公开(公告)号：KR1020110092225A

公开(公告)日：2011-08-17

申请号：KR1020110010312

申请日：2011-02-01

Applicant: 한국과학기술원

Inventor： 김정회 ,  손영덕 ,  황진영 ,  정연태

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/52 ,  C07K14/505 ,  C12N15/18

CPC classification number: C07K14/505 ,  C07K14/524 ,  C07K14/705 ,  C12N9/1081 ,  C12N9/1205 ,  C12N9/90 ,  C12P21/005 ,  C12Y501/03014

Abstract: PURPOSE: A method for preparing recombinant glycoprotein is provided to overexpress three kinds of genes in a host cell and to produce glycoprotein with enhanced sialic acid content. CONSTITUTION: A method for preparing glycoprotein with enhanced sialic acid concent comprises: a step of preparing an expression vector containing a gene encoding UDP-GlcNAc 2-epimerase/ManNAc kinase(GNE/MNK), a gene encoding alpha-2,3-sialyltransferase, and a gene encoding a cytidine monophosphate(CMP)- sialic acid transporter; a step of transforming the expression vector to a host cell which produces glycoprotein with sialic acid bond; and a step of culturing the transformant and purifying the recombinant glycoprotein from the transformant.

Abstract translation: 目的：提供重组糖蛋白的制备方法，以过表达宿主细胞中的三种基因，产生唾液酸含量增加的糖蛋白。 构成：用于制备具有增强唾液酸浓度的糖蛋白的方法包括：制备含有编码UDP-GlcNAc 2-差向异构酶/ ManNAc激酶（GNE / MNK）的基因的表达载体的步骤，编码α-2,3唾液酸转移酶 ，以及编码胞苷酸单磷酸（CMP） - 唾液酸转运蛋白的基因; 将表达载体转化为产生具有唾液酸键的糖蛋白的宿主细胞的步骤; 以及培养转化体并从转化体纯化重组糖蛋白的步骤。

公开(公告)号：KR101241322B1

公开(公告)日：2013-03-11

申请号：KR1020110010312

申请日：2011-02-01

Applicant: 한국과학기술원

Inventor： 김정회 ,  손영덕 ,  황진영 ,  정연태

IPC: C12N15/85 ,  C12N15/52 ,  C07K14/505 ,  C12N15/18

CPC classification number: C07K14/505 ,  C07K14/524 ,  C07K14/705 ,  C12N9/1081 ,  C12N9/1205 ,  C12N9/90 ,  C12P21/005 ,  C12Y501/03014

Abstract: 본 발명은 시알산 함량이 높은 재조합 당단백질의 제조 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 263번 아미노산인 아르기닌을 류신으로 치환하거나, 또는 263번 아미노산인 아르기닌을 류신으로 치환하고 266번 아미노산인 아르기닌을 글루타민 또는 트립토판으로 치환하여 점 돌연변이를 유도한 UDP-GlcNAc 2-epimerase/ManNAc kinase(GNE/MNK) 효소는, 시티딘모노포스페이트(cytidine monophosphate, CMP)-시알산의 농도에 상관없이 에피머라제(epimerase)의 활성이 지속적으로 유지되고, 이를 과발현시킨 세포는 세포 내 CMP-시알산의 함량이 증가하며, 특히, 상기 점 돌연변이가 유도된 GNE/MNK, 인간 알파-2,3 시알산당전이효소 및 CMP-시알산 수송단백질 유전자를 동시에 과발현시킨 당단백질(에리스로포이에틴 또는 트롬보포이에틴) 생산 숙주세포에서는 세포 내 CMP-시알산 및 당단백질의 시알산 함량이 증가하므로, 상기 3가지 유전자의 시알산결합을 가진 재조합 당단백질 생산 숙주세포에서의 과발현은 시알산 함량이 증가된 당단백질의 제조에 유용하게 이용될 수 있다.