릭스는 하나 또는 다종의 유전자를 단백질로 빠르게 합성할 뿐만 아니라, 복잡한 분리정제 과정을 필요로 하지 않는 특징이 있다. 또한, 단백질의 3차원적 구조를 유지할 수 있으므로, 항원항체 반응 등 단백질 검출 및 분석에서 유용하게 사용될 수 있는 것이다. 아울러, 다종의 유전자 접합이 가능하므로, 동시에 다양한 단백질을 합성할 수 있는 특징이 있으므로 단백질 개량기술, 생체 분자합성, 분자진단 및 합성 생물학 분야 등 단백질 관련 연구 및 산업분야에 유용하게 사용될 수 있다.

    목적하는 단백질 발현 수준을 제공하는 초기 코돈의발굴방법, 및 이를 이용한 재조합 단백질의 발현 조절 방법및 생산 방법
    9.
    发明授权
    목적하는 단백질 발현 수준을 제공하는 초기 코돈의발굴방법, 및 이를 이용한 재조합 단백질의 발현 조절 방법및 생산 방법 有权
    用于筛选提供所需蛋白质表达水平的初始密码子的方法,以及用于调节重组蛋白质的表达和产生的方法

    公开(公告)号:KR100961565B1

    公开(公告)日:2010-06-07

    申请号:KR1020080022217

    申请日:2008-03-10

    CPC classification number: C12N15/67 C12N15/102

    Abstract: 본 발명은 유전자의 초기 코돈(initial codon), 즉 +2 내지 +13 코돈 중 하나 이상, 특히 +2 및 +3 코돈을 무작위로 변화시킨 후 이들을 세포 내로 도입하여 개별 유전자로 분리하고 콜로니 PCR에 의해 증폭한 후, 무세포 단백질 합성 시스템을 이용하여 각각의 유전자를 단백질로 발현시킴으로써, 목적하는 단백질 발현 수준을 제공하는 초기 코돈을 발굴하는 방법, 및 이를 이용한 재조합 단백질의 발현 조절 방법 및 생산 방법에 관한 것으로서, 단백질 생산에 있어 체계적이고 정확한 조절 수단이 될 수 있으며, 활성 단백질을 원하는 수준으로 고속으로 발현할 수 있다.
    역단백질체학, 리버스 프로테오믹스, 초기 코돈, 고속 단백질 발현, 무세포 단백질 합성

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