公开(公告)号：KR100320784B1

公开(公告)日：2002-05-13

申请号：KR1019980037413

申请日：1998-09-10

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 신용철 ,  반재구 ,  염도영

IPC: C12N15/53

Abstract: 본 발명은 어위니아 허비콜라(Erwinia herbicola) 균주로부터 분리한 세포막결합 2-케토-디-글루코네이트 탈수소효소(2-keto-D-gluconate dehydrogenase) 유전자 염기서열 및 이 유전자를 세포내 대사과정이 없는 다른 균주에 도입하여 배양하므로써 재조합 2-케토-디-글루코네이트 탈수소효소에 의해 2-케토-디-글루코네이트(2-keto-D-gluconate)를 2,5-다이케토-디-글루코네이트(2,5-diketo-D-gluconate)로 전환하는 방법에 관한 것으로 상기 어위니아 허비콜라 ATCC 08111 균주로부터 세포막결합 2-케토-디-글루코네이트 탈수소효소 유전자를 클로닝 및 서브클로닝하여 세포막결합 2-케토-디-글루코네이트 탈수소효소 유전자 염기서열을 결정한 후 이 유전자가 삽입된 재조합 플라스미드 pKI111를 대장균에 도입하므로써 대장균을 형질전환시킨 후 배양하여 형질전환된 대장균내에서 세� �막결합 2-케토-디-글루코네이트 탈수소효소 유전자를 발현시키므로써 재조합 세포막결합 2-케토-디-글루코네이트 탈수소효소 활성에 의해 2-케토-디-글루코네이트를 2,5-다이케토-디-글루코네이트로 세포내 대사분해 없이 신속하게 전환할 수 있는 뛰어난 효과가 있다.

公开(公告)号：KR100033511B1

公开(公告)日：1990-06-04

申请号：KR1019860003766

申请日：1986-05-14

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 변시명 ,  이상열 ,  신용철

IPC: C09B61/00

公开(公告)号：KR1019900001330B1

公开(公告)日：1990-03-08

申请号：KR1019860003766

申请日：1986-05-14

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 변시명 ,  이상열 ,  신용철

IPC: C09B61/00

Abstract: An extraction method of edible red pigment from cockscomb (Celosia cristata) is presented. Thus, cockscomb is dried at cold and dark place, crushed by mortar, and preserved at -70oC in a sealed bottle. The material (20g) is treated with 500-1000 ml of a solvent containing water, ethanol, methanol, and 0.1-5% of HCl to extract the pigment of cockscomb. The pigment is loaded on a preparative agarose gel electrophoresis (0.1M Na-citrate buffer, ph 4.5; 5mA/cm; 5 hrs). After the electrophoresis, the red pigment portion is cut, eluted with distilled water, and centrifuged at 10,000rpm for 30 min to give a pure red pigment.

Abstract translation: 提出了鸡冠（Celosia cristata）食用红色素的提取方法。 因此，鸡胸肉在寒冷和黑暗的地方干燥，用砂浆粉碎，并在-70oC的密封瓶中保存。 用500-1000ml含有水，乙醇，甲醇和0.1-5％HCl的溶剂处理材料（20g）以提取鸡冠的颜料。 将颜料加载在制备型琼脂糖凝胶电泳（0.1M柠檬酸钠缓冲液，pH 4.5; 5mA / cm; 5小时）上。 电泳后，切割红色颜料部分，用蒸馏水洗脱，以10,000rpm离心30分钟，得到纯红色素。

公开(公告)号：KR1020000019366A

公开(公告)日：2000-04-06

申请号：KR1019980037413

申请日：1998-09-10

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 신용철 ,  반재구 ,  염도영

IPC: C12N15/53

CPC classification number: C12N9/0004 ,  C07K14/24 ,  C12N15/70

Abstract: PURPOSE: Nucleotide sequence of membrane bound 2-keto-D-gluconate dehydrogenase gene from Erwinia herbicola is determined and used for bio transformation of 2-keto-D-gluconate into 2,5-diketo-D-gluconate. 2,5-diketo-D-gluconate is an intermediate to produce vitamin C and pharmaceutics CONSTITUTION: Nucleotide sequence of membrane bound 2-keto-D-glaciate dehydrogenate is determined and bio transformation of 2-keto-D-gluconate into 2,5-diketo-D-gluconate is achieved by the recombinant enzyme introduced into other bacteria lacking of cytoplasm metabolic pathway of it. Membrane-bound 2-keto-D-gluconate dehydrogenase gene from Erwinia herbicola ATCC 08111 is isolated from cosmid library and sub cloned into PSTV28 for sequencing. The 2-keto-D-gluconate dehydrogenase gene is cloned into pKI111 and transformed into E. coli. The recombinant E.coli is cultured in LB media containing 2-keto-D-gluconate for 24hrs. Bio transformation takes place at per plasma of E.coli and conversion reaction is very fast.

Abstract translation: 目的：确定来自欧文氏菌除草剂的膜结合的2-酮-D-葡萄糖酸脱氢酶基因的核苷酸序列，并用于将2-酮-D-葡萄糖酸盐生物转化为2,5-二酮-D-葡萄糖酸盐。 2,5-diketo-D-葡萄糖酸盐是生产维生素C和药物的中间体构成：测定膜结合的2-酮-D-冰醋酸脱氢酶的核苷酸序列，并将2-酮-D-葡萄糖酸盐的生物转化为2,5 通过将重组酶引入缺乏其细胞质代谢途径的其他细菌中实现D-二酮-D-葡萄糖酸盐。 从柯氏假丝酵母ATCC 08111的膜结合的2-酮-D-葡萄糖酸脱氢酶基因从粘粒文库中分离，并将其亚克隆到PSTV28进行测序。 将2-酮-D-葡萄糖酸脱氢酶基因克隆到pKI111中并转化到大肠杆菌中。 将重组大肠杆菌在含有2-酮-D-葡萄糖酸盐的LB培养基中培养24小时。 生物转化发生在大肠杆菌的每个血浆，转化反应非常快。