公开(公告)号：KR100320269B1

公开(公告)日：2002-04-22

申请号：KR1019980039404

申请日：1998-09-23

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 염도영 ,  이봉용 ,  함대현 ,  반재구

IPC: C12N15/53

Abstract: 본 발명은 신규한 대장균 유래 2-케토알도네이트 환원효소(2-ketoaldonate reductase)의 유전자 염기서열을 결정하고 이들 효소들의 유전자를 결손시켜 포도당 대사에 의한 비타민 C 제조시 중간산물의 세포내 대사를 저해하여 고수율로 비타민 C 전구체인 2-케토-엘-글로네이트(2-keto-L-gulonate) 생산에 관한 것으로 대장균으로부터 포스포그라이세레이트 탈수소효소(phosphoglycerate dehydrogenase)및 하이드록시피루베이트 환원효소(hydropyruvate reductase)와 유사성을 보이는
yiaE 유전자를 PCR 클로닝하고 클로닝한
yiaE 유전자의 효소 단백질 산물의 기질 특이성을 조사하여
yiaE 유전자가 2-케토알도네이트 환원효소를 코딩하는 유전자임을 검증하고 이 유전자의 염기서열을 결정한 후 상기 검증한 2-케토알도네이트 환원효소를 코딩하는
yiaE 유전자를 결손시킨 다음 대장균에 � ��입하여 재조합 대장균내에서 발현되는 2-케토알도네이트 환원효소 활성을 측정한 결과,
yiaE 유전자가 결손된 2-케토알도네이트 환원효소는 대장균내 생물전환에 의한 2-케토-엘-글로네이트의 생산시에 중간산물인 2-케토-디-글루코네이트, 2,5-다이케토-디-글루코네이트 및 최종산물인 2-케토-엘-글로네이트의 세포내 대사를 방지하여 비타민 C 전구체인 2-케토-엘-글로네이트의 생산수율을 향상시키는 뛰어난 효과가 있다.

公开(公告)号：KR1020000020687A

公开(公告)日：2000-04-15

申请号：KR1019980039404

申请日：1998-09-23

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 염도영 ,  이봉용 ,  함대현 ,  반재구

IPC: C12N15/53

CPC classification number: C12N9/0004 ,  C07K14/24 ,  C12N15/70

Abstract: PURPOSE: A yiaE gene that is a gene for 2-ketoaldonate reductase is defected to prevent metabolism of 2-keto-D-gluconate, 2,5-diketo-D-gluconate and 2-keto-L-glonate produced in production of 2-keto-L-glonate by transformation in coli, thereby production yield of 2-keto-L-glonate as a precursor of vitamin C is enhanced. CONSTITUTION: The yiaE gene codes a 2-ketoaldonate reductase gene, which is originated from E. coli. The yiaE gene is inserted into a recombinant plasmid pHD2. The recombinant plasmid pHD2 with the yiaE gene inserted thereinto is transformed in a coliform DH5alpha/pHD2 (KCTC 0507BP). In the production of 2-keto-L-glonate as a precursor of vitamin C from gluconate by glucose metabolism, the 2-ketoaldonate reductive defective gene is introduced to a host cell to express a glucose reductive in a membrane-bound recombinant strain.

Abstract translation: 目的：作为2-酮戊二醛还原酶基因的yiaE基因被缺陷，以防止2-酮-D-葡萄糖酸盐，2,5-二酮-D-葡萄糖酸盐和2-酮-L-葡萄糖酸盐的生成中产生的2-keto-L- 通过在大肠杆菌中转化，从而提高了作为维生素C前体的2-酮-L-聚乙二醇的产率。 构成：yiaE基因编码源自大肠杆菌的2-酮戊二醛还原酶基因。 将yiaE基因插入重组质粒pHD2中。 将插入有yiaE基因的重组质粒pHD2转化大肠杆菌DH5α/ pHD2（KCTC 0507BP）。 在通过葡萄糖代谢产生作为葡萄糖酸的维生素C的前体的2-酮-L-聚乙二醇化时，将2-酮戊二醛还原性缺陷基因导入宿主细胞，以在膜结合的重组菌株中表达葡萄糖还原。

公开(公告)号：KR100320370B1

公开(公告)日：2002-03-21

申请号：KR1019980039405

申请日：1998-09-23

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 염도영 ,  이봉용 ,  함대현 ,  반재구

IPC: C12N15/53

Abstract: 본 발명은 신규한 대장균 유래 2-케토-디-글루코네이트 생산 2,5-다이케토-디-글루코네이트 환원효소(2,5-diketo-D-gluconate reductase)의 유전자 염기서열을 결정하고 이들 효소들의 유전자를 결손시켜 포도당 대사에 의한 비타민 C 제조시 중간산물의 세포내 대사를 저해하여 고수율로 비타민 C 전구체인 2-케토-엘-글로네이트(2-keto-L-gulonate) 생산에 관한 것으로 대장균으로부터 코리네박테리움 속(corynebacterium sp.) 미생물의 2,5-다이케토-디-글루코네이트 환원효소와 글루코노박터 옥시단스(gluconobacter oxydans)의 5-케토-디-글루코네이트 환원효소의 아미노산 배열과 유사성을 보이는 단백질의 유전자인
yqhE ,
yafB 및
yjgU 를 클로닝한 후 이들 유전자 산물의 효소 단백질을 정제한 후 효소활성을 측정하여 상기
yqhE 유전자는 2,5-다이케토-디-글루코네이트 환원효소를 코� �하고
yafB 유전자는 2-케토-디-글루코네이트 생산 2,5-다이케토-디-글루코네이트 환원효소를 코딩하며
yjgU 유전자는 5-케토-디-글루코네이트 환원효소를 코딩하는 유전자임을 검증하므로써
yqhE 유전자,
yafB 유전자 및
yjgU 가 각기 코딩하는 대장균으로부터 유래된 2,5-다이케토-디-글루코네이트 환원효소, 2-케토-디-글루코네이트 생산 2,5-다이케토-디-글루코네이트 환원효소 및 5-케토-디-글루코네이트 환원효소의 존재를 확인하고 이들 효소의 대사경로에 기초하여 2-케토-디-글루코네이트 생산 2,5-다이케토-디-글루코네이트 환원효소의 유전자인
yafB 유전자를 결손시키므로써 대장균내 생물전환에 의한 2-케토-엘-글로네이트의 생산시에 중간산물인 2,5-다이케토-디-글루코네이트의 세포내 대사를 방지하여 비타민 C 전구체인 2-케토-엘-글로네이트의 생산수� �을 향상시키는 뛰어난 효과가 있다.

公开(公告)号：KR1020000020688A

公开(公告)日：2000-04-15

申请号：KR1019980039405

申请日：1998-09-23

Applicant: 한국과학기술연구원

Inventor： 염도영 ,  이봉용 ,  함대현 ,  반재구

IPC: C12N15/53

CPC classification number: C12N9/0012 ,  C12N15/70

Abstract: PURPOSE: A yafB gene that is a gene for 2-keto-D-gluconate producing 2,5-diketo-D-gluconate reductase is defected to prevent metabolism of 2,5-diketo-D-gluconate produced as an intermediate product in the production of 2-keto-L-glonate by transformation in E. coli, thereby production yield of 2-keto-L-glonate as a precursor of vitamin C is enhanced. CONSTITUTION: The yafB gene codes the 2,5-diketo-gluconate reductase gene for production of 2-keto-D-gluconate, which is originated from E. coli. The yafB gene is inserted into a recombinant plasmid pYAFB. The recombinant plasmid pYAFB with the yafB gene inserted thereinto is transformed in a coliform DH5alpha/pYAFB (KCTC 0509BP). In the production of 2-keto-L-glonate as a precursor of vitamin C from gluconate by glucose metabolism, the 2,5-diketo-D-gluconate reductive defective gene is introduced to a host cell to express a glucose reductive in a membrane-bound recombinant strain.

Abstract translation: 目的：作为2-酮-D-葡萄糖酸盐产生2,5-二酮-D-葡萄糖酸还原酶的基因的yafB基因被缺陷以防止作为中间产物产生的2,5-二酮-D-葡萄糖酸盐的代谢 通过在大肠杆菌中转化生产2-酮-L-聚糖，从而提高作为维生素C前体的2-酮-L-聚乙二醇的产率。 构成：yafB基因编码2,5-diketo葡萄糖酸还原酶基因，用于生产来源于大肠杆菌的2-酮-D-葡萄糖酸盐。 将yafB基因插入重组质粒pYAFB中。 将含有yafB基因的重组质粒pYAFB转化到大肠杆菌DH5α/ pYAFB（KCTC 0509BP）中。 在通过葡萄糖代谢产生作为葡萄糖酸的维生素C的前体的2-酮-L-聚乙二醇化时，将2,5-二酮-D-葡萄糖酸还原性缺陷基因导入宿主细胞，以在膜中表达葡萄糖还原 重组菌株。